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Un modelo de ratón BALB/c neonatal de enterocolitis necrosante

Published: November 30, 2021 doi: 10.3791/63252
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1, 1, 1
1Provincial Key Laboratory of Research in Structure Birth Defect Disease and Department of Pediatric Surgery, Guangzhou Women and Children’s Medical Center, Guangzhou Medical University
* These authors contributed equally

ERRATUM NOTICE

Summary

La enterocolitis necrosante (ECN) es la enfermedad gastrointestinal (GI) más grave que a menudo ocurre en bebés prematuros, especialmente en bebés de muy bajo peso al nacer, con alta mortalidad y patogénesis poco clara. La causa de la NEC puede estar relacionada con anomalías inflamatorias del sistema regulador inmunitario. Un modelo animal NEC es una herramienta indispensable para la investigación inmune de la enfermedad NEC. Los modelos animales NEC generalmente usan ratones neonatales C57BL / 6J; Los ratones neonatales BALB/c rara vez se utilizan. Los estudios relacionados han demostrado que cuando los ratones están infectados, la diferenciación de células Th2 es predominante en ratones BALB / c en comparación con ratones C57BL / 6J. Los estudios han sugerido que la aparición y el desarrollo de NEC se asocian con un aumento en las células T auxiliares tipo 2 (Th2) y generalmente se acompañan de infección. Por lo tanto, este estudio utilizó ratones BALB/c neonatales para inducir un modelo de NEC con características clínicas similares y cambios patológicos intestinales como los observados en niños con NEC. Se justifica un estudio adicional para determinar si este modelo animal podría usarse para estudiar las respuestas de las células Th2 en NEC.

Abstract

La enterocolitis necrosante (ECN) es la enfermedad gastrointestinal (GI) más grave que a menudo ocurre en bebés prematuros, especialmente en bebés de muy bajo peso al nacer, con alta mortalidad y patogénesis poco clara. La causa de la NEC puede estar relacionada con anomalías inflamatorias del sistema regulador inmunitario. Un modelo animal NEC es una herramienta indispensable para la investigación inmune de la enfermedad NEC. Los modelos animales NEC generalmente usan ratones neonatales C57BL / 6J; Los ratones neonatales BALB/c rara vez se utilizan. Los estudios relacionados han demostrado que cuando los ratones están infectados, la diferenciación de células Th2 es predominante en ratones BALB / c en comparación con ratones C57BL / 6J. Los estudios han sugerido que la aparición y el desarrollo de NEC se asocian con un aumento en las células T auxiliares tipo 2 (Th2) y generalmente se acompañan de infección. Por lo tanto, este estudio utilizó ratones BALB/c neonatales para inducir un modelo de NEC con características clínicas similares y cambios patológicos intestinales como los observados en niños con NEC. Se justifica un estudio adicional para determinar si este modelo animal podría usarse para estudiar las respuestas de las células Th2 en NEC.

Introduction

La enterocolitis necrosante (ECN), la enfermedad gastrointestinal (GI) más grave, ocurre en la mayoría de los bebés prematuros (>90%), especialmente en aquellos con muy bajo peso al nacer (VLBW)1. En los lactantes VLBW, la incidencia de la enfermedad oscila entre el 10% y el 12%, y la mortalidad de los niños diagnosticados con ECN se sitúa entre el 20% y el 30%2,3. La causa de la NEC puede estar relacionada con lesiones mucosas, invasión por bacterias patógenas y alimentación intestinal, lo que puede conducir a respuestas inflamatorias y a la inducción de lesiones intestinales en huéspedes susceptibles3. La patogénesis de la NEC no está clara. Investigaciones relevantes muestran que la respuesta inmune del bebé afectado es anormal, y la susceptibilidad genética, la tensión microvascular y los cambios bacterianos intestinales pueden desempeñar un papel importante en la enfermedad3.

El modelo animal NEC es una herramienta indispensable para la investigación sobre la patogénesis de NEC. Las especies animales utilizadas para los modelos NEC son cerdos, ratas y ratones. Sin embargo, debido al largo período de gestación, los ciclos de crecimiento y los altos costos, en los últimos años, los cerdos no han sido la primera opción para los modelos NEC y han sido reemplazados por ratas o ratones4. Como existen diferencias en el fondo inmune de diferentes cepas de ratón5, diferentes estudios necesitan usar diferentes cepas de ratones para establecer modelos animales NEC. Los ratones BALB/c tienen una característica importante; cuando están infectados o hacen frente a daños externos, la polarización de las células TH2 durante la infección en ratones es significativamente más fuerte que la de otras cepas de ratones6,7,8. Las células T auxiliares desempeñan un papel crucial en la aparición y progresión de nec, especialmente en el desarrollo de células TH23,9,10,11. Por lo tanto, este estudio utilizó ratones BALB / c para establecer el modelo NEC, que podría ser útil para la investigación de la enfermedad NEC en células T.

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Protocol

Esta investigación fue aprobada por el Comité de Ética Médica del Centro Médico de Mujeres y Niños de Guangzhou (NO. 174A01) y el Comité de Ética Animal del Centro de Animales de Laboratorio de Guangzhou Forevergen Biosciences (IACUC-G160100). Todos los animales fueron criados en la misma habitación en un ambiente específico libre de patógenos (SPF), y los experimentos se llevaron a cabo en un ambiente convencional. Los ratones utilizados para la cría tenían 7-8 semanas de edad; los ratones para inducir NEC (n = 72) se separaron de la presa el día 4, y las presas (n = 14) se mantuvieron en la jaula original y amamantaron a los ratones del grupo de control (Cont.) (n = 24).

1. Preparación de reactivos y dispositivos

  1. Preparar el sustituto de la leche para los ratones BALB/c en la proporción correspondiente (leche en polvo prematura para bebés: leche de cabra en polvo = 2:1).
    NOTA: Las composiciones nutricionales finales de la leche de fórmula12 se muestran en la Tabla 1.
  2. Solución de LPS (2,5 mg/ml)
    1. Disolver un total de 10 mg de polvo de LPS en 4 ml de agua esterilizada de doble destilación, mezclar bien y almacenar en un refrigerador a -20 °C después de la alícuota.
      NOTA: La solución de LPS se almacena en la oscuridad a 2-8 °C para uso inmediato o a -20 °C para almacenamiento a largo plazo.

2. Inducir enterocolitis necrosante en ratones BALB/c neonatales

  1. Alimentar a los ratones neonatales.
    1. Mantenga a los ratones neonatales en la misma jaula con la presa, amamantados por la presa en los días 0-4.
    2. En la noche del día 4 (cuando los ratones neonatales pesan 2.5-3 g), separe a los ratones neonatales en el grupo NEC de la presa para inducir NEC, manténgalos en una incubadora de animales y aliméntelos con fórmula. Sin embargo, al grupo cont. se le permite quedarse y ser alimentado por la presa.
      NOTA: Los ratones neonatales que están separados de la presa deben ser criados en una incubadora debido a su débil regulación de la temperatura corporal.
  2. Prepare el tubo de sonda remojándolo en recipientes de alcohol al 75% durante 1-2 minutos y lávelos dos veces en agua limpia y doble destilada.
    NOTA: Para evitar la contaminación cruzada entre los ratones, el proceso anterior debe realizarse después de alimentar a cada ratón.
  3. Inducir el modelo NEC.
    1. Tome los ratones neonatales de la presa el día 4 y ayunarlos durante una noche.
    2. Gavage los ratones con LPS (20-30 μL a la vez) y aliméntelos con fórmula el día 5 (40-50 μL a la vez).
    3. A partir del día 5, someta a los ratones a un ciclo de hipoxia-reoxigenación-frío-choque dos veces al día durante 5 días. Coloque los ratones en un dispositivo de hipoxia al 5% de O2 durante 90 s y reoxigenarlos durante 3 min; repita este proceso cinco veces. A continuación, coloque los ratones en un ambiente de 4 ° C durante 15 minutos y luego transfiéralos a una incubadora. Ver Figura 1A,B para el proceso de inducción.
      NOTA: Se realizó un ciclo de hipoxia-reoxigenación-estimulación en frío una vez por la mañana y otra por la tarde. Se preparó una mezcla de 5% de O2 con 95% de N2 en el recipiente, y la concentración se midió con un detector de oxígeno.
  4. Observe de cerca a todos los ratones, peséelos todos los días, registre la supervivencia de los ratones durante el período de inducción y registre las características de las heces (con o sin heces pegajosas / heces con sangre).
    NOTA: El modelo NEC establecido tiene una duración de 5 días.
  5. El día 10 o antes, cuando los ratones muestren síntomas de NEC (íleo, hematoquecia, diarrea)13, eutanasiar a los ratones mediante anestesia por inhalación con isoflurano, luego recolectar inmediatamente el tejido intestinal. No recolecte tejidos de los ratones que murieron espontáneamente.
    NOTA: En este estudio, el punto final de la eutenasia del ratón se adaptó cuando el ratón mostró hematoquecia y cianosis de todo el cuerpo.

3. Gavage el ratón

  1. Fije la cabeza del ratón, sosteniendo la sonda gástrica en la mano derecha. Inserte la sonda gástrica desde la esquina izquierda de la boca del ratón.
    NOTA: La cabeza se fijó con el dedo índice en la cabeza del ratón y se presionó suavemente hacia atrás y hacia abajo para evitar que el ratón se doblara hacia adelante durante la operación y afectara la inserción del tubo gástrico.
  2. Mueva lentamente el tubo hacia el centro de la boca. Después de insertar el tubo aproximadamente 2-3 cm, empuje 40-50 μL de fórmula o 20-30 μL de LPS en el tracto digestivo. Ver Figura 2A,B para la sonda gavage.
    NOTA: En circunstancias normales, la sonda gástrica se inserta en el tracto digestivo sin problemas. Si el ratón tiene un fuerte reflejo de vómito, el tubo gástrico se ha insertado en la tráquea por error. El tubo gástrico debe extraerse suavemente y dejar que el ratón descanse por un tiempo antes de intentar la sonda de nuevo. Además, el procedimiento de sonda gavage se utiliza para inducir el modelo de NEC antes de la eutanasia de ratones.

4. Recolecte muestras de tejido intestinal fresco para la tinción de hematoxilina y eosina (H&E)

  1. Sumergir el tejido fresco del íleon del ratón en formalina al 10% durante 24 h.
  2. Incrustar los tejidos en parafina y cortarlos en secciones de 4 μm.
  3. Desparafinar las secciones en xileno y rehidratarlas sucesivamente en etanol absoluto, etanol al 95%, etanol al 80%, etanol al 70% y agua destilada, remojando durante 5 min en cada paso. Manche las secciones con solución de hematoxilina durante 5 min y diferéncialas en ácido clorhídrico al 1% en alcohol al 75% durante 5 s. Finalmente, manchelos con solución de eosina durante 1 min.
    NOTA: Después de la tinción con solución de hematoxilina, se debe diferenciar con ácido clorhídrico al 1% en etanol para eliminar la solución de hematoxilina excesivamente unida y el colorante de hematoxilina citoplasmática. La concentración de ácido clorhídrico al 1% es adecuada para el tejido intestinal.
  4. Examine la histopatología del tejido intestinal a un aumento de 40x.

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Representative Results

El modelo NEC de ratón BALB/c fue inducido por la alimentación con fórmula, la alimentación lpS, la hipoxia y la estimulación en frío. Durante el período de inducción, los ratones fueron observados para la patología intestinal, las características de las heces, los cambios en el peso corporal y la supervivencia diaria. Imágenes representativas del intestino delgado durante la inducción de NEC; los números en la imagen representan la puntuación de patología intestinal de 0 (epitelio normal) a 4 (el más grave) (Figura 3A). La puntuación de patología intestinal fue significativamente mayor en el grupo NEC que en el grupo Cont. (Figura 3B). Los números en la imagen representan puntajes de heces de 0 (gránulos bien formados) a 3 (heces líquidas) (Figura 3C). En el día 10, las puntuaciones de heces de los grupos nec fueron significativamente más altas en el grupo NEC, lo que indica que la disfunción intestinal en el grupo NEC fue más grave (Figura 3D). En el día 5, el primer día de inducción del modelo NEC, no hubo diferencias significativas en el tamaño corporal entre los dos grupos. Sin embargo, en el día 10, los ratones en el grupo NEC eran significativamente más delgados y más pequeños de la cabeza a la cola que los ratones en el grupo Cont. (Figura 4A).

Durante los 5 días durante los cuales se estableció el modelo, el peso de los ratones en el grupo NEC aumentó lentamente o incluso mostró un crecimiento negativo, y la tasa de supervivencia de los ratones en el grupo NEC disminuyó gradualmente en comparación con el grupo Cont. (Figura 4B, C). Además, se utilizó otro lote de ratones para inducir el modelo NEC pero sin recolectar los tejidos; para el día 13, todos los ratones de este grupo de NEC habían muerto, y la curva de supervivencia se redujo significativamente (Figura suplementaria S1). La Figura 5A muestra la morfología y los resultados patológicos (necrosis del tejido de la mucosa intestinal) del área ileocecal resecada del tejido intestinal de los pacientes con NEC en este hospital. En este estudio, los ratones del grupo NEC (1/13) desarrollaron hemorragia ileocecal y necrosis (Figura 5B).

Figure 1
Figura 1: Inducción del proceso del modelo NEC BALB/c. (A) Los ratones del grupo NEC fueron separados de la presa al nacer hasta que tenían 4 días de edad (el día 4) y ayunaron esa noche. El modelo NEC fue inducido desde el día 5 en adelante después del nacimiento y duró 5 días. Las muestras de tejido intestinal se recolectaron el día 10 o antes. Los ratones en el grupo de Cont. fueron alojados y amamantados por la presa. (B) La secuencia de operaciones para cada día después de inducir el modelo NEC. Abreviaturas: Cont. = control; NEC = enterocolitis necrosante; LPS = lipopolisacárido. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 2
Figura 2: Sonda gástrica. (A) En este estudio se utilizó un dispositivo especializado de sonda gavage, que se combinó con un tubo de plástico y una jeringa. (B) El tubo de sonda entró desde la esquina de la boca en un ángulo de 45° con respecto a la línea vertical. (C) El tubo se movió lentamente hacia el centro de la boca del ratón para asegurarse de que el tubo gástrico y el esófago estuvieran en el mismo nivel vertical. Abreviaturas: D= diámetro. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 3
Figura 3: Modelo NEC de ratón BALB/c. (A) Fotomicrografías de la puntuación de patología intestinal de los dos grupos, por ejemplo, mostrando mucosa intacta y normal en el grupo Cont. (puntuación 0), separación leve de hinchazón submucosa o lámina propia en dos grupos (puntuación 1), separación moderada de submucosos y/o lámina propia en el grupo NEC (puntuación 2), separación severa de submucosa y/o lámina propia en el grupo NEC (puntuación 3), desaparición de las vellosidades intestinales con necrosis intestinal en el grupo de ECN (puntuación 4). (B) Las puntuaciones de patología intestinal en los ratones después de la inducción de NEC fueron más altas que las del grupo de Cont. (n = 9 en el grupo de Cont., n = 35 en el grupo de NEC, *** P < 0,001 con la prueba t de Student). (C) Fotomicrografías de las puntuaciones de las heces de dos grupos, por ejemplo, que muestran gránulos bien formados en el grupo Det. (puntuación 0), heces formadas en dos grupos (puntuación 1), heces semiformadas en el grupo NEC (puntuación 2) y heces líquidas en el grupo NEC (puntuación 3). (D) Las puntuaciones de heces en el grupo NEC fueron significativamente más altas que en el grupo Cont. (n = 6 en el grupo Cont., n = 13 en el grupo NEC, *** P < 0,001 con la prueba t de Student). El triángulo rojo representa la separación de la mucosa y la lámina propia, y la flecha negra apunta a las heces de ratón. Barras de escala = 50 μm. Abreviaturas: Cont. = control; NEC = enterocolitis necrosante; HE = hematoxilina y eosina. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 4
Figura 4: Comparación de la forma del cuerpo y la supervivencia de los ratones entre el grupo Cont. y el grupo NEC. (A) La aparición de los dos grupos de ratones en el Día 5 y el Día 10. (B) Esta sección muestra los cambios de peso de los ratones en dos grupos a lo largo del tiempo; el eje x representa el número de días después del nacimiento de los ratones, y el eje y representa los cambios de peso de los ratones; **P < 0,01, ***P < 0,001 con la prueba t de Student para comparar el grupo Cont. (n = 10) y el grupo NEC (n = 27) (C) Esta sección muestra las curvas de supervivencia de los ratones en el grupo control (n = 10) y el grupo NEC (n = 25). Abreviaturas: Cont. = control; NEC = enterocolitis necrosante. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 5
Figura 5: Hemorragia ileocecal en niños con NEC y ratones con NEC. (A) Hemorragia y necrosis del área ileocecal en niños con NEC. (B) Hemorragia y necrosis en el área ileocecal de ratones con NEC (1/13); sin embargo, los intestinos de los ratones en el grupo Cont. fueron normales, sin hemorragia ni necrosis. El triángulo negro se refiere a la hemorragia intestinal y la necrosis, y la flecha roja muestra hemorragia y necrosis del área ileocecal. Barras de escala = 50 μm. Abreviaturas: Cont. = control; NEC = enterocolitis necrosante. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Composición Ratón (g/L) Sustituto de la leche (g/L)
proteína 69-118 100
gordo 93-175 100
Carbohidrato 28-37 50
calcio 0.97-6.2 2.84
fósforo 1.6-2.72 1.62
sodio 0.66-1.4 1
potasio 1.08-1.7 1.2
cloruro 1.17-1.76 1.76
magnesio 0.0001-0.3 >0,12
zinc 0.009-0.055 0.018
hierro 0.004-0.007 0.017
cobre 0.0017-0.007 0.0018

Tabla 1: Ingredientes lácteos de leche de fórmula.

Figura suplementaria S1: La curva de supervivencia se redujo significativamente en el grupo NEC, de modo que todos los ratones murieron espontáneamente (n = 5 en el grupo Cont., n = 10 en el grupo NEC). Abreviaturas: Cont. = control; NEC = enterocolitis necrosante. Haga clic aquí para descargar este archivo.

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Discussion

La ECN es la emergencia del sistema gastrointestinal más frecuente para los neonatos, con una alta incidencia y mortalidad, especialmente en prematuros1,2,3. Sin embargo, su patogénesis aún no está clara. Actualmente se cree que el daño de la mucosa, la invasión de patógenos y la alimentación enteral son factores de alto riesgo para NEC3. Hasta la fecha, los animales utilizados para el modelo NEC son principalmente cerdos, ratas y ratones. La mayoría de los estudios han utilizado ratones C57BL/6 neonatales para inducir NEC13,14,15,16, y muy pocos estudios han utilizado ratones neonatales BALB/c para inducir NEC. Sin embargo, los ratones BALB/c tienen la ventaja de la polarización de las células Th6,7,8, lo que justifica un estudio adicional para determinar si pueden ser un buen modelo NEC para la investigación de células Th de la enfermedad.

Nos referimos al estándar de puntuación patológica de Nadler del modelo NEC17 y encontramos que la puntuación del grupo NEC fue significativamente mayor que la del grupo control. Una puntuación ≥ 2 indica NEC, y la tasa de éxito de la inducción de NEC es del 38-50%, que es inferior a la tasa de éxito del 77% del modelado nec en el estudio de Caplan et al. (DOI: 10.3109 / 15513819409037698). También evaluamos las puntuaciones de heces18 de los dos grupos de ratones y encontramos que las puntuaciones del grupo NEC eran más altas que las del grupo control. Cuanto mayor sea la puntuación, más grave será la disfunción intestinal. Todos estos datos muestran que el establecimiento del modelo NEC fue exitoso. Además, es alentador que el modelo de ratón NEONATAL BALB/c de NEC pueda simular NEC humano hasta cierto punto. La hemorragia y la necrosis ocurren en los intestinos de los niños con NEC3,19; en este modelo se observaron condiciones patológicas similares.

Gavage es el paso clave para inducir NEC en el modelo de ratón. Si la operación de sonda no se dominaba de manera competente, era fácil colocar por error el tubo gástrico en la tráquea y hacer que el ratón muriera. Durante la sonda gástrica, el pulgar izquierdo, el dedo medio y el dedo anular se utilizaron para sujetar ambos lados del torso del ratón, y el dedo índice se colocó en la cabeza para fijar el ratón en su lugar. Esto fue para evitar que el ratón se moviera y causara que la sonda gástrica dañara el esófago. La sonda gástrica se insertó desde la esquina izquierda de la boca del ratón. Es solo cuando la sonda gástrica entra en el esófago suavemente sin resistencia que podemos seguir insertándola. LpS o leche de fórmula debe inyectarse solo después de insertar el tubo gástrico a 2-3 cm del labio inferior del ratón.

La duración de la hipoxia debe ser monitoreada cuidadosamente. En este estudio, la hipoxia duró 90 s cada vez. Si la hipoxia es demasiado larga, los ratones no podrán tolerarla y morirán. Este modelo se puede utilizar para investigar las células inmunes relacionadas con NEC, especialmente las células TH1 y TH23,9,10,11,20. En el futuro, planeamos investigar si este modelo es útil para estudiar las respuestas de las células Th2 en NEC. Además, este estudio también introdujo un nuevo método de puntuación de heces para evaluar la disfunción intestinal en ratones con NEC18. Sin embargo, hay algunas limitaciones en este estudio. Por ejemplo, la tasa de éxito del modelo no fue muy alta. Se están realizando esfuerzos para mejorar el método de modelado BALB/c NEC para aumentar la tasa de éxito ajustando el nivel de hipoxia del 5% O2 al 1% O2, como se describió anteriormente15.

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Disclosures

Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.

Acknowledgments

Los autores agradecen al Banco de Recursos Biológicos Clínicos del Centro Médico de Mujeres y Niños de Guangzhou por proporcionar la muestra clínica y al Centro de Animales de Laboratorio de Guangzhou Forevergen Biosciences por proporcionar ratones. Esta investigación fue apoyada por la fundación de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China 81770510 (R.Z.).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Absolute ethanol Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 100092683
Goat Milk powder  Petag  71795558417
HE dye solution Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. G1003
Isoflurane RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD. R510  
LPS Sigma-Adrich L2880
Medical oxygen various various
Microscope NIKON NIKON imaging system (DS-Ri2)
Neutral resin Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 10004160
Paraffin various various
Premature baby milk powder Abbott 57430
Xylene Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 10023418
1% Hydrochloric acid various various
10% Formalin LEAGENE DF0110

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References

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Tags

Medicina Número 177 Enterocolitis necrosante ratones BALB/c Inmunología Células T auxiliares tipo 2

Erratum

Formal Correction: Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis
Posted by JoVE Editors on 03/07/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.

Figure 1 was updated from:

Figure 1
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.

to:

Figure 1
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.

Un modelo de ratón BALB/c neonatal de enterocolitis necrosante
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Tian, Y., Huang, J., Fu, M., He, Q., … More

Tian, Y., Huang, J., Fu, M., He, Q., Chen, J., Chen, Y., Zhang, R., Zhong, W. A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. J. Vis. Exp. (177), e63252, doi:10.3791/63252 (2021).

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