Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

En neonatal BALB/c musemodell av nekrotiserende enterokolitt

Published: November 30, 2021 doi: 10.3791/63252
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1, 1, 1
1Provincial Key Laboratory of Research in Structure Birth Defect Disease and Department of Pediatric Surgery, Guangzhou Women and Children’s Medical Center, Guangzhou Medical University
* These authors contributed equally

ERRATUM NOTICE

Summary

Nekrotiserende enterokolitt (NEC) er den mest alvorlige gastrointestinale (GI) sykdommen som ofte forekommer hos premature spedbarn, spesielt svært lav fødselsvekt spedbarn, med høy dødelighet og uklar patogenese. Årsaken til NEC kan være relatert til inflammatoriske immunregulatoriske systemavvik. En NEC dyremodell er et uunnværlig verktøy for NEC sykdom immunforskning. NEC dyremodeller bruker vanligvis C57BL / 6J neonatal mus; BALB/c neonatale mus brukes sjelden. Relaterte studier har vist at når mus er smittet, er Th2 celledifferensiering dominerende hos BALB / c mus sammenlignet med C57BL / 6J mus. Studier har antydet at forekomsten og utviklingen av NEC er forbundet med en økning i T-hjelper type 2 (Th2) celler og er generelt ledsaget av infeksjon. Derfor brukte denne studien neonatale BALB/c-mus for å indusere en NEC-modell med lignende kliniske egenskaper og intestinale patologiske endringer som de som ble observert hos barn med NEC. Videre studier er berettiget til å avgjøre om denne dyremodellen kan brukes til å studere Th2 celleresponser i NEC.

Abstract

Nekrotiserende enterokolitt (NEC) er den mest alvorlige gastrointestinale (GI) sykdommen som ofte forekommer hos premature spedbarn, spesielt svært lav fødselsvekt spedbarn, med høy dødelighet og uklar patogenese. Årsaken til NEC kan være relatert til inflammatoriske immunregulatoriske systemavvik. En NEC dyremodell er et uunnværlig verktøy for NEC sykdom immunforskning. NEC dyremodeller bruker vanligvis C57BL / 6J neonatal mus; BALB/c neonatale mus brukes sjelden. Relaterte studier har vist at når mus er smittet, er Th2 celledifferensiering dominerende hos BALB / c mus sammenlignet med C57BL / 6J mus. Studier har antydet at forekomsten og utviklingen av NEC er forbundet med en økning i T-hjelper type 2 (Th2) celler og er generelt ledsaget av infeksjon. Derfor brukte denne studien neonatale BALB/c-mus for å indusere en NEC-modell med lignende kliniske egenskaper og intestinale patologiske endringer som de som ble observert hos barn med NEC. Videre studier er berettiget til å avgjøre om denne dyremodellen kan brukes til å studere Th2 celleresponser i NEC.

Introduction

Nekrotiserende enterokolitt (NEC), den mest alvorlige gastrointestinale (GI) sykdommen, forekommer hos de fleste premature spedbarn (>90%), spesielt de med svært lav fødselsvekt (VLBW)1. Hos VLBW-spedbarn varierer forekomsten av sykdommen fra 10% til 12%, og dødeligheten av barn diagnostisert med NEC er mellom 20% og 30%2,3. Årsaken til NEC kan være relatert til slimhinneskader, invasjon av patogene bakterier og tarmfôring, noe som kan føre til inflammatoriske responser og induksjon av tarmskader hos mottakelige verter3. Patogenesen til NEC er uklar. Relevant forskning viser at det berørte spedbarnets immunrespons er unormal, og genetisk følsomhet, mikrovaskulær spenning og tarmbakterielle endringer kan spille viktige roller i sykdommen3.

NEC-dyremodellen er et uunnværlig verktøy for forskning på patogenesen til NEC. Dyreartene som brukes til NEC-modeller er griser, rotter og mus. Men på grunn av den lange svangerskapsperioden har vekstsykluser og høye kostnader de siste årene ikke vært førstevalget for NEC-modeller og har blitt erstattet med rotter eller mus4. Siden det er forskjeller i immunbakgrunnen til forskjellige musestammer5, må forskjellige studier bruke forskjellige stammer av mus for å etablere NEC-dyremodeller. BALB / c mus har en viktig funksjon; Når de er smittet eller takler ekstern skade, er polariseringen av TH2-celler under infeksjon hos mus betydelig sterkere enn i andre stammer av mus6,7,8. T hjelperceller spiller en avgjørende rolle i forekomsten og progresjonen av NEC, spesielt utviklingen av TH2-celler3,9,10,11. Derfor brukte denne studien BALB/ c mus for å etablere NEC-modellen, noe som kan være nyttig for NEC sykdomsforskning på T-celler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Denne forskningen ble godkjent av Medical Ethics Committee of Guangzhou Women and Children's Medical Center (NO. 174A01) og Animal Ethical Committee of the Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center (IACUC-G160100). Alle dyr ble oppdrettet i samme rom i et bestemt patogenfritt (SPF) miljø, og eksperimenter ble utført i et konvensjonelt miljø. Musene som ble brukt til avl var 7-8 uker gamle; musene for å indusere NEC (n = 72) ble skilt fra demningen på dag 4, og demningene (n = 14) ble holdt i det opprinnelige buret og pleiet kontrollgruppen (Cont.) gruppemus (n = 24).

1. Forberedelse av reagenser og enheter

  1. Forbered melkesubstituttet for BALB/c-musene i tilsvarende forhold (for tidlig babymelkpulver: geitmelkpulver = 2:1).
    MERK: De endelige næringssammensetningene av formelmelk12 er vist i tabell 1.
  2. LPS-oppløsning (2,5 mg/ml)
    1. Løs opp totalt 10 mg LPS-pulver i 4 ml sterilisert dobbeltdestillert vann, bland godt og oppbevar i kjøleskap ved -20 °C etter aliquoting.
      MERK: LPS-oppløsningen oppbevares i mørket ved 2-8 °C for umiddelbar bruk eller ved -20 °C for langvarig lagring.

2. Indusere nekrotiserende enterokolitt hos neonatale BALB/c-mus

  1. Fôr neonatale mus.
    1. Hold neonatalmusene i samme bur med demningen, pleiet av demningen på dag 0-4.
    2. På natten av dag 4 (når neonatalmusene veier 2,5-3 g), skille neonatalmusene i NEC-gruppen fra demningen for å indusere NEC, hold dem i en animalsk inkubator og mate dem med formel. Cont.-gruppen har imidlertid lov til å bo hos og bli matet av demningen.
      MERK: Neonatale mus som er skilt fra demningen må heves i en inkubator på grunn av deres svake kroppstemperaturregulering.
  2. Forbered gavagerøret ved å suge det i 75% alkoholbeholdere i 1-2 min og vask dem to ganger i rent, dobbeltdestillert vann.
    MERK: For å unngå krysskontaminering blant musene, må prosessen ovenfor utføres etter fôring av hver mus.
  3. Induser NEC-modellen.
    1. Ta neonatalmusene fra demningen på dag 4 og fest dem for en natt.
    2. Gavage musene med LPS (20-30 μL om gangen) og mate dem med formel på dag 5 (40-50 μL om gangen).
    3. Fra dag 5 og utover, underkast musene en hypoksi-reoksygenerings-kaldsjokksyklus to ganger om dagen i 5 dager. Plasser musene i en hypoksienhet ved 5% O2 i 90 s og reoksygenat dem i 3 min; gjenta denne prosessen fem ganger. Deretter plasserer du musene i et 4 °C miljø i 15 minutter og overfører dem deretter til en inkubator. Se figur 1A,B for induksjonsprosessen.
      MERK: En syklus med hypoksi-reoksygeneringskald stimulering ble utført en gang om morgenen og en gang om ettermiddagen. En blanding av 5% O2 med 95% N2 ble tilberedt i beholderen, og konsentrasjonen ble målt med en oksygendetektor.
  4. Følg nøye alle musene, vei dem hver dag, registrer musenes overlevelse i induksjonsperioden, og registrer avføringsegenskapene (med eller uten klissete avføring / blodig avføring).
    MERK: Den etablerte NEC-modellen varer i 5 dager.
  5. På dag 10 eller tidligere, når musene viser NEC-symptomer (ileus, hematochezia, diaré)13, euthanize musene ved innånding anestesi med isofluran, så samle umiddelbart tarmvevet. Ikke samle vev fra musene som døde spontant.
    MERK: I denne studien ble sluttpunktet for mus euthenasia tilpasset da musen viste hematochezia og cyanose i hele kroppen.

3. Gavage musen

  1. Fest musehodet og hold magerøret i høyre hånd. Sett inn magerøret fra venstre hjørne av musens munn.
    MERK: Hodet ble festet med pekefingeren på musens hode og trykket forsiktig bakover og nedover for å forhindre at musen bøyer seg fremover under operasjonen og påvirker innsettingen av magerøret.
  2. Beveg røret langsomt til midten av munnen. Etter å ha satt inn røret ca. 2-3 cm, skyver du 40-50 μL formel eller 20-30 μL LPS inn i fordøyelseskanalen. Se figur 2A,B for gavage.
    MERK: Under normale omstendigheter settes magerøret jevnt inn i fordøyelseskanalen. Hvis musen har en sterk oppkastrefleks, har magerøret blitt satt inn i luftrøret ved en feiltakelse. Magerøret må trekkes forsiktig ut og musen får hvile en stund før du prøver å kneble igjen. I tillegg brukes gavage-prosedyren til å indusere modellen til NEC før eutanasi av mus.

4. Samle ferske tarmvevsprøver for hematoksylin og eosin (H&E) farging

  1. Senk det friske ileumvevet fra musen i 10% formalin i 24 timer.
  2. Legg vevet i parafin og skjær dem i 4 μm seksjoner.
  3. Deparaffiner seksjonene i xylen og rehydrer dem suksessivt i absolutt etanol, 95% etanol, 80% etanol, 70% etanol og destillert vann, soaking i 5 min i hvert trinn. Flekk seksjonene med hematoksylinoppløsning i 5 min og differensier dem i 1% saltsyre i 75% alkohol i 5 s. Til slutt, flekk dem med eosinoppløsning i 1 min.
    MERK: Etter farging med hematoksylinoppløsning må den differensieres med 1% saltsyre i etanol for å fjerne overdreven bundet hematoksylinoppløsning og cytoplasmatisk hematoksylinfargestoff. Konsentrasjonen av 1% saltsyre er egnet for tarmvev.
  4. Undersøk histopatologien til tarmvevet ved 40x forstørrelse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

BALB/c-musen NEC-modellen ble indusert ved formelfôring, LPS-fôring, hypoksi og kald stimulering. I løpet av induksjonsperioden ble musene observert for tarmpatologi, avføringsegenskaper, kroppsvektendringer og daglig overlevelse. Representative bilder av tynntarmen under NEC-induksjon; Tallene på bildet representerer tarmpatologien fra 0 (normalt epitel) til 4 (den mest alvorlige) (figur 3A). Intestinal patologi score var betydelig høyere i NEC-gruppen enn i Cont. gruppen (figur 3B). Tallene på bildet representerer avføringsskår fra 0 (velformede pellets) til 3 (flytende avføring) (figur 3C). På dag 10 var avføringsresultatene til NEC-gruppene betydelig høyere i NEC-gruppen, noe som indikerer at tarmdysfunksjon i NEC-gruppen var mer alvorlig (figur 3D). På dag 5, den første dagen for induksjon av NEC-modellen, var det ingen signifikant forskjell i kroppsstørrelse mellom de to gruppene. Men på dag 10 var musene i NEC-gruppen betydelig tynnere og mindre fra hode til hale enn musene i Cont. gruppen (figur 4A).

I løpet av de 5 dagene modellen ble etablert, økte musenes vekt i NEC-gruppen sakte eller til og med viste negativ vekst, og overlevelsesraten til musene i NEC-gruppen ble gradvis redusert sammenlignet med Cont. -gruppen (figur 4B,C). I tillegg ble en annen gruppe mus brukt til å indusere NEC-modellen, men uten å samle vevet; ved dag 13 hadde alle musene i denne NEC-gruppen dødd, og overlevelseskurven ble betydelig redusert (supplerende figur S1). Figur 5A viser morfologi og patologiske resultater (nekrose i tarmslimhinnevev) av det resekterte ileocecal-området i tarmvevet fra NEC-pasienter på dette sykehuset. I denne studien utviklet musene i NEC-gruppen (1/13) ileocecal blødning og nekrose (figur 5B).

Figure 1
Figur 1: Induksjon av BALB/c NEC-modellprosessen. (A) Musene i NEC-gruppen ble skilt fra demningen ved fødselen til de var 4 dager gamle (på dag 4) og fastet den natten. NEC-modellen ble indusert fra dag 5 og utover etter fødselen og varte i 5 dager. Intestinale vevsprøver ble samlet inn på dag 10 eller tidligere. Musene i Cont. gruppen ble plassert med og pleiet av demningen. (B) Operasjonssekvensen for hver dag etter at NEC-modellen er indusert. Forkortelser: Kont. = kontroll; NEC = nekrotiserende enterokolitt; LPS = lipopolysakkarid. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 2
Figur 2: Gastrisk gavage. (A) En spesialisert gavage-enhet ble brukt i denne studien, som ble kombinert med et plastrør og sprøyte. (B) Gavagerøret kom inn fra munnkroken i en 45° vinkel til den vertikale linjen. (C) Røret ble sakte flyttet til midten av musens munn for å sikre at magerøret og spiserøret var på samme vertikale nivå. Forkortelser: D = diameter. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 3
Figur 3: NEC-modell for BALB/c-mus. (A) Fotomikrografer av tarmpatologien skårer fra de to gruppene, for eksempel viser intakt og normal slimhinne i Cont.-gruppen (skår 0), mild submukosal eller lamina propria hevelse separasjon i to grupper (score 1), moderat submukosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submukosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submucosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submucosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submucosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submucosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submucosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submucosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submucosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submucosal og / eller lamina propria separasjon i NEC-gruppen (score 2), alvorlig submucosal og / eller lamina propria separasjon intestinal villi-forsvinning med intestinal nekrose i NEC-gruppen (skår 4). (B) Tarmpatologien i musene etter NEC-induksjon var høyere enn i Cont.-gruppen (n = 9 i Cont.-gruppen, n = 35 i NEC-gruppen, *** P < 0,001 med Student t-test). (C) Fotomikrografer av avføring scorer fra to grupper, for eksempel viser velformede pellets i Cont. gruppen (score 0), dannet avføring i to grupper (score 1), semiformed avføring i NEC-gruppen (score 2), og flytende avføring i NEC-gruppen (score 3). (D) Avføringsresultatene i NEC-gruppen var signifikant høyere enn i Cont. gruppen (n = 6 i Cont.-gruppen, n = 13 i NEC-gruppen, *** P < 0,001 med Student t-test). Den røde trekanten representerer separasjonen av slimhinne og lamina propria, og den svarte pilen peker på museavføring. Skalastolper = 50 μm. Forkortelser: Kont. = kontroll; NEC = nekrotiserende enterokolitt; HE = hematoksylin og eosin. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 4
Figur 4: Sammenligning av kroppsform og overlevelse av mus mellom Cont. gruppen og NEC-gruppen. (A) Utseendet til de to gruppene mus på dag 5 og dag 10. (B) Denne delen viser vektendringene til musene i to grupper over tid; x-aksen representerer antall dager etter at musene ble født, og y-aksen representerer musenes vektendringer; **P < 0,01, ***P < 0,001 med Student t-test for å sammenligne Kont.gruppen (n = 10) og NEC-gruppen (n = 27) (C) Denne delen viser overlevelseskurvene til mus i kontrollgruppen (n = 10) og NEC-gruppen (n = 25). Forkortelser: Kont. = kontroll; NEC = nekrotiserende enterokolitt. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 5
Figur 5: Ileocecal blødning hos barn med NEC og mus med NEC. (A) Blødning og nekrose i det ileocecal området hos barn med NEC. (B) Blødning og nekrose i det ileocekale området av mus med NEC (1/13); Tarmene til musene i Cont. gruppen var imidlertid normale, uten blødning og nekrose. Den svarte trekanten refererer til intestinal blødning og nekrose, og den røde pilen viser blødning og nekrose i det ileocecal området. Skalastolper = 50 μm. Forkortelser: Kont. = kontroll; NEC = nekrotiserende enterokolitt. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Komposisjon Mus (g/L) Melkerstatning (g/L)
protein 69-118 100
fett 93-175 100
karbohydrat 28-37 50
kalsium 0.97-6.2 2.84
fosfor 1.6-2.72 1.62
natrium 0.66-1.4 1
kalium 1.08-1.7 1.2
klorid 1.17-1.76 1.76
magnesium 0.0001-0.3 >0.12
sink 0.009-0.055 0.018
jern 0.004-0.007 0.017
kobber 0.0017-0.007 0.0018

Tabell 1: Meieriformel melk ingredienser.

Supplerende figur S1: Overlevelseskurven ble betydelig redusert i NEC-gruppen slik at alle musene døde spontant (n = 5 i Cont.-gruppen, n = 10 i NEC-gruppen). Forkortelser: Kont. = kontroll; NEC = nekrotiserende enterokolitt. Klikk her for å laste ned denne filen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

NEC er den vanligste gastrointestinale systemkrisen for nyfødte, med høy forekomst og dødelighet, spesielt hos premature spedbarn1,2,3. Imidlertid er patogenesen fortsatt uklar. Det antas for tiden at slimhinneskade, patogeninvasjon og enteral fôring er høyrisikofaktorer for NEC3. Til dags dato er dyrene som brukes til NEC-modellen hovedsakelig griser, rotter og mus. De fleste studier har brukt neonatal C57BL/6 mus for å indusere NEC13,14,15,16, og svært få studier har brukt BALB/ c neonatal mus for å indusere NEC. Imidlertid har BALB / c mus fordelen av Th celle polarisering6,7,8, som garanterer videre studie for å avgjøre om de kan være en god NEC-modell for celleforskning av sykdommen.

Vi refererte til Nadlers patologiske poengsumstandard for NEC model17 og fant at poengsummen til NEC-gruppen var betydelig høyere enn kontrollgruppens. En poengsum ≥ 2 indikerer NEC, og suksessraten for å indusere NEC er 38-50%, som er lavere enn 77% suksessrate for NEC-modellering i studien av Caplan et al. (DOI:10.3109/15513819409037698). Vi evaluerte også avføringsresultatene18 av de to gruppene av mus og fant ut at poengsummene til NEC-gruppen var høyere enn for kontrollgruppen. Jo høyere poengsum, jo mer alvorlig tarmdysfunksjon. Alle disse dataene viser at etableringen av NEC-modellen var vellykket. I tillegg er det oppmuntrende at neonatal BALB / c musemodell av NEC kan simulere menneskelig NEC til en viss grad. Blødning og nekrose forekommer i tarmene til barn med NEC3,19; lignende patologiske forhold ble observert i denne modellen.

Gavage er det viktigste trinnet i å indusere NEC i musemodellen. Hvis gavage-operasjonen ikke var dyktig mestret, var det lett å feilaktig plassere magerøret i luftrøret og få musen til å dø. Under gastrisk gavage ble venstre tommel, langfinger og ringfinger brukt til å klemme begge sider av musens torso, og pekefingeren ble plassert på hodet for å fikse musen på plass. Dette var for å forhindre at musen beveget seg rundt og fikk magerøret til å skade spiserøret. Magerøret ble satt inn fra venstre hjørne av musens munn. Det er først når magerøret kommer inn i spiserøret jevnt uten motstand, kan vi fortsette å sette det inn. LPS eller formelmelk skal injiseres først etter at magerøret er satt inn 2-3 cm fra musens underleppe.

Lengden på hypoksi bør overvåkes nøye. I denne studien varte hypoksi i 90 s hver gang. Hvis hypoksi er for lang, vil musene ikke kunne tolerere det og vil dø. Denne modellen kan brukes til å forske på NEC-relaterte immunceller, spesielt TH1- og TH2-celler3,9,10,11,20. I fremtiden planlegger vi å undersøke om denne modellen er nyttig for å studere Th2-celleresponser i NEC. I tillegg introduserte denne studien også en ny metode for avføringsscoring for å evaluere intestinal dysfunksjon hos mus med NEC18. Det er imidlertid noen begrensninger i denne studien. For eksempel var suksessraten til modellen ikke veldig høy. Det arbeides kontinuerlig med å forbedre metoden for BALB/c NEC-modellering for å øke suksessraten ved å justere hypoksinivået fra 5% O2 til 1% O2, som beskrevet tidligere15.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingen interessekonflikter å avsløre.

Acknowledgments

Forfatterne takker den kliniske biologiske ressursbanken til Guangzhou Women and Children's Medical Center for å ha gitt den kliniske prøven og Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center for å gi mus. Denne forskningen ble støttet av National Natural Science Foundation of China grant 81770510 (R.Z.).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Absolute ethanol Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 100092683
Goat Milk powder  Petag  71795558417
HE dye solution Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. G1003
Isoflurane RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD. R510  
LPS Sigma-Adrich L2880
Medical oxygen various various
Microscope NIKON NIKON imaging system (DS-Ri2)
Neutral resin Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 10004160
Paraffin various various
Premature baby milk powder Abbott 57430
Xylene Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 10023418
1% Hydrochloric acid various various
10% Formalin LEAGENE DF0110

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Horbar, J. D., et al. Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009. Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).
  2. Stoll, B. J., et al. Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network. Pediatrics. 126 (3), 443-456 (2010).
  3. Neu, J., Walker, W. A. Necrotizing enterocolitis. New England Journal of Medicine. 364 (3), 255-264 (2011).
  4. Sangild, P. T., et al. Invited Review: The preterm pig as a model in pediatric gastroenterology. Journal of Animal Science. 91 (10), 4713-4729 (2013).
  5. Cancro, M. P., Sigal, N. H., Klinman, N. R. Differential expression of an equivalent clonotype among BALB/c and C57BL/6 mice. Journal of Experimental Medicine. 147 (1), 1-12 (1978).
  6. Kuroda, E., Yamashita, U. Mechanisms of enhanced macrophage-mediated prostaglandin E2 production and its suppressive role in Th1 activation in Th2-dominant BALB/c mice. Journal of Immunology. 170 (2), 757-764 (2003).
  7. Fornefett, J., et al. Comparative analysis of clinics, pathologies and immune responses in BALB/c and C57BL/6 mice infected with Streptobacillus moniliformis. Microbes and Infection. 20 (2), 101-110 (2018).
  8. Rosas, L. E., et al. Genetic background influences immune responses and disease outcome of cutaneous L. mexicana infection in mice. International Immunology. 17 (10), 1347-1357 (2005).
  9. Sproat, T., Payne, R. P., Embleton, N. D., Berrington, J., Hambleton, S. T cells in preterm infants and the influence of milk diet. Frontiers in Immunology. 11, 1035 (2020).
  10. Nanthakumar, N., et al. The mechanism of excessive intestinal inflammation in necrotizing enterocolitis: an immature innate immune response. PLoS One. 6 (3), 17776 (2011).
  11. Afrazi, A., et al. New insights into the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis: Toll-like receptors and beyond. Pediatric Research. 69 (3), 183-188 (2011).
  12. Auestad, N., Korsak, R. A., Bergstrom, J. D., Edmond, J. Milk-substitutes comparable to rat's milk; their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat. British Journal of Nutrition. 61 (3), 495-518 (1989).
  13. Liu, Y., et al. Lactoferrin-induced myeloid-derived suppressor cell therapy attenuates pathologic inflammatory conditions in newborn mice. Journal of Clinical Investigation. 129 (10), 4261-4275 (2019).
  14. MohanKumar, K., et al. A murine neonatal model of necrotizing enterocolitis caused by anemia and red blood cell transfusions. Nature Communications. 10 (1), 3494 (2019).
  15. He, Y. M., et al. Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation. Nature Medicine. 24 (2), 224-231 (2018).
  16. Cho, S. X., et al. Characterization of the pathoimmunology of necrotizing enterocolitis reveals novel therapeutic opportunities. Nature Communications. 11 (1), 5794 (2020).
  17. Halpern, M. D., et al. Decreased development of necrotizing enterocolitis in IL-18-deficient mice. American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 294 (1), 20-26 (2007).
  18. Wu, N., et al. MAP3K2-regulated intestinal stromal cells define a distinct stem cell niche. Nature. 592 (7855), 606-610 (2021).
  19. Nino, D. F., Sodhi, C. P., Hackam, D. J. Necrotizing enterocolitis: new insights into pathogenesis and mechanisms. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 13 (10), 590-600 (2016).
  20. Chuang, S. L., et al. Cow's milk protein-specific T-helper type I/II cytokine responses in infants with necrotizing enterocolitis. Pediatric Allergy & Immunology. 20 (1), 45-52 (2009).

Tags

Medisin Utgave 177 Nekrotiserende enterokolitt BALB/c mus Immunologi T-hjelper type 2 celler

Erratum

Formal Correction: Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis
Posted by JoVE Editors on 03/07/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.

Figure 1 was updated from:

Figure 1
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.

to:

Figure 1
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.

En neonatal BALB/c musemodell av nekrotiserende enterokolitt
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tian, Y., Huang, J., Fu, M., He, Q., … More

Tian, Y., Huang, J., Fu, M., He, Q., Chen, J., Chen, Y., Zhang, R., Zhong, W. A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. J. Vis. Exp. (177), e63252, doi:10.3791/63252 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter