Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

En neonatal BALB / c musemodel af nekrotiserende enterocolitis

Published: November 30, 2021 doi: 10.3791/63252
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1, 1, 1
1Provincial Key Laboratory of Research in Structure Birth Defect Disease and Department of Pediatric Surgery, Guangzhou Women and Children’s Medical Center, Guangzhou Medical University
* These authors contributed equally

ERRATUM NOTICE

Summary

Nekrotiserende enterocolitis (NEC) er den mest alvorlige gastrointestinale (GI) sygdom, der ofte forekommer hos for tidligt fødte spædbørn, især spædbørn med meget lav fødselsvægt, med høj dødelighed og uklar patogenese. Årsagen til NEC kan være relateret til inflammatoriske immunsystemabnormiteter. En NEC-dyremodel er et uundværligt redskab til NEC-sygdomsimmunforskning. NEC-dyremodeller bruger normalt C57BL/6J neonatale mus; BALB/c neonatale mus anvendes sjældent. Relaterede undersøgelser har vist, at når mus er inficeret, er Th2-celledifferentiering fremherskende i BALB/c-mus sammenlignet med C57BL/6J-mus. Undersøgelser har antydet, at forekomsten og udviklingen af NEC er forbundet med en stigning i T-hjælper type 2 (Th2) celler og generelt ledsages af infektion. Derfor anvendte denne undersøgelse neonatale BALB/c-mus til at inducere en NEC-model med lignende kliniske egenskaber og intestinale patologiske ændringer som dem, der blev observeret hos børn med NEC. Yderligere undersøgelser er berettiget for at afgøre, om denne dyremodel kan bruges til at studere Th2-celleresponser i NEC.

Abstract

Nekrotiserende enterocolitis (NEC) er den mest alvorlige gastrointestinale (GI) sygdom, der ofte forekommer hos for tidligt fødte spædbørn, især spædbørn med meget lav fødselsvægt, med høj dødelighed og uklar patogenese. Årsagen til NEC kan være relateret til inflammatoriske immunsystemabnormiteter. En NEC-dyremodel er et uundværligt redskab til NEC-sygdomsimmunforskning. NEC-dyremodeller bruger normalt C57BL/6J neonatale mus; BALB/c neonatale mus anvendes sjældent. Relaterede undersøgelser har vist, at når mus er inficeret, er Th2-celledifferentiering fremherskende i BALB/c-mus sammenlignet med C57BL/6J-mus. Undersøgelser har antydet, at forekomsten og udviklingen af NEC er forbundet med en stigning i T-hjælper type 2 (Th2) celler og generelt ledsages af infektion. Derfor anvendte denne undersøgelse neonatale BALB/c-mus til at inducere en NEC-model med lignende kliniske egenskaber og intestinale patologiske ændringer som dem, der blev observeret hos børn med NEC. Yderligere undersøgelser er berettiget for at afgøre, om denne dyremodel kan bruges til at studere Th2-celleresponser i NEC.

Introduction

Nekrotiserende enterocolitis (NEC), den mest alvorlige gastrointestinale (GI) sygdom, forekommer hos de fleste for tidligt fødte spædbørn (>90%), især dem med meget lav fødselsvægt (VLBW)1. Hos VLBW-spædbørn varierer forekomsten af sygdommen fra 10% til 12%, og dødeligheden hos børn diagnosticeret med NEC er mellem 20% og 30%2,3. Årsagen til NEC kan være relateret til slimhindeskader, invasion af patogene bakterier og tarmfodring, hvilket kan føre til inflammatoriske reaktioner og induktion af tarmskader hos modtagelige værter3. Patogenesen af NEC er uklar. Relevant forskning viser, at det berørte spædbarns immunrespons er unormal, og genetisk modtagelighed, mikrovaskulær spænding og tarmbakterielle ændringer kan spille vigtige roller i sygdommen3.

NEC-dyremodellen er et uundværligt redskab til forskning i NEC's patogenese. De dyrearter, der anvendes til NEC-modeller, er svin, rotter og mus. På grund af den lange drægtighedsperiode, vækstcyklusser og høje omkostninger har svin i de senere år imidlertid ikke været førstevalget til NEC-modeller og er blevet erstattet med rotter eller mus4. Da der er forskelle i immunbaggrunden for forskellige musestammer5, skal forskellige undersøgelser bruge forskellige musestammer til at etablere NEC-dyremodeller. BALB/c-mus har en vigtig funktion; når de er inficeret eller håndterer ydre skader, er polariseringen af TH2-celler under infektion hos mus signifikant stærkere end i andre musestammer6,7,8. T-hjælperceller spiller en afgørende rolle i forekomsten og progressionen af NEC, især udviklingen af TH2-celler3,9,10,11. Derfor brugte denne undersøgelse BALB / c-mus til at etablere NEC-modellen, hvilket kan være nyttigt for NEC-sygdomsforskning på T-celler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Denne forskning blev godkendt af Medical Ethics Committee of Guangzhou Women and Children's Medical Center (NR. 174A01) og Animal Ethical Committee of guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center (IACUC-G160100). Alle dyr blev opdrættet i samme rum i et specifikt patogenfrit (SPF) miljø, og eksperimenter blev udført i et konventionelt miljø. Musene, der blev brugt til avl, var 7-8 uger gamle; musene til inducering af NEC (n = 72) blev adskilt fra dæmningen på dag 4, og dæmningerne (n = 14) blev holdt i det oprindelige bur og plejede kontrolmusene (Cont.) -gruppen (n = 24).

1. Fremstilling af reagenser og udstyr

  1. Mælkeerstatningen for BALB/c-musene forberedes i det tilsvarende forhold (for tidligt modermælkspulver: gedemælkspulver = 2:1).
    BEMÆRK: De endelige ernæringsmæssige sammensætninger af modermælkserstatning12 er vist i tabel 1.
  2. LPS-opløsning (2,5 mg/ml)
    1. I alt 10 mg LPS-pulver opløses i 4 ml steriliseret dobbeltdestilleret vand, blandes godt og opbevares i køleskab ved -20 °C efter alicitatering.
      BEMÆRK: LPS-opløsningen opbevares i mørke ved 2-8 °C til øjeblikkelig brug eller ved -20 °C til langtidsopbevaring.

2. Inducer nekrotiserende enterocolitis hos neonatale BALB / c-mus

  1. Foder de neonatale mus.
    1. Hold de neonatale mus i samme bur med dæmningen, plejet af dæmningen på dag 0-4.
    2. Om natten på dag 4 (når de neonatale mus vejer 2,5-3 g), adskilles de neonatale mus i NEC-gruppen fra dæmningen for at inducere NEC, opbevare dem i en dyreinkubator og fodre dem med formel. Cont.-gruppen får dog lov til at blive hos og blive fodret af dæmningen.
      BEMÆRK: Neonatale mus, der er adskilt fra dæmningen, skal opdrættes i en inkubator på grund af deres svage kropstemperaturregulering.
  2. Forbered gavagerøret ved at lægge det i blød i 75% alkoholbeholdere i 1-2 minutter og vask dem to gange i rent, dobbeltdestilleret vand.
    BEMÆRK: For at undgå krydskontaminering mellem musene skal ovenstående proces udføres efter fodring af hver mus.
  3. Fremkald NEC-modellen.
    1. Tag de neonatale mus fra dæmningen på dag 4 og faste dem for en nat.
    2. Gavage musene med LPS (20-30 μL ad gangen) og fodre dem med formel på dag 5 (40-50 μL ad gangen).
    3. Fra dag 5 og fremefter skal musene udsættes for en hypoxi-reoxygenering-kold-chok-cyklus to gange om dagen i 5 dage. Anbring musene i en hypoxi-enhed ved 5% O2 i 90 s og reoxygenerer dem i 3 minutter; gentag denne proces fem gange. Placer derefter musene i et 4 ° C miljø i 15 minutter og overfør dem derefter til en inkubator. Se figur 1A,B for induktionsprocessen.
      BEMÆRK: En cyklus af hypoxi-reoxygenering-kold stimulering blev udført en gang om morgenen og en gang om eftermiddagen. En blanding af 5% O2 med 95% N2 blev fremstillet i beholderen, og koncentrationen blev målt med en iltdetektor.
  4. Overhold nøje alle musene, vej dem hver dag, registrer musenes overlevelse i induktionsperioden, og registrer afføringens egenskaber (med eller uden klæbrig afføring/blodig afføring).
    BEMÆRK: Den etablerede NEC-model varer i 5 dage.
  5. På dag 10 eller tidligere, når musene viser NEC-symptomer (ileus, hæmatochezia, diarré)13, aflives musene ved indåndingsanæstesi med isofluran og derefter straks opsamle tarmvævet. Saml ikke væv fra musene, der døde spontant.
    BEMÆRK: I denne undersøgelse blev slutpunktet for musens euthenasia tilpasset, da musen viste hæmatochezia og cyanose i hele kroppen.

3. Gavage musen

  1. Fastgør musehovedet, og hold maverøret i højre hånd. Indsæt maverøret fra venstre hjørne af musens mund.
    BEMÆRK: Hovedet blev fastgjort med pegefingeren på musens hoved og forsigtigt presset bagud og nedad for at forhindre musen i at bøje sig fremad under operationen og påvirke indsættelsen af maverøret.
  2. Flyt langsomt røret til midten af munden. Efter indsættelse af røret ca. 2-3 cm skal du skubbe 40-50 μL formel eller 20-30 μL LPS i fordøjelseskanalen. Se figur 2A,B for gavage.
    BEMÆRK: Under normale omstændigheder indsættes maverøret glat i fordøjelseskanalen. Hvis musen har en stærk opkastningsrefleks, er maverøret ved en fejltagelse blevet indsat i luftrøret. Maverøret skal trækkes forsigtigt ud, og musen får lov til at hvile et stykke tid, før man forsøger gavage igen. Derudover anvendes gavageproceduren til at inducere modellen af NEC forud for eutanasi af mus.

4. Saml friske tarmvævsprøver til hæmatoxylin og eosin (H & E) farvning

  1. Sænk det friske ileumvæv fra musen i 10% formalin i 24 timer.
  2. Integrer vævene i paraffin og skær dem i 4 μm sektioner.
  3. Deparaffiniser sektionerne i xylen og rehydrer dem successivt i absolut ethanol, 95% ethanol, 80% ethanol, 70% ethanol og destilleret vand, blødgør i 5 minutter i hvert trin. Pletter sektionerne med hæmatoxylinopløsning i 5 minutter og differentier dem i 1% saltsyre i 75% alkohol i 5 s. Til sidst pletter dem med eosinopløsning i 1 min.
    BEMÆRK: Efter farvning med hæmatoxylinopløsning skal den differentieres med 1% saltsyre i ethanol for at fjerne overdrevent bundet hæmatoxylinopløsning og cytoplasmatisk hæmatoxylinfarvestof. Koncentrationen af 1% saltsyre er egnet til tarmvæv.
  4. Undersøg tarmvævets histopatologi ved 40x forstørrelse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

BALB / c mus NEC-modellen blev induceret af formelfodring, LPS-fodring, hypoxi og koldstimulering. I induktionsperioden blev musene observeret for tarmpatologi, afføringskarakteristika, ændringer i kropsvægt og daglig overlevelse. Repræsentative billeder af tyndtarmen under NEC-induktion; tallene på billedet repræsenterer tarmpatologiens score fra 0 (normalt epitel) til 4 (det mest alvorlige) (figur 3A). Tarmpatologiscoren var signifikant højere i NEC-gruppen end i Cont.-gruppen (figur 3B). Tallene på billedet repræsenterer afføringsscorer fra 0 (velformede pellets) til 3 (flydende afføring) (figur 3C). På dag 10 var afføringsscorerne for NEC-grupperne signifikant højere i NEC-gruppen, hvilket indikerer, at tarmdysfunktion i NEC-gruppen var mere alvorlig (figur 3D). På dag 5, den første induktionsdag for NEC-modellen, var der ingen signifikant forskel i kropsstørrelse mellem de to grupper. På dag 10 var musene i NEC-gruppen imidlertid signifikant tyndere og mindre fra hoved til hale end musene i Cont.-gruppen (figur 4A).

I løbet af de 5 dage, hvor modellen blev etableret, steg vægten af musene i NEC-gruppen langsomt eller viste endda negativ vækst, og overlevelsesraten for musene i NEC-gruppen faldt gradvist sammenlignet med Cont.-gruppen (figur 4B,C). Derudover blev et andet parti mus brugt til at inducere NEC-modellen, men uden at samle vævene; på dag 13 var alle musene i denne NEC-gruppe døde, og overlevelseskurven var signifikant reduceret (supplerende figur S1). Figur 5A viser morfologien og de patologiske resultater (nekrose af tarmslimhindevæv) af det resekterede ileocecale område af tarmvævet fra NEC-patienter på dette hospital. I dette studie udviklede musene i NEC-gruppen (1/13) ileocecal blødning og nekrose (figur 5B).

Figure 1
Figur 1: Induktion af BALB/c NEC-modelprocessen. (A) Musene i NEC-gruppen blev adskilt fra dæmningen ved fødslen, indtil de var 4 dage gamle (på dag 4) og fastede den nat. NEC-modellen blev induceret fra dag 5 og fremefter efter fødslen og varede i 5 dage. Tarmvævsprøver blev indsamlet på dag 10 eller tidligere. Musene i Cont.-gruppen blev anbragt hos og plejet af dæmningen. B) Rækkefølgen af operationer for hver dag efter inducering af NEC-modellen. Forkortelser: Cont. NEC = nekrotiserende enterocolitis; LPS = lipopolysaccharid. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 2
Figur 2: Gastrisk gavage. (A) En specialiseret gavageanordning blev anvendt i denne undersøgelse, som blev kombineret med et plastrør og sprøjte. (B) Gavagerøret kom ind fra mundvigen i en vinkel på 45° i den lodrette linje. (C) Røret blev langsomt flyttet til midten af musens mund for at sikre, at maverøret og spiserøret var på samme lodrette niveau. Forkortelser: D= diameter. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 3
Figur 3: BALB/c mus NEC-model. (A) Fotomikrografer af tarmpatologiscoren fra de to grupper, f.eks. viser intakt og normal slimhinde i Cont.-gruppen (score 0), mild submucosal eller lamina propria hævelsesseparation i to grupper (score 1), moderat submucosal og/eller lamina propria separation i NEC-gruppen (score 2), svær submucosal og/eller lamina propria separation i NEC-gruppen (score 3), intestinal villi forsvinden med intestinal nekrose i NEC-gruppen (score 4). (B) Tarmpatologiscorerne hos musene efter NEC-induktion var højere end for Cont.-gruppen (n = 9 i Cont.-gruppen, n = 35 i NEC-gruppen, *** P < 0,001 med Student's t-test). (C) Fotomikrografer af afføringsscorer fra to grupper, f.eks. ved at vise velformede pellets i Cont.-gruppen (score 0), dannede afføring i to grupper (score 1), halvformede afføring i NEC-gruppen (score 2) og flydende afføring i NEC-gruppen (score 3). (D) Afføringsscorerne i NEC-gruppen var signifikant højere end i Cont.-gruppen (n = 6 i Cont.-gruppen, n = 13 i NEC-gruppen, *** P < 0,001 med Student's t-test). Den røde trekant repræsenterer adskillelsen af slimhinde og lamina propria, og den sorte pil peger på museafføring. Skalabjælker = 50 μm. Forkortelser: Cont. NEC = nekrotiserende enterocolitis; HE = hæmatoxylin og eosin. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 4
Figur 4: Sammenligning af kropsform og musens overlevelse mellem Cont.-gruppen og NEC-gruppen. (A) Udseendet af de to grupper af mus på dag 5 og dag 10. (B) Dette afsnit viser musenes vægtændringer i to grupper over tid; x-aksen repræsenterer antallet af dage efter, at musene blev født, og y-aksen repræsenterer musenes vægtændringer; **P < 0,01, ***P < 0,001 med Student's t-test for at sammenligne Cont.-gruppen (n = 10) og NEC-gruppen (n = 27) (C) Dette afsnit viser overlevelseskurverne for mus i kontrolgruppen (n = 10) og NEC-gruppen (n = 25). Forkortelser: Cont. NEC = nekrotiserende enterocolitis. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 5
Figur 5: Ileocecal blødning hos børn med NEC og mus med NEC. (A) Blødning og nekrose af det ileocekale område hos børn med NEC. B) blødning og nekrose i det ileocekale område hos mus med NEC (1/13) tarmene hos musene i Cont.-gruppen var imidlertid normale uden blødning og nekrose. Den sorte trekant refererer til tarmblødning og nekrose, og den røde pil viser blødning og nekrose i det ileocekale område. Skalabjælker = 50 μm. Forkortelser: Cont. NEC = nekrotiserende enterocolitis. Klik her for at se en større version af denne figur.

Sammensætning Mus (g/L) Mælkeerstatning (g/L)
protein 69-118 100
fedt 93-175 100
kulhydrat 28-37 50
kalcium 0.97-6.2 2.84
fosfor 1.6-2.72 1.62
natrium 0.66-1.4 1
kalium 1.08-1.7 1.2
klorid 1.17-1.76 1.76
magnesium 0.0001-0.3 >0.12
zink 0.009-0.055 0.018
jern 0.004-0.007 0.017
kobber 0.0017-0.007 0.0018

Tabel 1: Mælkemælkserstatning ingredienser.

Supplerende figur S1: Overlevelseskurven blev signifikant reduceret i NEC-gruppen, så alle mus døde spontant (n = 5 i Cont.-gruppen, n = 10 i NEC-gruppen). Forkortelser: Cont. NEC = nekrotiserende enterocolitis. Klik her for at downloade denne fil.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

NEC er den mest almindelige nødsituation i mave-tarmsystemet for nyfødte med en høj forekomst og dødelighed, især hos for tidligt fødte spædbørn1,2,3. Imidlertid er dets patogenese stadig uklar. Det antages i øjeblikket, at slimhindeskader, patogeninvasion og enteral fodring er højrisikofaktorer for NEC3. Hidtil er de dyr, der anvendes til NEC-modellen, hovedsageligt svin, rotter og mus. De fleste undersøgelser har brugt neonatale C57BL/6-mus til at inducere NEC13,14,15,16, og meget få undersøgelser har brugt BALB/c neonatale mus til at inducere NEC. BALB / c-mus har imidlertid fordelen ved Th cellepolarisering6,7,8, hvilket berettiger yderligere undersøgelse for at afgøre, om de kan være en god NEC-model til Th celleforskning af sygdommen.

Vi henviste til Nadlers patologiske scorestandard for NEC-model17 og fandt ud af, at NEC-gruppens score var signifikant højere end kontrolgruppens. En score ≥ 2 indikerer NEC, og succesraten for at inducere NEC er 38-50%, hvilket er lavere end 77% succesrate for NEC-modellering i undersøgelsen af Caplan et al. (DOI: 10.3109 / 15513819409037698). Vi evaluerede også afføringsscorerne18 for de to grupper af mus og fandt ud af, at NEC-gruppens score var højere end kontrolgruppens. Jo højere score, jo mere alvorlig er tarmdysfunktionen. Alle disse data viser, at etableringen af NEC-modellen var vellykket. Derudover er det opmuntrende, at NEC's neonatale BALB/c-musemodel i et vist omfang kan simulere menneskelig NEC. Blødning og nekrose forekommer i tarmene hos børn med NEC3,19; lignende patologiske tilstande blev observeret i denne model.

Gavage er det vigtigste trin i at fremkalde NEC i musemodellen. Hvis gavageoperationen ikke var dygtigt mestret, var det let at fejlagtigt placere maverøret i luftrøret og få musen til at dø. Under gastrisk gavage blev venstre tommelfinger, langfinger og ringfinger brugt til at klemme begge sider af musens torso, og pegefingeren blev placeret på hovedet for at fastgøre musen på plads. Dette var for at forhindre musen i at bevæge sig rundt og få maverøret til at beskadige spiserøret. Maverøret blev indsat fra venstre hjørne af musens mund. Det er først, når maverøret kommer glat ind i spiserøret uden modstand, at vi kan fortsætte med at indsætte det. LPS eller modermælkserstatning bør kun injiceres efter indsættelse af maverøret 2-3 cm fra musens underlæbe.

Længden af hypoxi bør overvåges nøje. I denne undersøgelse varede hypoxi i 90'erne hver gang. Hvis hypoxi er for lang, vil musene ikke være i stand til at tolerere det og vil dø. Denne model kan bruges til at undersøge NEC-relaterede immunceller, især TH1- og TH2-celler3,9,10,11,20. I fremtiden planlægger vi at undersøge, om denne model er nyttig til at studere Th2-celleresponser i NEC. Derudover introducerede denne undersøgelse også en ny metode til afføringsscoring for at evaluere tarmdysfunktion hos mus med NEC18. Der er dog nogle begrænsninger for denne undersøgelse. For eksempel var succesraten for modellen ikke særlig høj. Der arbejdes på at forbedre metoden til BALB/c NEC-modellering for at øge succesraten ved at justere hypoxiniveauet fra 5 % O2 til 1 % O2 som beskrevet tidligere15.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingen interessekonflikter at oplyse.

Acknowledgments

Forfatterne takker Clinical Biological Resource Bank of Guangzhou Women and Children's Medical Center for at levere den kliniske prøve og Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center for at levere mus. Denne forskning blev støttet af National Natural Science Foundation of China grant 81770510 (R.Z.).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Absolute ethanol Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 100092683
Goat Milk powder  Petag  71795558417
HE dye solution Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. G1003
Isoflurane RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD. R510  
LPS Sigma-Adrich L2880
Medical oxygen various various
Microscope NIKON NIKON imaging system (DS-Ri2)
Neutral resin Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 10004160
Paraffin various various
Premature baby milk powder Abbott 57430
Xylene Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 10023418
1% Hydrochloric acid various various
10% Formalin LEAGENE DF0110

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Horbar, J. D., et al. Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009. Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).
  2. Stoll, B. J., et al. Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network. Pediatrics. 126 (3), 443-456 (2010).
  3. Neu, J., Walker, W. A. Necrotizing enterocolitis. New England Journal of Medicine. 364 (3), 255-264 (2011).
  4. Sangild, P. T., et al. Invited Review: The preterm pig as a model in pediatric gastroenterology. Journal of Animal Science. 91 (10), 4713-4729 (2013).
  5. Cancro, M. P., Sigal, N. H., Klinman, N. R. Differential expression of an equivalent clonotype among BALB/c and C57BL/6 mice. Journal of Experimental Medicine. 147 (1), 1-12 (1978).
  6. Kuroda, E., Yamashita, U. Mechanisms of enhanced macrophage-mediated prostaglandin E2 production and its suppressive role in Th1 activation in Th2-dominant BALB/c mice. Journal of Immunology. 170 (2), 757-764 (2003).
  7. Fornefett, J., et al. Comparative analysis of clinics, pathologies and immune responses in BALB/c and C57BL/6 mice infected with Streptobacillus moniliformis. Microbes and Infection. 20 (2), 101-110 (2018).
  8. Rosas, L. E., et al. Genetic background influences immune responses and disease outcome of cutaneous L. mexicana infection in mice. International Immunology. 17 (10), 1347-1357 (2005).
  9. Sproat, T., Payne, R. P., Embleton, N. D., Berrington, J., Hambleton, S. T cells in preterm infants and the influence of milk diet. Frontiers in Immunology. 11, 1035 (2020).
  10. Nanthakumar, N., et al. The mechanism of excessive intestinal inflammation in necrotizing enterocolitis: an immature innate immune response. PLoS One. 6 (3), 17776 (2011).
  11. Afrazi, A., et al. New insights into the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis: Toll-like receptors and beyond. Pediatric Research. 69 (3), 183-188 (2011).
  12. Auestad, N., Korsak, R. A., Bergstrom, J. D., Edmond, J. Milk-substitutes comparable to rat's milk; their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat. British Journal of Nutrition. 61 (3), 495-518 (1989).
  13. Liu, Y., et al. Lactoferrin-induced myeloid-derived suppressor cell therapy attenuates pathologic inflammatory conditions in newborn mice. Journal of Clinical Investigation. 129 (10), 4261-4275 (2019).
  14. MohanKumar, K., et al. A murine neonatal model of necrotizing enterocolitis caused by anemia and red blood cell transfusions. Nature Communications. 10 (1), 3494 (2019).
  15. He, Y. M., et al. Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation. Nature Medicine. 24 (2), 224-231 (2018).
  16. Cho, S. X., et al. Characterization of the pathoimmunology of necrotizing enterocolitis reveals novel therapeutic opportunities. Nature Communications. 11 (1), 5794 (2020).
  17. Halpern, M. D., et al. Decreased development of necrotizing enterocolitis in IL-18-deficient mice. American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 294 (1), 20-26 (2007).
  18. Wu, N., et al. MAP3K2-regulated intestinal stromal cells define a distinct stem cell niche. Nature. 592 (7855), 606-610 (2021).
  19. Nino, D. F., Sodhi, C. P., Hackam, D. J. Necrotizing enterocolitis: new insights into pathogenesis and mechanisms. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 13 (10), 590-600 (2016).
  20. Chuang, S. L., et al. Cow's milk protein-specific T-helper type I/II cytokine responses in infants with necrotizing enterocolitis. Pediatric Allergy & Immunology. 20 (1), 45-52 (2009).

Tags

Medicin Udgave 177 Nekrotiserende enterocolitis BALB/c mus Immunologi T hjælper type 2 celler

Erratum

Formal Correction: Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis
Posted by JoVE Editors on 03/07/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.

Figure 1 was updated from:

Figure 1
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.

to:

Figure 1
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.

En neonatal BALB / c musemodel af nekrotiserende enterocolitis
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tian, Y., Huang, J., Fu, M., He, Q., … More

Tian, Y., Huang, J., Fu, M., He, Q., Chen, J., Chen, Y., Zhang, R., Zhong, W. A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. J. Vis. Exp. (177), e63252, doi:10.3791/63252 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter