ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …
Summary
Некротизирующий энтероколит (НЭК) является наиболее тяжелым желудочно-кишечным (ЖКТ) заболеванием, которое часто встречается у недоношенных детей, особенно у младенцев с очень низкой массой тела при рождении, с высокой смертностью и неясным патогенезом. Причина НЭК может быть связана с воспалительными нарушениями иммунной регуляторной системы. Модель животных NEC является незаменимым инструментом для иммунных исследований болезни NEC. На животных моделях NEC обычно используются неонатальные мыши C57BL/6J; BALB/c неонатальных мышей используется редко. Связанные с этим исследования показали, что когда мыши инфицированы, дифференцировка клеток Th2 преобладает у мышей BALB / c по сравнению с мышами C57BL / 6J. Исследования показали, что возникновение и развитие НЭК связаны с увеличением Т-хелперов типа 2 (Th2) клеток и, как правило, сопровождаются инфекцией. Поэтому в этом исследовании использовались неонатальные мыши BALB/ c для индуцирования модели NEC с аналогичными клиническими характеристиками и патологическими изменениями кишечника, как те, которые наблюдаются у детей с NEC. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, может ли эта животная модель быть использована для изучения реакций клеток Th2 в NEC.
Abstract
Некротизирующий энтероколит (НЭК) является наиболее тяжелым желудочно-кишечным (ЖКТ) заболеванием, которое часто встречается у недоношенных детей, особенно у младенцев с очень низкой массой тела при рождении, с высокой смертностью и неясным патогенезом. Причина НЭК может быть связана с воспалительными нарушениями иммунной регуляторной системы. Модель животных NEC является незаменимым инструментом для иммунных исследований болезни NEC. На животных моделях NEC обычно используются неонатальные мыши C57BL/6J; BALB/c неонатальных мышей используется редко. Связанные с этим исследования показали, что когда мыши инфицированы, дифференцировка клеток Th2 преобладает у мышей BALB / c по сравнению с мышами C57BL / 6J. Исследования показали, что возникновение и развитие НЭК связаны с увеличением Т-хелперов типа 2 (Th2) клеток и, как правило, сопровождаются инфекцией. Поэтому в этом исследовании использовались неонатальные мыши BALB/ c для индуцирования модели NEC с аналогичными клиническими характеристиками и патологическими изменениями кишечника, как те, которые наблюдаются у детей с NEC. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, может ли эта животная модель быть использована для изучения реакций клеток Th2 в NEC.
Introduction
Некротический энтероколит (НЭК), наиболее тяжелое заболевание желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), встречается у большинства недоношенных детей (>90%), особенно у детей с очень низкой массой тела при рождении (СНОБВ)1. У младенцев с СБНВ заболеваемость колеблется от 10% до 12%, а смертность детей с диагнозом НЭК составляет от 20% до 30%2,3. Причина НЭК может быть связана с травмами слизистой оболочки, инвазией патогенных бактерий и питанием кишечника, что может привести к воспалительным реакциям и индукции повреждений кишечника у восприимчивых хозяев3. Патогенез НЭК неясен. Соответствующие исследования показывают, что иммунный ответ пострадавшего ребенка является ненормальным, а генетическая восприимчивость, микрососудистое напряжение и бактериальные изменения кишечника могут играть важную роль в заболевании3.
Животная модель NEC является незаменимым инструментом для исследования патогенеза NEC. Виды животных, используемые для моделей NEC, - это свиньи, крысы и мыши. Однако из-за длительного периода беременности, циклов роста и высоких затрат в последние годы свиньи не были первым выбором для моделей NEC и были заменены крысами или мышами4. Поскольку существуют различия в иммунном фоне различных штаммов мышей5, в разных исследованиях необходимо использовать разные штаммы мышей для установления моделей животных NEC. Мыши BALB/c имеют важную особенность; когда они заражаются или справляются с внешним повреждением, поляризация клеток TH2 при заражении у мышей значительно сильнее, чем у других штаммов мышей6,7,8. Т-хелперы играют решающую роль в возникновении и прогрессировании НЭК, особенно в развитии клеток TH23,9,10,11. Поэтому в этом исследовании использовались мыши BALB / c для создания модели NEC, которая может быть полезна для исследований болезни NEC на Т-клетках.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Это исследование было одобрено Комитетом по медицинской этике Медицинского центра женщин и детей Гуанчжоу (NO 174A01) и Комитетом по этике животных Центра лабораторных животных Гуанчжоу Forevergen Biosciences (IACUC-G160100). Все животные были выведены в одной комнате в определенной среде, свободной от патогенов (SPF), и эксперименты проводились в обычной среде. Мышам, используемым для разведения, было 7-8 недель; мышей для индуцирования NEC (n = 72) отделяли от плотины на 4-й день, а плотины (n = 14) держали в исходной клетке и выхаживали контрольных (Cont.) групп мышей (n = 24).
1. Подготовка реагентов и приспособлений
- Приготовьте заменитель молока для мышей BALB/c в соответствующем соотношении (сухое молоко недоношенного ребенка: сухое козье молоко = 2:1).
ПРИМЕЧАНИЕ: Окончательные питательные композиции молочных смесей12 приведены в таблице 1. - Раствор ЛПС (2,5 мг/мл)
- Растворите в общей сложности 10 мг порошка ЛПС в 4 мл стерилизованной двойной дистиллированной воды, хорошо перемешайте и храните в холодильнике при -20 °C после аликотирования.
ПРИМЕЧАНИЕ: Раствор ЛПС хранят в темноте при 2-8 °C для немедленного использования или при -20 °C для длительного хранения.
- Растворите в общей сложности 10 мг порошка ЛПС в 4 мл стерилизованной двойной дистиллированной воды, хорошо перемешайте и храните в холодильнике при -20 °C после аликотирования.
2. Индуцировать некротизирующий энтероколит у неонатальных мышей BALB/c
- Кормите неонатальных мышей.
- Держите неонатальных мышей в одной клетке с плотиной, выхаженной плотиной в дни 0-4.
- В ночь на 4-й день (когда неонатальные мыши весят 2,5-3 г) отделите неонатальных мышей в группе NEC от плотины, чтобы вызвать NEC, держите их в инкубаторе для животных и кормите их смесью. Тем не менее, группе Cont. разрешено оставаться и питаться плотиной.
ПРИМЕЧАНИЕ: Неонатальные мыши, которые отделены от плотины, должны быть выращены в инкубаторе из-за их слабой регуляции температуры тела.
- Подготовьте пластырь, замочив его в 75% спиртовых контейнерах на 1-2 мин и дважды промыв их в чистой, дважды дистиллированной воде.
ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы избежать перекрестного загрязнения среди мышей, вышеуказанный процесс должен быть выполнен после кормления каждой мыши. - Индуцировать модель NEC.
- Возьмите неонатальных мышей из плотины на 4-й день и постите их на одну ночь.
- Дайте мышам ЛПС (20-30 мкл за раз) и кормите их смесью на 5-й день (40-50 мкл за раз).
- Начиная с 5-го дня, подвергайте мышей циклу гипоксии-реоксигенации-холода-шока два раза в день в течение 5 дней. Поместите мышей в устройство для гипоксии при 5% O2 в течение 90 с и реоксигенируйте их в течение 3 мин; Повторите этот процесс пять раз. Затем поместите мышей в среду с температурой 4 °C на 15 минут, а затем перенесите их в инкубатор. См. рисунок 1A,B для индукционного процесса.
ПРИМЕЧАНИЕ: Цикл гипоксии-реоксигенации-стимуляции холода проводился один раз утром и один раз во второй половине дня. В контейнере готовили смесь 5% O2 с 95% N2 , а концентрацию измеряли с помощью детектора кислорода.
- Внимательно наблюдайте за всеми мышами, взвешивайте их каждый день, записывайте выживаемость мышей в течение индукционного периода и записывайте характеристики стула (с липким стулом или без него / кровавым стулом).
ПРИМЕЧАНИЕ: Установленная модель NEC длится 5 дней. - На 10-й день или ранее, когда у мышей проявятся симптомы НЭК (илеус, гематохезия, диарея)13, усыпляют мышей путем ингаляционной анестезии изофлураном, затем немедленно собирают кишечную ткань. Не собирайте ткани у мышей, которые погибли спонтанно.
ПРИМЕЧАНИЕ: В этом исследовании конечная точка эвтеназии мышей была адаптирована, когда мышь проявляла гематохезию и цианоз всего тела.
3. Зажгите мышь
- Зафиксируйте головку мыши, держа желудочный зонд в правой руке. Вставьте желудочный зонд из левого угла рта мыши.
ПРИМЕЧАНИЕ: Головка была закреплена указательным пальцем на голове мыши и осторожно нажата назад и вниз, чтобы мышь не сгибалась вперед во время операции и не влияла на введение желудочного зонда. - Медленно переместите трубку к центру рта. После введения в трубку примерно 2-3 см протолкните в пищеварительный тракт 40-50 мкл формулы или 20-30 мкл ЛПС. Смотрите рисунок 2A,B для gavage.
ПРИМЕЧАНИЕ: При нормальных обстоятельствах желудочный зонд вводится в пищеварительный тракт плавно. Если у мыши сильный рвотный рефлекс, желудочный зонд был введен в трахею по ошибке. Желудочный зонд должен быть осторожно вытащен, и мыши дать отдохнуть некоторое время, прежде чем пытаться снова принять участие. Кроме того, процедура gavage используется для индуцирования модели NEC перед эвтаназией мышей.
4. Соберите свежие образцы кишечной ткани для окрашивания гематоксилином и эозином (H & E)
- Погружайте свежую ткань подвздошной кишки в 10% формалин в течение 24 ч.
- Вставьте ткани в парафин и нарежьте их на 4 мкм срезы.
- Депарафинизируйте срезы в ксилоле и последовательно регидратируйте их в абсолютном этаноле, 95% этаноле, 80% этаноле, 70% этаноле и дистиллированной воде, замачивая в течение 5 мин на каждой стадии. Окрашивают срезы раствором гематоксилина в течение 5 мин и дифференцируют их в 1% соляной кислоте в 75% спирте в течение 5 с. Наконец, окрашивают их раствором эозина в течение 1 мин.
ПРИМЕЧАНИЕ: После окрашивания раствором гематоксилина его необходимо дифференцировать 1% соляной кислотой в этаноле для удаления чрезмерно связанного раствора гематоксилина и цитоплазматического гематоксилина. Концентрация 1% соляной кислоты подходит для тканей кишечника. - Исследуем гистопатологию кишечной ткани при 40-кратном увеличении.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Модель NEC для мышей BALB/c была индуцирована искусственным вскармливанием, кормлением LPS, гипоксией и стимуляцией холода. В течение индукционного периода у мышей наблюдалась патология кишечника, характеристики стула, изменения массы тела и ежедневная выживаемость. Репрезентативные изображения тонкой кишки во время индукции НЭК; цифры на рисунке представляют оценку патологии кишечника от 0 (нормальный эпителий) до 4 (самый тяжелый) (рисунок 3А). Оценка патологии кишечника была значительно выше в группе NEC, чем в группе Cont. (рисунок 3B). Цифры на рисунке представляют оценки стула от 0 (хорошо сформированные гранулы) до 3 (жидкий стул) (рисунок 3C). На 10-й день показатели стула в группах NEC были значительно выше в группе NEC, что указывает на то, что кишечная дисфункция в группе NEC была более серьезной (рисунок 3D). На 5-й день, в первый день индукции модели NEC, не было существенной разницы в размерах тела между двумя группами. Однако на 10-й день мыши в группе NEC были значительно тоньше и меньше от головы до хвоста, чем мыши в группе Cont. (рисунок 4A).
В течение 5 дней, в течение которых была установлена модель, вес мышей в группе NEC увеличивался медленно или даже демонстрировал отрицательный рост, а выживаемость мышей в группе NEC постепенно снижалась по сравнению с группой Cont. (рисунок 4B, C). Кроме того, другая партия мышей была использована для индуцирования модели NEC, но без сбора тканей; к 13-му дню все мыши в этой группе NEC умерли, и кривая выживаемости была значительно снижена (дополнительный рисунок S1). На фиг.5А показана морфология и патологические результаты (некроз ткани слизистой оболочки кишечника) резецированной илеоцекальной области кишечной ткани у пациентов НЭК в этой больнице. В этом исследовании у мышей в группе NEC (1/13) развилось илеоцекальное кровоизлияние и некроз (рисунок 5B).
Рисунок 1: Индукция модельного процесса BALB/c NEC. (A) Мышей в группе NEC отделяли от плотины при рождении до тех пор, пока им не исполнилось 4 дня (на 4-й день), и они голодали в ту ночь. Модель NEC была индуцирована с 5-го дня после рождения и продолжалась в течение 5 дней. Образцы кишечной ткани были собраны на 10-й день или ранее. Мыши в группе Cont. были размещены и выхажены у плотины. (B) Последовательность операций за каждый день после индуцирования модели NEC. Сокращения: Продолжение = контроль; NEC = некротизирующий энтероколит; ЛПС = липополисахарид. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2: Желудочный оваж. (А) В этом исследовании использовалось специализированное устройство, которое сочеталось с пластиковой трубкой и шприцем. (B) Проходная трубка, введенная от угла рта под углом 45° к вертикальной линии. (C) Трубку медленно перемещали к центру рта мыши, чтобы убедиться, что желудочный зонд и пищевод находятся на одном вертикальном уровне. Сокращения: D= диаметр. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3: Модель NEC для мышей BALB/c. (A) Фотомикрофотографы оценки патологии кишечника из двух групп, например, показывающие неповрежденную и нормальную слизистую оболочку в группе Cont. (оценка 0), легкое разделение подслизистой или lamina propria в двух группах (оценка 1), умеренное разделение подслизистой и/или lamina propria в группе NEC (оценка 2), тяжелое разделение подслизистой и/или lamina propria в группе NEC (оценка 3), исчезновение ворсинок кишечника при некрозе кишечника в группе НЭК (оценка 4). (B) Показатели кишечной патологии у мышей после индукции NEC были выше, чем у группы Cont. (n = 9 в группе Cont., n = 35 в группе NEC, *** P < 0,001 с t-тестом Стьюдента). (C) Микрофотографы оценок стула из двух групп, например, показывающие хорошо сформированные гранулы в группе Cont. (оценка 0), сформированные стулы в двух группах (оценка 1), полуформованный стул в группе NEC (оценка 2) и жидкий стул в группе NEC (оценка 3). (D) Оценки стула в группе NEC были значительно выше, чем в группе Cont. (n = 6 в группе Cont., n = 13 в группе NEC, *** P < 0,001 с t-тестом Стьюдента). Красный треугольник представляет собой разделение слизистой и lamina propria, а черная стрелка указывает на фекалии мыши. Шкала баров = 50 мкм. Аббревиатуры: Cont. = control; NEC = некротизирующий энтероколит; HE = гематоксилин и эозин. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 4: Сравнение формы тела и выживаемости мышей между группой Cont. и группой NEC. (A) Появление двух групп мышей на 5-й и 10-й день. (B) В этом разделе показаны изменения веса мышей в двух группах с течением времени; ось X представляет количество дней после рождения мышей, а ось Y представляет изменения веса мышей; **P < 0,01, ***P < 0,001 с t-тестом Стьюдента для сравнения группы Cont. (n = 10) и группы NEC (n = 27) (C) В этом разделе показаны кривые выживаемости мышей в контрольной группе (n = 10) и группе NEC (n = 25). Сокращения: Продолжение = контроль; NEC = некротизирующий энтероколит. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 5: Илеоцекальное кровоизлияние у детей с НЭК и мышей с НЭК. (А) Кровоизлияние и некроз илеоцекальной области у детей с НЭК. (B) Кровоизлияние и некроз в илеоцекальной области мышей с NEC (1/13); однако кишечник мышей в группе Cont. был нормальным, без кровоизлияний и некроза. Черный треугольник относится к кишечному кровоизлиянию и некрозу, а красная стрелка показывает кровоизлияние и некроз илеоцекальной области. Шкала баров = 50 мкм. Аббревиатуры: Cont. = control; NEC = некротизирующий энтероколит. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
| Состав | Мышь (г/л) | Заменитель молока (г/л) |
| белок | 69-118 | 100 |
| жир | 93-175 | 100 |
| углевод | 28-37 | 50 |
| кальций | 0.97-6.2 | 2.84 |
| фосфор | 1.6-2.72 | 1.62 |
| натрий | 0.66-1.4 | 1 |
| калий | 1.08-1.7 | 1.2 |
| хлорид | 1.17-1.76 | 1.76 |
| магний | 0.0001-0.3 | >0.12 |
| цинк | 0.009-0.055 | 0.018 |
| железо | 0.004-0.007 | 0.017 |
| медь | 0.0017-0.007 | 0.0018 |
Таблица 1: Молочные молочные ингредиенты.
Дополнительный рисунок S1: Кривая выживаемости была значительно снижена в группе NEC, так что все мыши умерли спонтанно (n = 5 в группе Cont., n = 10 в группе NEC). Сокращения: Продолжение = контроль; NEC = некротизирующий энтероколит. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
NEC является наиболее распространенной неотложной ситуацией желудочно-кишечной системы для новорожденных, с высокой заболеваемостью и смертностью, особенно у недоношенных детей1,2,3. Однако его патогенез до сих пор неясен. В настоящее время считается, что повреждение слизистой оболочки, инвазия патогенов и энтеральное питание являются факторами высокого риска для NEC3. На сегодняшний день животными, используемыми для модели NEC, являются в основном свиньи, крысы и мыши. В большинстве исследований использовались неонатальные мыши C57BL/6 для индуцирования NEC13,14,15,16, и очень немногие исследования использовали неонатальных мышей BALB/c для индуцирования NEC. Тем не менее, мыши BALB / c имеют преимущество поляризации клеток Th6,7,8, что требует дальнейшего изучения, чтобы определить, могут ли они быть хорошей моделью NEC для исследования Th-клеток заболевания.
Мы сослались на стандарт патологической оценки Надлера модели NEC 17 и обнаружили, что оценка группы NEC была значительно выше, чем у контрольной группы. Оценка ≥ 2 указывает на NEC, а вероятность успеха индуцирования NEC составляет 38-50%, что ниже, чем 77% успеха моделирования NEC в исследовании Caplan et al. (DOI: 10.3109/15513819409037698). Мы также оценили баллы стула18 двух групп мышей и обнаружили, что баллы группы NEC были выше, чем у контрольной группы. Чем выше балл, тем серьезнее дисфункция кишечника. Все эти данные свидетельствуют о том, что создание модели NEC прошло успешно. Кроме того, обнадеживает то, что неонатальная модель NEC BALB/c мыши может в определенной степени имитировать НЭК человека. Кровоизлияния и некрозы возникают в кишечнике детей с НЭК3,19; подобные патологические состояния наблюдались и в данной модели.
Gavage является ключевым шагом в создании NEC в модели мыши. Если операция не была мастерски освоена, было легко по ошибке поместить желудочный зонд в трахею и заставить мышь умереть. Во время желудочного лечения большой палец левой руки, средний палец и безымянный палец использовались для зажима обеих сторон туловища мыши, а указательный палец помещался на голову, чтобы зафиксировать мышь на месте. Это должно было помешать мыши двигаться и заставить желудочный зонд повредить пищевод. Желудочный зонд вставляли из левого угла рта мыши. Только когда желудочный зонд входит в пищевод плавно без сопротивления, мы можем продолжать вставлять его. ЛПС или молочную смесь следует вводить только после введения желудочного зонда в 2-3 см от нижней губы мыши.
Продолжительность гипоксии следует тщательно контролировать. В этом исследовании гипоксия длилась в течение 90 с каждый раз. Если гипоксия будет слишком длительной, мыши не смогут ее переносить и погибнут. Эта модель может быть использована для исследования иммунных клеток, связанных с NEC, особенно клеток TH1 и TH23,9,10,11,20. В будущем мы планируем исследовать, полезна ли эта модель для изучения реакций клеток Th2 в NEC. Кроме того, это исследование также представило новый метод оценки стула для оценки кишечной дисфункции у мышей с NEC18. Тем не менее, есть некоторые ограничения для этого исследования. Например, показатель успешности модели был не очень высоким. Продолжаются усилия по совершенствованию метода моделирования BALB/c NEC для повышения успешности путем корректировки уровня гипоксии с 5% O2 до 1% O2, как описано ранее15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
У авторов нет конфликта интересов для раскрытия.
Acknowledgments
Авторы благодарят Банк клинических биологических ресурсов Медицинского центра женщин и детей Гуанчжоу за предоставление клинического образца и Центр лабораторных животных Гуанчжоу Forevergen Biosciences за предоставление мышей. Это исследование было поддержано грантом Национального фонда естественных наук Китая 81770510 (R.Z.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Absolute ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | 100092683 | |
| Goat Milk powder | Petag | 71795558417 | |
| HE dye solution | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | G1003 | |
| Isoflurane | RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD. | R510 | |
| LPS | Sigma-Adrich | L2880 | |
| Medical oxygen | various | various | |
| Microscope | NIKON | NIKON imaging system (DS-Ri2) | |
| Neutral resin | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | 10004160 | |
| Paraffin | various | various | |
| Premature baby milk powder | Abbott | 57430 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | 10023418 | |
| 1% Hydrochloric acid | various | various | |
| 10% Formalin | LEAGENE | DF0110 |
References
- Horbar, J. D., et al. Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009. Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).
- Stoll, B. J., et al. Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network. Pediatrics. 126 (3), 443-456 (2010).
- Neu, J., Walker, W. A.
- Sangild, P. T., et al. Invited Review: The preterm pig as a model in pediatric gastroenterology. Journal of Animal Science. 91 (10), 4713-4729 (2013).
- Cancro, M. P., Sigal, N. H., Klinman, N. R. Differential expression of an equivalent clonotype among BALB/c and C57BL/6 mice. Journal of Experimental Medicine. 147 (1), 1-12 (1978).
- Kuroda, E., Yamashita, U. Mechanisms of enhanced macrophage-mediated prostaglandin E2 production and its suppressive role in Th1 activation in Th2-dominant BALB/c mice. Journal of Immunology. 170 (2), 757-764 (2003).
- Fornefett, J., et al. Comparative analysis of clinics, pathologies and immune responses in BALB/c and C57BL/6 mice infected with Streptobacillus moniliformis. Microbes and Infection. 20 (2), 101-110 (2018).
- Rosas, L. E., et al. Genetic background influences immune responses and disease outcome of cutaneous L. mexicana infection in mice. International Immunology. 17 (10), 1347-1357 (2005).
- Sproat, T., Payne, R. P., Embleton, N. D., Berrington, J., Hambleton, S. T cells in preterm infants and the influence of milk diet. Frontiers in Immunology. 11, 1035 (2020).
- Nanthakumar, N., et al. The mechanism of excessive intestinal inflammation in necrotizing enterocolitis: an immature innate immune response. PLoS One. 6 (3), 17776 (2011).
- Afrazi, A., et al. New insights into the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis: Toll-like receptors and beyond. Pediatric Research. 69 (3), 183-188 (2011).
- Auestad, N., Korsak, R. A., Bergstrom, J. D., Edmond, J. Milk-substitutes comparable to rat's milk; their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat. British Journal of Nutrition. 61 (3), 495-518 (1989).
- Liu, Y., et al. Lactoferrin-induced myeloid-derived suppressor cell therapy attenuates pathologic inflammatory conditions in newborn mice. Journal of Clinical Investigation. 129 (10), 4261-4275 (2019).
- MohanKumar, K., et al. A murine neonatal model of necrotizing enterocolitis caused by anemia and red blood cell transfusions. Nature Communications. 10 (1), 3494 (2019).
- He, Y. M., et al. Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation. Nature Medicine. 24 (2), 224-231 (2018).
- Cho, S. X., et al. Characterization of the pathoimmunology of necrotizing enterocolitis reveals novel therapeutic opportunities. Nature Communications. 11 (1), 5794 (2020).
- Halpern, M. D., et al. Decreased development of necrotizing enterocolitis in IL-18-deficient mice. American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 294 (1), 20-26 (2007).
- Wu, N., et al. MAP3K2-regulated intestinal stromal cells define a distinct stem cell niche. Nature. 592 (7855), 606-610 (2021).
- Nino, D. F., Sodhi, C. P., Hackam, D. J. Necrotizing enterocolitis: new insights into pathogenesis and mechanisms. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 13 (10), 590-600 (2016).
- Chuang, S. L., et al. Cow's milk protein-specific T-helper type I/II cytokine responses in infants with necrotizing enterocolitis. Pediatric Allergy & Immunology. 20 (1), 45-52 (2009).
Tags
Медицина Выпуск 177 Некротизирующий энтероколит BALB/c мыши Иммунология Т-хелперы типа 2Erratum
Formal Correction: Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis
Posted by JoVE Editors on 03/07/2022.
Citeable Link.
An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
