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Summary
L’entérocolite nécrosante (CEN) est la maladie gastro-intestinale (GI) la plus grave qui survient souvent chez les prématurés, en particulier les nourrissons de très faible poids à la naissance, avec une mortalité élevée et une pathogenèse incertaine. La cause de la CEN peut être liée à des anomalies inflammatoires du système de régulation immunitaire. Un modèle animal NEC est un outil indispensable pour la recherche sur le système immunitaire contre les maladies NEC. Les modèles animaux NEC utilisent généralement des souris néonatales C57BL/6J; Les souris néonatales BALB/c sont rarement utilisées. Des études connexes ont montré que lorsque des souris sont infectées, la différenciation cellulaire Th2 est prédominante chez les souris BALB / c par rapport aux souris C57BL / 6J. Des études ont suggéré que l’apparition et le développement de NEC sont associés à une augmentation des cellules T auxiliaires de type 2 (Th2) et sont généralement accompagnés d’une infection. Par conséquent, cette étude a utilisé des souris BALB/c néonatales pour induire un modèle NEC présentant des caractéristiques cliniques et des changements pathologiques intestinaux similaires à ceux observés chez les enfants atteints de NEC. Une étude plus approfondie est justifiée pour déterminer si ce modèle animal pourrait être utilisé pour étudier les réponses des cellules Th2 dans la NEC.
Abstract
L’entérocolite nécrosante (CEN) est la maladie gastro-intestinale (GI) la plus grave qui survient souvent chez les prématurés, en particulier les nourrissons de très faible poids à la naissance, avec une mortalité élevée et une pathogenèse incertaine. La cause de la CEN peut être liée à des anomalies inflammatoires du système de régulation immunitaire. Un modèle animal NEC est un outil indispensable pour la recherche sur le système immunitaire contre les maladies NEC. Les modèles animaux NEC utilisent généralement des souris néonatales C57BL/6J; Les souris néonatales BALB/c sont rarement utilisées. Des études connexes ont montré que lorsque des souris sont infectées, la différenciation cellulaire Th2 est prédominante chez les souris BALB / c par rapport aux souris C57BL / 6J. Des études ont suggéré que l’apparition et le développement de NEC sont associés à une augmentation des cellules T auxiliaires de type 2 (Th2) et sont généralement accompagnés d’une infection. Par conséquent, cette étude a utilisé des souris BALB/c néonatales pour induire un modèle NEC présentant des caractéristiques cliniques et des changements pathologiques intestinaux similaires à ceux observés chez les enfants atteints de NEC. Une étude plus approfondie est justifiée pour déterminer si ce modèle animal pourrait être utilisé pour étudier les réponses des cellules Th2 dans la NEC.
Introduction
L’entérocolite nécrosante (CEN), la maladie gastro-intestinale (GI) la plus grave, survient chez la plupart des prématurés (>90 %), en particulier ceux qui ont un très faible poids à la naissance (VLBW)1. Chez les nourrissons atteints de VLBW, l’incidence de la maladie varie de 10% à 12%, et la mortalité des enfants diagnostiqués avec NEC est comprise entre 20% et 30%2,3. La cause de la NEC peut être liée à des lésions muqueuses, à l’invasion par des bactéries pathogènes et à l’alimentation intestinale, ce qui peut entraîner des réponses inflammatoires et l’induction de lésions intestinales chez les hôtes sensibles3. La pathogenèse de NEC n’est pas claire. Des recherches pertinentes montrent que la réponse immunitaire du nourrisson affecté est anormale et que la susceptibilité génétique, la tension microvasculaire et les changements bactériens intestinaux peuvent jouer un rôle important dans la maladie3.
Le modèle animal NEC est un outil indispensable pour la recherche sur la pathogenèse du NEC. Les espèces animales utilisées pour les modèles NEC sont les porcs, les rats et les souris. Cependant, en raison de la longue période de gestation, des cycles de croissance et des coûts élevés, ces dernières années, les porcs n’ont pas été le premier choix pour les modèles NEC et ont été remplacés par des rats ou des souris4. Comme il existe des différences dans le contexte immunitaire de différentes souches de souris5, différentes études doivent utiliser différentes souches de souris pour établir des modèles animaux NEC. Les souris BALB/ c ont une caractéristique importante; lorsqu’elles sont infectées ou font face à des dommages externes, la polarisation des cellules TH2 pendant l’infection chez la souris est significativement plus forte que celle des autres souches de souris6,7,8. Les lymphocytes T auxiliaires jouent un rôle crucial dans l’apparition et la progression de la NEC, en particulier le développement des cellules TH23,9,10,11. Par conséquent, cette étude a utilisé des souris BALB / c pour établir le modèle NEC, ce qui pourrait être utile pour la recherche sur la maladie NEC sur les cellules T.
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Protocol
Cette recherche a été approuvée par le Comité d’éthique médicale du Guangzhou Women and Children’s Medical Center (NO. 174A01) et le Comité d’éthique animale du Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center (IACUC-G160100). Tous les animaux ont été élevés dans la même pièce dans un environnement spécifique exempt d’agents pathogènes (FPS), et des expériences ont été menées dans un environnement conventionnel. Les souris utilisées pour la reproduction étaient âgées de 7 à 8 semaines; les souris pour induire le NEC (n = 72) ont été séparées du barrage le jour 4, et les mères (n = 14) ont été gardées dans la cage d’origine et ont nourri les souris du groupe témoin (Suite) (n = 24).
1. Préparation des réactifs et des dispositifs
- Préparer le substitut de lait pour les souris BALB/c dans le rapport correspondant (lait en poudre pour bébé prématuré: lait de chèvre en poudre = 2:1).
REMARQUE : Les compositions nutritionnelles finales du lait maternisé12 sont présentées dans le tableau 1. - Solution de LPS (2,5 mg/mL)
- Dissoudre un total de 10 mg de poudre de LPS dans 4 mL d’eau stérilisée à double distillation, bien mélanger et conserver au réfrigérateur à -20 °C après aliquote.
REMARQUE: La solution LPS est stockée dans l’obscurité à 2-8 ° C pour une utilisation immédiate ou à -20 ° C pour un stockage à long terme.
- Dissoudre un total de 10 mg de poudre de LPS dans 4 mL d’eau stérilisée à double distillation, bien mélanger et conserver au réfrigérateur à -20 °C après aliquote.
2. Induire une entérocolite nécrosante chez les souris BALB/c néonatales
- Nourrissez les souris néonatales.
- Gardez les souris néonatales dans la même cage que la mère, nourries par la mère les jours 0 à 4.
- La nuit du jour 4 (lorsque les souris néonatales pèsent 2,5 à 3 g), séparez les souris néonatales du groupe NEC de la mère pour induire la NEC, gardez-les dans un incubateur d’animaux et nourrissez-les avec du lait maternisé. Cependant, le groupe Cont. est autorisé à rester avec le barrage et à être nourri par celui-ci.
REMARQUE: Les souris néonatales séparées de la mère doivent être élevées dans un incubateur en raison de leur faible régulation de la température corporelle.
- Préparez le tube de gavage en le faisant tremper dans des récipients d’alcool à 75% pendant 1 à 2 minutes et lavez-les deux fois dans de l’eau propre et double distillée.
REMARQUE: Pour éviter la contamination croisée entre les souris, le processus ci-dessus doit être effectué après avoir nourri chaque souris. - Induire le modèle NEC.
- Prenez les souris néonatales du barrage le jour 4 et jeûnez-les pendant une nuit.
- Gavage les souris avec du LPS (20-30 μL à la fois) et les nourrir avec du lait maternisé le jour 5 (40-50 μL à la fois).
- À partir du jour 5, soumettez les souris à un cycle hypoxie-réoxygénation-froid-choc deux fois par jour pendant 5 jours. Placez les souris dans un dispositif d’hypoxie à 5% O2 pendant 90 s et réoxygénez-les pendant 3 min; répétez ce processus cinq fois. Ensuite, placez les souris dans un environnement à 4 °C pendant 15 minutes, puis transférez-les dans un incubateur. Voir figure 1A,B pour le processus d’induction.
REMARQUE: Un cycle d’hypoxie-réoxygénation-stimulation par le froid a été effectué une fois le matin et une fois l’après-midi. Un mélange de 5 % d’O2 et de 95 % de N2 a été préparé dans le récipient et la concentration a été mesurée à l’aide d’un détecteur d’oxygène.
- Observez attentivement toutes les souris, pesez-les tous les jours, enregistrez la survie des souris pendant la période d’induction et enregistrez les caractéristiques des selles (avec ou sans selles collantes / selles sanglantes).
REMARQUE: Le modèle NEC établi dure 5 jours. - Le jour 10 ou plus tôt, lorsque les souris présentent des symptômes de NEC (iléus, hématochézie, diarrhée)13, euthanasier les souris par anesthésie par inhalation avec de l’isoflurane, puis prélever immédiatement le tissu intestinal. Ne prélevez pas de tissus sur les souris mortes spontanément.
REMARQUE: Dans cette étude, le point final de l’euthénasie de la souris a été adapté lorsque la souris a présenté une hématochézie et une cyanose de tout le corps.
3. Gavage la souris
- Fixez la tête de la souris en tenant la sonde gastrique dans la main droite. Insérez la sonde gastrique dans le coin gauche de la bouche de la souris.
REMARQUE: La tête a été fixée avec l’index sur la tête de la souris et doucement pressée vers l’arrière et vers le bas pour empêcher la souris de se pencher vers l’avant pendant l’opération et d’affecter l’insertion de la sonde gastrique. - Déplacez lentement le tube vers le centre de la bouche. Après avoir inséré le tube d’environ 2-3 cm, poussez 40-50 μL de formule ou 20-30 μL de LPS dans le tube digestif. Voir figure 2A,B pour le gavage.
REMARQUE: Dans des circonstances normales, la sonde gastrique est insérée dans le tube digestif en douceur. Si la souris a un fort réflexe de vomissement, la sonde gastrique a été insérée dans la trachée par erreur. La sonde gastrique doit être retirée doucement et la souris doit être laissée reposer pendant un certain temps avant de réessayer de la gavage. De plus, la procédure de gavage est utilisée pour induire le modèle de NEC avant l’euthanasie des souris.
4. Prélever des échantillons de tissu intestinal frais pour la coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H & E)
- Immerger le tissu frais de l’iléon de la souris dans 10% de formol pendant 24 h.
- Incorporer les tissus dans de la paraffine et les découper en sections de 4 μm.
- Déparaffinez les sections dans le xylène et réhydratez-les successivement en éthanol absolu, 95% d’éthanol, 80% d’éthanol, 70% d’éthanol et eau distillée, en trempant pendant 5 min à chaque étape. Colorez les sections avec une solution d’hématoxyline pendant 5 min et différenciez-les en acide chlorhydrique à 1% dans de l’alcool à 75% pendant 5 s. Enfin, colorez-les avec une solution d’éosine pendant 1 min.
REMARQUE: Après coloration avec une solution d’hématoxyline, il doit être différencié avec de l’acide chlorhydrique à 1% dans l’éthanol pour éliminer la solution d’hématoxyline excessivement liée et le colorant hématoxyline cytoplasmique. La concentration d’acide chlorhydrique à 1% convient au tissu intestinal. - Examiner l’histopathologie du tissu intestinal à un grossissement de 40x.
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Representative Results
Le modèle BALB/c de souris NEC a été induit par l’alimentation au lait maternisé, l’alimentation LPS, l’hypoxie et la stimulation par le froid. Au cours de la période d’induction, les souris ont été observées pour la pathologie intestinale, les caractéristiques des selles, les changements de poids corporel et la survie quotidienne. Images représentatives de l’intestin grêle pendant l’induction de la NEC; les chiffres de l’image représentent le score de pathologie intestinale de 0 (épithélium normal) à 4 (le plus grave) (Figure 3A). Le score de pathologie intestinale était significativement plus élevé dans le groupe NEC que dans le groupe Cont. (Figure 3B). Les chiffres de l’image représentent les scores des selles de 0 (granulés bien formés) à 3 (selles liquides) (figure 3C). Le jour 10, les scores de selles des groupes NEC étaient significativement plus élevés dans le groupe NEC, ce qui indique que le dysfonctionnement intestinal dans le groupe NEC était plus grave (Figure 3D). Le jour 5, le premier jour de l’induction du modèle NEC, il n’y avait pas de différence significative dans la taille du corps entre les deux groupes. Cependant, au jour 10, les souris du groupe NEC étaient significativement plus minces et plus petites de la tête à la queue que les souris du groupe Cont. (Figure 4A).
Au cours des 5 jours au cours desquels le modèle a été établi, le poids des souris du groupe NEC a augmenté lentement ou même montré une croissance négative, et le taux de survie des souris du groupe NEC a progressivement diminué par rapport au groupe Cont. (Figure 4B, C). En outre, un autre lot de souris a été utilisé pour induire le modèle NEC, mais sans collecter les tissus; au jour 13, toutes les souris de ce groupe NEC étaient mortes et la courbe de survie était significativement réduite (figure supplémentaire S1). La figure 5A montre la morphologie et les résultats pathologiques (nécrose du tissu de la muqueuse intestinale) de la zone iléocécale réséquée du tissu intestinal chez les patients NEC dans cet hôpital. Dans cette étude, les souris du groupe NEC (1/13) ont développé une hémorragie iléocécale et une nécrose (Figure 5B).
Figure 1 : Induction du processus du modèle BALB/c NEC. (A) Les souris du groupe NEC ont été séparées de la mère à la naissance jusqu’à l’âge de 4 jours (le jour 4) et ont jeûné cette nuit-là. Le modèle NEC a été induit à partir du jour 5 après la naissance et a duré 5 jours. Des échantillons de tissu intestinal ont été prélevés le jour 10 ou plus tôt. Les souris du groupe Cont. ont été logées et nourries par le barrage. (B) La séquence des opérations pour chaque jour après l’induction du modèle NEC. Abréviations : Cont. = contrôle; NEC = entérocolite nécrosante; LPS = lipopolysaccharide. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : Gavage gastrique. (A) Un dispositif de gavage spécialisé a été utilisé dans cette étude, qui a été combiné avec un tube en plastique et une seringue. (B) Le tube de gavage est entré par le coin de l’embouchure à un angle de 45° par rapport à la ligne verticale. (C) Le tube a été lentement déplacé vers le centre de la bouche de la souris pour s’assurer que la sonde gastrique et l’œsophage étaient au même niveau vertical. Abréviations : D= diamètre. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
Figure 3 : Modèle NEC de souris BALB/c. (A) Photomicrographies du score de pathologie intestinale des deux groupes, par exemple, montrant une muqueuse intacte et normale dans le groupe Cont. (score 0), une séparation légère de gonflement sous-muqueux ou lamina propria dans deux groupes (score 1), une séparation sous-muqueuse modérée et/ou lamina propria dans le groupe NEC (score 2), une séparation sous-muqueuse sévère et/ou lamina propria dans le groupe NEC (score 3), disparition des villosités intestinales avec nécrose intestinale dans le groupe NEC (score 4). (B) Les scores de pathologie intestinale chez les souris après induction de nec étaient plus élevés que ceux du groupe Cont. (n = 9 dans le groupe Cont., n = 35 dans le groupe NEC, *** P < 0,001 avec le test t de Student). (C) Photomicrographies des scores de selles de deux groupes, par exemple, montrant des granulés bien formés dans le groupe Cont. (score 0), des selles formées dans deux groupes (score 1), des selles semi-formées dans le groupe NEC (score 2) et des selles liquides dans le groupe NEC (score 3). (D) Les scores aux selles dans le groupe NEC étaient significativement plus élevés que dans le groupe Cont. (n = 6 dans le groupe Cont., n = 13 dans le groupe NEC, *** P < 0,001 avec le test t de Student). Le triangle rouge représente la séparation de la muqueuse et de la lamina propria, et la flèche noire pointe vers les excréments de souris. Barres d’échelle = 50 μm. Abréviations: Cont. = contrôle; NEC = entérocolite nécrosante; HE = hématoxyline et éosine. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
Figure 4: Comparaison de la forme du corps et de la survie des souris entre le groupe Cont. et le groupe NEC. (A) L’apparition des deux groupes de souris au jour 5 et au jour 10. (B) Cette section montre les changements de poids des souris en deux groupes au fil du temps; l’axe des x représente le nombre de jours après la naissance des souris et l’axe des y représente les changements de poids des souris; **P < 0,01, ***P < 0,001 avec le test t de Student pour comparer le groupe Cont. (n = 10) et le groupe NEC (n = 27) (C) Cette section montre les courbes de survie des souris du groupe témoin (n = 10) et du groupe NEC (n = 25). Abréviations : Cont. = contrôle; NEC = entérocolite nécrosante. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
Figure 5 : Hémorragie iléocécale chez les enfants atteints de NEC et les souris atteintes de NEC. (A) Hémorragie et nécrose de la région iléocécale chez les enfants atteints de NEC. (B) Hémorragie et nécrose dans la région iléocécale des souris atteintes de NEC (1/13); cependant, les intestins des souris du groupe Cont. étaient normaux, sans hémorragie ni nécrose. Le triangle noir fait référence à l’hémorragie intestinale et à la nécrose, et la flèche rouge montre l’hémorragie et la nécrose de la région iléocécale. Barres d’échelle = 50 μm. Abréviations: Cont. = contrôle; NEC = entérocolite nécrosante. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
| Composition | Souris (g/L) | Substitut du lait (g/L) |
| protéine | 69-118 | 100 |
| graisse | 93-175 | 100 |
| glucide | 28-37 | 50 |
| calcium | 0.97-6.2 | 2.84 |
| phosphore | 1.6-2.72 | 1.62 |
| sodium | 0.66-1.4 | 1 |
| potassium | 1.08-1.7 | 1.2 |
| chlorure | 1.17-1.76 | 1.76 |
| magnésium | 0.0001-0.3 | >0,12 |
| zinc | 0.009-0.055 | 0.018 |
| fer | 0.004-0.007 | 0.017 |
| cuivre | 0.0017-0.007 | 0.0018 |
Tableau 1 : Ingrédients laitiers du lait maternisé.
Figure supplémentaire S1 : La courbe de survie a été significativement réduite dans le groupe NEC de sorte que toutes les souris sont mortes spontanément (n = 5 dans le groupe Cont., n = 10 dans le groupe NEC). Abréviations : Cont. = contrôle; NEC = entérocolite nécrosante. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.
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Discussion
La NEC est l’urgence du système gastro-intestinal la plus courante chez les nouveau-nés, avec une incidence et une mortalité élevées, en particulier chez les prématurés1,2,3. Cependant, sa pathogenèse n’est pas encore claire. On croit actuellement que les lésions muqueuses, l’invasion d’agents pathogènes et l’alimentation entérale sont des facteurs de risque élevés pour NEC3. À ce jour, les animaux utilisés pour le modèle NEC sont principalement des porcs, des rats et des souris. La plupart des études ont utilisé des souris néonatales C57BL/6 pour induire NEC13,14,15,16, et très peu d’études ont utilisé des souris néonatales BALB/c pour induire la NEC. Cependant, les souris BALB / c ont l’avantage de la polarisation des cellules Th6,7,8, ce qui justifie une étude plus approfondie pour déterminer si elles peuvent être un bon modèle NEC pour la recherche sur les cellules Th de la maladie.
Nous nous sommes référés à la norme de score pathologique de Nadler du modèle NEC17 et avons constaté que le score du groupe NEC était significativement plus élevé que celui du groupe témoin. Un score ≥ 2 indique NEC, et le taux de réussite de l’induction de NEC est de 38-50%, ce qui est inférieur au taux de réussite de 77% de la modélisation NEC dans l’étude de Caplan et al. (DOI: 10.3109 / 15513819409037698). Nous avons également évalué les scores de selles18 des deux groupes de souris et avons constaté que les scores du groupe NEC étaient plus élevés que ceux du groupe témoin. Plus le score est élevé, plus le dysfonctionnement intestinal est grave. Toutes ces données montrent que la mise en place du modèle NEC a été couronnée de succès. En outre, il est encourageant de constater que le modèle murin BALB/c néonatal de NEC peut simuler le NEC humain dans une certaine mesure. L’hémorragie et la nécrose se produisent dans les intestins des enfants atteints de NEC3,19; des conditions pathologiques similaires ont été observées dans ce modèle.
Gavage est l’étape clé pour induire NEC dans le modèle de souris. Si l’opération de gavage n’était pas maîtrisée avec compétence, il était facile de placer par erreur la sonde gastrique dans la trachée et de provoquer la mort de la souris. Pendant le gavage gastrique, le pouce gauche, le majeur et l’annulaire ont été utilisés pour serrer les deux côtés du torse de la souris, et l’index a été placé sur la tête pour fixer la souris en place. Il s’agissait d’empêcher la souris de se déplacer et d’endommager l’œsophage de la sonde gastrique. La sonde gastrique a été insérée à partir du coin gauche de la bouche de la souris. Ce n’est que lorsque la sonde gastrique pénètre dans l’œsophage en douceur sans résistance que nous pouvons continuer à l’insérer. Le LPS ou le lait maternisé ne doit être injecté qu’après avoir inséré la sonde gastrique à 2-3 cm de la lèvre inférieure de la souris.
La durée de l’hypoxie doit être surveillée attentivement. Dans cette étude, l’hypoxie a duré 90 s à chaque fois. Si l’hypoxie est trop longue, les souris ne pourront pas la tolérer et mourront. Ce modèle peut être utilisé pour étudier les cellules immunitaires liées au NEC, en particulier les cellules TH1 et TH23,9,10,11,20. À l’avenir, nous prévoyons d’étudier si ce modèle est utile pour étudier les réponses des cellules Th2 dans la NEC. En outre, cette étude a également introduit une nouvelle méthode de notation des selles pour évaluer le dysfonctionnement intestinal chez les souris atteintes de NEC18. Cependant, il y a certaines limites à cette étude. Par exemple, le taux de réussite du modèle n’était pas très élevé. Des efforts sont en cours pour améliorer la méthode de modélisation BALB/c NEC afin d’augmenter le taux de réussite en ajustant le niveau d’hypoxie de 5% O2 à 1% O2, comme décrit précédemment15.
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Disclosures
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Acknowledgments
Les auteurs remercient la Banque de ressources biologiques cliniques du Centre médical pour femmes et enfants de Guangzhou pour avoir fourni l’échantillon clinique et le Centre des animaux de laboratoire des biosciences de Guangzhou Forevergen pour avoir fourni des souris. Cette recherche a été soutenue par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine 81770510 (R.Z.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Absolute ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | 100092683 | |
| Goat Milk powder | Petag | 71795558417 | |
| HE dye solution | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | G1003 | |
| Isoflurane | RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD. | R510 | |
| LPS | Sigma-Adrich | L2880 | |
| Medical oxygen | various | various | |
| Microscope | NIKON | NIKON imaging system (DS-Ri2) | |
| Neutral resin | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | 10004160 | |
| Paraffin | various | various | |
| Premature baby milk powder | Abbott | 57430 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | 10023418 | |
| 1% Hydrochloric acid | various | various | |
| 10% Formalin | LEAGENE | DF0110 |
References
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Médecine Numéro 177 Entérocolite nécrosante souris BALB/c Immunologie Cellules T auxiliaires de type 2Erratum
Formal Correction: Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis
Posted by JoVE Editors on 03/07/2022.
Citeable Link.
An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
