Summary
本方案描述了一种外科手术，用于去除左心病引起的肺动脉高压大鼠模型中的升主动脉束带。该技术研究肺循环和右心中反向重塑的内源性机制，从而为逆转肺动脉高压和/或右心室功能不全的策略提供信息。
Abstract
左心病引起的肺动脉高压 （PH-LHD） 是最常见的 PH 形式，但其病理生理学特征不如肺动脉高压 （PAH）。因此，用于治疗或预防PH-LHD的批准治疗干预措施缺失。不推荐用于治疗 PAH 患者 PH 的药物治疗 PH-LHD，因为在左侧充盈压升高的情况下，肺血管阻力 （PVR） 降低和肺血流量增加可能导致左心失代偿和肺水肿。需要制定新的策略来逆转LHD患者的PH值。与PAH相反，PH-LHD是由于左心衰竭期间血液充血进入肺循环引起的机械负荷增加而发生的。临床上，主动脉瓣置换术对左心室 （LV） 进行机械卸载，或在终末期心力衰竭患者中植入左心室辅助装置，不仅使肺动脉和右心室 （RV） 压力正常化，也使 PVR 正常化，从而为肺血管系统反向重塑提供间接证据。利用已建立的PH-LHD大鼠模型，该模型由压力过载引发的左心衰竭引发，随后发展为PH，开发了一种模型来研究这种生理逆向重塑过程的分子和细胞机制。具体而言，进行了主动脉切除手术，导致左心室心肌的反向重塑及其卸载。同时，可检测到右心室收缩压完全正常化和右心室肥大的显著但不完全逆转。该模型可能是研究肺循环和RV中生理反向重塑机制的宝贵工具，旨在开发治疗PH-LHD和其他形式的PH的治疗策略。
Introduction
心力衰竭是发达国家的主要死因，预计未来十年将增加25%。肺动脉高压（PH） - 肺循环中血压的病理性升高 - 影响约70%的终末期心力衰竭患者;世界卫生组织将PH归类为左心病引起的肺动脉高压（PH-LHD）1。PH-LHD 是由收缩压和/或舒张性左心室 （LV） 功能受损引起的，该功能导致充盈压升高和血液被动充血进入肺循环2。尽管最初是可逆的，但由于肺循环所有区室（即动脉、毛细血管和静脉）的肺血管重塑，PH-LHD 逐渐变得固定3，4。可逆和固定 PH 均增加心房室后负荷，最初导致适应性心肌肥大，但最终导致心房扩张、运动功能减退、纤维化和失代偿，从而逐渐导致心房室衰竭1，2，5，6。因此，PH加速心力衰竭患者的疾病进展并增加死亡率，特别是在通过植入左心室辅助装置（LVAD）和/或心脏移植进行手术治疗的患者中7，8，9。目前，没有治愈性疗法可以逆转肺血管重塑的过程，因此需要在适当的模型系统中进行基本的机制研究。
重要的是，临床研究表明，PH-LHD作为主动脉瓣狭窄患者的常见并发症，在主动脉瓣置换术后的早期可以迅速改善10。类似地，在一项为期 5 年的随访研究中，高（>3 Wood 单位）的术前肺血管阻力 （PVR） 在硝普钠上是可逆的，但在心脏移植后可持续地正常化11。同样，通过使用植入式脉动和非脉动性心室辅助装置12，13，14，可以在几个月内完成LHD患者可逆和固定PVR的充分降低以及RV功能的改善。目前，驱动肺循环和RV心肌逆转重塑的细胞和分子机制尚不清楚。然而，他们的理解可能为生理途径提供重要的见解，这些途径可能在治疗上被利用来逆转PH-LHD和其他形式的PH中的肺血管和RV重塑。
充分复制PH-LHD病理生理学和分子特征的合适临床前模型可用于大鼠手术主动脉束带（AoB）引起的压力超负荷诱导的充血性心力衰竭的转化研究4，15，16。与横主动脉收缩（TAC）17小鼠模型中由于压力超负荷引起的类似心力衰竭相比，AoB大鼠升主动脉高于主动脉根部的束带不会在左颈动脉中产生高血压，因为束带部位是左颈动脉从主动脉流出的近端。因此，AoB不会像TAC18的特征那样在皮层中引起左侧神经元损伤，并且可能会影响研究结果。与其他手术诱导的PH-LHD的啮齿动物模型相比，一般的大鼠模型，特别是AoB，被证明更健壮，可重复，并复制PH-LHD患者肺循环特征的重塑。同时，围手术期致死率低19。AoB大鼠左心室压力升高和左心室功能障碍诱导PH-LHD发展，导致RV压力升高和RV重塑。因此，AoB大鼠模型在包括我们自己在内的独立小组之前的一系列研究中被证明是非常有用的，以确定肺血管重塑的病理机制并测试PH-LHD4，15，20，21，22，23，24，25的潜在治疗策略。
本研究利用AoB大鼠模型建立了主动脉拆解外科手术，研究了肺血管系统和RV中反向重塑的机制。此前，已经开发了小鼠26 和大鼠27 的主动脉剥离等心肌反向重塑模型，以研究调节左心室肥厚消退的细胞和分子机制，并测试潜在的治疗方案以促进心肌 恢复。此外，数量有限的早期研究探索了主动脉拆带对大鼠PH-LHD的影响，并表明主动脉解除可以逆转肺小动脉内侧肥大，使前内皮素1的表达正常化并改善肺血流动力学27，28，为心力衰竭大鼠PH的可逆性提供了证据。在这里，拆带手术的技术程序得到优化和标准化，例如，通过应用气管切开术代替气管插管，或者通过使用定义内径的钛夹进行主动脉束带而不是用钝针26，27的聚丙烯缝合线，从而提供更好的手术程序控制，增加模型的可重复性和提高存活率。
从科学的角度来看，PH-LHD解除结合模型的意义不仅在于证明心力衰竭中心血管和肺部表型的可逆性，更重要的是，在识别触发和/或维持肺动脉反向重塑的分子驱动因素，作为未来治疗靶向的有希望的候选者。
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Protocol
所有程序均按照“实验动物护理和使用指南”（实验动物资源研究所，2011年第8版）进行，并得到德国国家卫生和社会事务办公室（Landesamt für Gesundheit und Soziales，柏林）地方政府动物护理和使用委员会的批准;议定书编号为。G0030/18）。首先，通过在上主动脉（主动脉条带，AoB）上放置内径为0.8mm的钛夹（主动脉条带，AoB）来手术诱导充血性心力衰竭〜100g体重（bw）（见 材料表）。如前所述29，30。在AoB（图1）后的第3周，进行去绑（Deb）手术以从主动脉中取出夹子。在AoB大鼠中进行的外科手术和PH逆转的验证在 图1中示意性地描述。
1. 手术准备
- 通过高压灭菌对所需的手术器械进行灭菌（图2）。
- 手术前30分钟腹膜内注射卡洛芬（5mg / kg体重）（见 材料表）镇痛。
- 通过静脉注射氯胺酮（87毫克/千克体重）和甲苯噻嗪（13毫克/千克体重）麻醉大鼠。
- 使用电动剃须刀去除动物领口和胸部的毛发。
- 在手术过程中涂抹一滴眼药膏以保护眼睛。
- 将大鼠置于无菌手术台上的仰卧位。用胶带小心地固定动物的腹部和四肢。
注意：为了保持体温，在手术台下放置37°C的加热垫。避免加热头部区域，以防止眼睛干燥。 - 用聚维酮碘/碘伏溶液消毒动物皮肤。注意原发性AoB手术的疤痕和缝合线，并覆盖手术区域。
- 通过捏脚趾确保足够的麻醉深度。
注意：手术期间需要定期控制麻醉深度。
2. 气管切开术和机械通气
注意：在整个手术过程中，在处理非无菌设备后更换手套。
- 用细剪刀（图2A），做一个7-10毫米长的宫颈中线切口（图3A）。
- 在一对钝镊子的帮助下（图2B'），解剖颈部软组织以暴露舌骨肌。在中线分割肌肉以可视化气管。从原发 AoB 手术中切下缝线并取下缝线。
- 使用倾斜的Noyes弹簧剪刀在两个软骨环之间做约2毫米的气管切口（图2C，3B）。将外径为2mm的气管插管（图2D）插入气管中，并用4-0丝缝线固定（图2E，3C）。
- 将气管插管连接到机械呼吸机（参见材料表），同时将死区保持在最小水平（图3D-E）。在潮气量 （Vt） 为 8.5 mL/kg bw 的情况下，保持围手术期肺通气，呼吸频率为 90 次/分钟。
3. 主动脉切除术
- 使用细剪刀在第二和第三肋骨之间做一个约20毫米长的皮肤切口（图3F）。
- 在较小的手术剪刀的帮助下（图2F），小心地扩散肌肉并逐层切割（图3G）。沿第二肋和第三肋骨之间的肋间间隙切开10毫米的侧切口。
注意：胸骨中线需要小心接近以避免出血。 - 使用肋骨扩张器（图2G）扩展第二和第三根肋骨之间的肋间空间以创建手术窗口（图3H）。
- 在钝镊子的帮助下（图2B，B'），小心地将胸腺与心脏和导管动脉分开，以用夹子可视化主动脉（图4A）。
- 在镊子的帮助下握住夹子，并小心地取下夹子周围的结缔组织以将其暴露。
注意：避免用镊子握住或抬起主动脉，因为它可能会伤害主动脉，导致出血和致命的结果。 - 在针架（图2H）的帮助下，打开夹子（图4B）并将其从胸腔中取出。
- 在关闭胸部之前，打开肺肺不张，确保充分的肺活量而不会过度扩张，继续机械通气，Vt为9.5 mL/kg bw，再持续10分钟，然后恢复到8.5 mL/kg bw的Vt以招募肺部并解决可能的气胸。
- 使用4-0丝通过简单的中断缝合线关闭深层肌肉。然后用简单的连续缝合线连接上部肌肉和皮肤（图5A，B）。
4. 气管拔管
- 断开气管套管与通气机的连接。专心观察大鼠，直到重新建立自主呼吸。如果动物在断开连接时无法自主呼吸，请重新连接呼吸机并继续通气5分钟。然后重复该过程。
- 重新建立自主呼吸后，从气管中取出套管，并用海绵点清洁气管周围的液体（图2I）（见 材料表）。
- 使用6-0 prolene用简单的缝合线关闭气管（图2E'和 图5C）。然后使用4-0丝在简单的中断缝合线中关闭舌骨肌（图5D），并通过简单的连续缝合线连接皮肤（图5E）。在此过程中用聚维酮碘/碘伏溶液清洁和消毒肌肉和皮肤。
5. 术后护理
- 完成外科手术后，小心地将动物移动到带有补充氧气和红外灯的恢复笼中，以使动物在恢复阶段保持温暖和足够的氧气。将氧气面罩靠近老鼠的鼻子。任何时候每个回收笼子只养一只动物。
- 动物醒来后，小心地将其移动到有水和食物的普通笼子里。在接下来的12小时内，以2小时为间隔控制操作动物的健康状况。
- 完成外科手术后，每天通过静脉注射卡洛芬（5毫克/千克体重）进行镇痛，持续一周。
- 为避免细菌感染，术后在饮用水中施用阿莫西林（500mg / L）一周。
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Representative Results
首先，在AoB动物的拆解手术之前和之后，通过经胸超声心动图确认主动脉切除术的成功（图6）。为此，在胸骨旁长轴（PLAX）B模式视图中评估主动脉弓。可视化AoB动物中升主动脉上夹子的位置及其在Deb手术后不存在的位置（图6A，B）。接下来，通过脉冲波多普勒成像评估主动脉血流（图6C-F）。在剪辑之前和之后测量的AoB动物的峰值血流速度分别为733.24±17.39 mm / s和5215.08±48.05 mm / s（n = 8只动物）（图6C，E），表明整个AoB位点的陡峭梯度。夹子切除后，在相应的主动脉位置，峰值血流速度分别为1093.79±28.97 mm / s和2578.73±42.27 mm / s，显示梯度明显衰减，符合功能性去区带（图6D，F）。为了探究主动脉切除术逆转左心衰竭，在左心室心肌中访问脑利钠肽（BNP）的表达水平，BNP是评估心脏病31的临床常规参数。在主动脉束带化后的第3周和第5周，与假手术对照组相比，AoB动物的BNP产量显着增加。相比之下，Deb大鼠在第5周以与假动物相当的水平表达BNP，表明主动脉切除逆转左心室衰竭（图7A-C）。同时，通过经胸超声心动图评估左心室功能显示，与AoB大鼠相比，Deb动物的左心室射血分数和左心室体积增加（图7D-E）。虽然Deb动物的左心室射血分数与假大鼠相当，但Deb大鼠的左心室体积未能完全归一化为假组中的值，这表明左心室功能的逆转是不完整的。
为了探究Deb动物是否可以作为临床前模型来研究PH-LHD中反向肺血管和右心室（RV）重塑，使用microtip Millar导管评估左心室收缩压（LVSP）和右心室收缩压（RVSP）。简而言之，再次用氯胺酮（87毫克/千克体重）和甲苯噻嗪（13毫克/千克体重）麻醉大鼠，气管切除术，并如上所述通气。在正中开胸术32后分别通过（第一）左心室和（第二）右心室的顶点进行心导管插入术，因为AoB动物的主动脉带阻止了通过血管途径直接插入左心室。在氯胺酮/甲苯噻嗪过量安乐死后，心脏被切除，心室肥厚被评估为左心室的重量，包括中隔（LV + S）或右心室（RV）与体重（BW）一致。根据AoB大鼠作为PH-LHD的既定模型，与假手术后的动物相比，AoB动物在手术后3周显示出LVSP和RVSP以及LV和RV肥大的显着增加（图8A-F）。在AoB后第3周进行去绑（Deb）手术导致在AoB后第3周和第5周没有Deb的AoB动物相比，LVSP和LV肥大显着降低，这表明从主动脉夹子取出后左心室血流动力学正常化逆转了左心室重塑（图8C，D）。与第3周和第5周的AoB大鼠相比，Deb动物也显示出RVSP和RV / BW的显着降低，表明PH-LHD的成功逆转（图8E，F）。值得注意的是，Deb大鼠的RVSP与假动物测量的值相当，表明RV血流动力学完全正常化。相比之下，Deb动物的RV肥大仅被RV / BW部分逆转，与假对照相比，仍然显着增加（图8E，F）。
图1：AoB大鼠外科手术和PH逆转验证的示意图。 该示意图描述了本研究中用于测试拆装手术是否逆转PH-LHD的不同实验组。假的，假的操作控制;AoB，主动脉带;Deb，解散。三角形标记手术干预的时间点：第0周的初级手术（假手术或AoB;红色）和第3周的二次手术（Deb;绿色）。圆圈分别标记了通过左心室和左心室压力以及肥大测量来评估PH-LHD的终点分析。 请点击此处查看此图的大图。
图2：手术器械。 （A）细剪刀碳化钨。（B） Moria Iris 镊子和 （B'） 锯齿状 Graefe 镊子。镊子的尖端显示为放大。（C）诺伊斯弹簧剪刀。（D） 气管插管。（E， E'）分别为4-0和6-0缝合线。（F）细剪刀碳化钨。（G） 肋骨吊具。（H） 马蒂厄针座。（一）海绵点组织。 请点击此处查看此图的大图。
图3：气管切开术和开胸术。 图片说明了气管切开术的手术步骤。（A）宫颈中线切口。（B）两个软骨环之间的气管切口。（C）气管插管插入气管并用缝合线固定。（D）气管套管连接到机械呼吸机。（E）图像说明了开胸术的手术步骤。（F）第二肋骨和第三肋骨之间的皮肤切口。（G） 切割肌肉。（H）通过扩散第二和第三肋骨来创建胸外科窗口。 请点击此处查看此图的大图。
图4：主动脉收缩夹 在体内 和离体的可视化 。 （A）图像显示了AoB大鼠的胸腔，在升主动脉上放置了钛夹。（B）图像显示关闭和打开的 离体剪辑。星号标记针架 在体内 压缩以打开夹子的部分。 请点击此处查看此图的大图。
图5：伤口闭合。 图像说明了上胸部肌肉（A）和皮肤（B）通过简单的连续缝合线的闭合。气管（C）和舌下肌（D）通过简单的缝合线闭合，颈部皮肤（E）通过简单的连续缝合线闭合。 请点击此处查看此图的大图。
图6：切除手术前后的主动脉血流量 （A-B）通过经胸超声心动图可视化主动脉在主动脉束带大鼠（AoB，左）和大鼠在拆装手术后（Deb，右）。箭头显示（A）中主动脉上的钛夹（B）中不存在。（C，D）脉冲波多普勒超声心动图图像分别显示AoB大鼠（C）中夹子前的血流和Deb大鼠（D）中相应主动脉段的血流，分别在主动脉拆解手术前一天和后一天拍摄。（英、华）类似地，图像显示AoB大鼠（E）夹子后主动脉段的血流，以及Deb大鼠（F）中相应的主动脉段的血流，分别在主动脉拆装手术前一天和后一天拍摄。绿松石垂直线表示主动脉峰值流速的测量值。 请点击此处查看此图的大图。
图7：通过主动脉拆解使左心室功能正常化。 （A）代表性的蛋白质印迹显示BNP的蛋白质水平，并在主动脉束带后第3周（n = 5）和相应的假对照（n = 5）的AoB大鼠左心室（LV）中以GAPDH作为负荷对照。（B）代表性的蛋白质印迹显示AoB大鼠左心室（LV）在主动脉束带后第5周（n = 4），Deb大鼠在第5周（n = 5）和假对照组在初级手术后相应时间（n = 4）的BNP和GAPDH。（C） 箱形图和胡须图显示，在初次手术后相应时间，BNP表达归一化为GAPDH和假对照的定量。框分别显示中位数，25和75百分位;晶须表示最小值和最大值。对于统计分析，使用了学生的t检验33 。*p 值< 0.05。（D）条形图（平均±标准偏差）显示第5周的假（n = 4），AoB（n = 9）和Deb（n = 7）动物中的左心室射血分数和体积，通过超声心动图从M和B模式图像中测量。（E）代表性的M模式超声心动图图像显示假动物，AoB和Deb动物在第5周左心室分数缩短的变化。对于统计分析，使用了Mann-Whitney U检验33 。*p 值< 0.05。 请点击此处查看此图的大图。
图8：心室血流动力学正常化，心脏肥厚通过主动脉切除逆转。 （A）主动脉束带（AoB）后3周大鼠左心室（LV）和右心室（RV）血压的代表性测量值与相应的假对照相比。（B）代表性图像显示，与假对照相比，主动脉束带3周后AoB大鼠出现心脏肥大。（C-F）箱形图和须图显示左心室收缩压 （LVSP; C），左心室肥大（[左心室+S]/BW; D），右心室收缩压（RVSP; E）和房车肥大（房车/体重; F）在手术后3周和5周的假冒和AoB动物中，以及Deb大鼠的标准化参数（与3周和5周AoB组相比）。框分别显示中位数，25和75百分位;晶须表示最小值和最大值。n = 分析9-12只动物进行血流动力学测量，每组n = 7-12只大鼠测量心脏重量。对于统计分析，使用了Mann-Whitney U检验。*p 值< 0.05。 请点击此处查看此图的大图。
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Discussion
在这里，报道了在大鼠AoB模型中用于主动脉切除的详细手术技术，该技术可用于研究PH-LHD的可逆性以及驱动肺血管系统和RV反向重塑的细胞和分子机制。幼年大鼠主动脉收缩三周导致PH-LHD明显表现为左心室压力增加，左心室肥大，伴随RV压力增加和RV肥大。AoB后第3周的主动脉瓣解除能够在Deb后两周内卸载左心室并完全逆转左心室肥大。同时，主动脉拆解也导致右心室压力完全正常化和右心室肥大部分逆转。
因此，本模型模拟了临床场景的关键方面，其中先前已发现具有连续流动特性的可植入式非脉动性LVAD机械卸载左心室可以逆转心力衰竭患者的PH值34，35。在回顾性分析中，LVAD支持显示可逆或固定PH的心力衰竭患者的肺动脉压力降低到相似程度，固定PH定义为平均肺动脉压>25 mm Hg，肺血管阻力>2.5 Wood Unit，尽管进行了药物治疗，但平均压力经肺梯度>12 mm Hg35。重要的是，这些发现34，35 提供了间接证据，表明左心室卸载不仅减少了被动性肺淤血和肺血管张力的继发性变化，而且通过“生理”机制（即通过适应改变的血液动力学）触发了肺血管系统的反向重塑。对驱动肺血管系统反向重塑的细胞和分子过程的深入，多组学分析可以为确定治疗心力衰竭患者PH的新治疗方案开辟新的途径，也可能为其他形式的PH（包括PAH）开辟新的途径。目前的AoB大鼠去栓合模型为RVSP的完全归一化证实了PH的有效逆转等分析提供了独特的可能性，从而允许机制研究确定具有恢复患病肺血管系统中稳态过程的能力的途径。
有了类似的原理，本模型可以进一步用于研究驱动RV反向重塑的细胞内和细胞间过程.RV功能最近被认为是心血管疾病发病率和死亡率预后的重要预测因子。然而，临床上尚未批准任何疗法来改善RV功能36。因此，在动物模型中研究RV心肌反向重塑过程的能力为解决重大知识差距和关键医疗需求提供了独特的机会。
AoB大鼠技术上具有挑战性的主动脉切除手术的成功取决于手术技能和精确的围手术期策略。以下概述了可能通过过度出血（1-5）或呼吸不足（6）导致围手术期致死的关键外科手术步骤，以及避免这些并发症的建议。
（1）开胸术时，需要用剪刀小心地接近胸骨中线，以免损伤乳腺内动脉。（2）为了可视化心脏和导管动脉，应动员胸腺并小心地向颅方向重新定位。在拆解手术中，胸腺组织通常 通过 原始AoB手术的术后粘连连接到心脏和动脉。这些粘连应用一对钝镊子小心地分开，以避免对心血管结构的伤害。（3）在拆解手术中，带有夹子的主动脉经常嵌入结缔组织中。必须用钝镊子轻轻解剖该结缔组织以可视化夹子。在这里，手术前进行的经胸超声心动图是一个有用的准备步骤，可以确定夹子是位于主动脉根部附近，升主动脉中间还是靠近头臂动脉。这些知识节省了手术期间分配夹子的宝贵时间。（4）夹子的方向是一个关键步骤，在初始主动脉束带手术期间必须仔细考虑。为了便于在主动脉切除术期间进行最佳评估和快速打开夹子，需要由针座压缩的部分（图4B）应朝腹侧。在拆解手术期间进行夹子定向是可行的，但有主动脉损伤的风险。对于夹子重新定向，需要用镊子握住夹子，同时小心地移除周围的结缔组织，然后应移动和转动夹子。应避免用镊子握住主动脉。（5）拆封时，夹子应用一只手用镊子握住，另一只手用针架打开。主动脉不需要腹侧抬起。（6）拔管PH-LHD大鼠在完成拆装程序后，存在相当大的呼吸衰竭风险，动物通常在手术后10-20分钟内死亡，同时仍在麻醉下。在此期间，左肺肺不张是最常见的死亡原因，在闭胸前长时间机械通气有助于肺募集，并保证手术后有足够的呼吸。
我们还建议，与先前研究26，27中进行的气管插管相比，气管切开术在外科手术过程中更好地控制适当的通气，这在主动脉切除期间特别相关。这一概念基于以下基本原理：（1）气管切开术，在我们的实验室中常规进行围手术期肺通气，是一种简单而安全的技术，没有围手术期或术后并发症。（2）气管切开术消除了食管插管或气管损伤的风险;它可以精确定位和固定气管插管，并在外科手术的所有步骤中对套管进行持续的视觉控制。（3）在主动脉切除时，AoB动物已经处于心力衰竭状态，对额外的压力更敏感;因此，气管插管带来的潜在风险可能会增加致死率。（4）最后，当手术动物从呼吸机断奶但未能产生自主呼吸时，气管切开术允许快速再插管并与呼吸机重新连接，从而可能挽救生命，因为能够延长术后通气。
本研究报告了在大鼠初始主动脉束带化后3周进行的主动脉切除技术。对于旨在比较肺血管系统和RV在不同PH阶段的反向重塑的研究，所述程序也可以在主动脉束带后的较晚时间点进行。然而，谨慎是必要的，因为随着时间的推移，主动脉周围的疤痕和结缔组织可能会变得更加丰富，使手术进一步复杂化，并需要额外的故障排除和完善。同时，所报告协议的基本原则仍然适用。
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Disclosures
作者没有利益冲突需要声明。所有合著者都已看到并同意手稿的内容。
Acknowledgments
这项研究得到了DZHK（德国心血管研究中心）对CK和WMK的资助，BMBF（德国教育和研究部）在VasBio框架内向CK的赠款，以及WMK在VasBio，SYMPATH和PROVD的框架内的赠款，以及德国研究基金会（DFG）对WMK（SFB-TR84 A2，SFB-TR84 C9， SFB 1449 B1、SFB 1470 A4、KU1218/9-1 和 KU1218/11-1）。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Amoxicillin | Ratiopharm | PC: 04150075615985 | Antibiotic |
| Anti-BNP antibody | Abcam | ab239510 | Western Blotting |
| Aquasonic 100 Ultrasound gel | Parker Laboratories | BT-025-0037L | Echocardiography consumables |
| Bepanthen | Bayer | 6029009.00.00 | Eye ointment |
| Carprosol (Carprofen) | CP-Pharma | 401808.00.00 | Analgesic |
| Clip holder | Weck stainless USA | 523140S | Surgical instruments |
| Fine scissors Tungsten carbide | Fine Science Tools | 14568-12 | Surgical scissors |
| Fine scissors Tungsten carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Surgical scissors |
| High-resolution imaging system | FUJIFILM VisualSonics, Amsterdam, Netherlands | VeVo 3100 | Echocardiography machine. Images were acquired with pulse-wave Doppler mode, M-mode and B-mode |
| Isoflurane | CP-Pharma | 400806.00.00 | Anesthetic |
| Ketamine | CP-Pharma | 401650.00.00 | Anesthetic |
| Mathieu needle holder | Fine Science Tools | 12010-14 | Surgical instruments |
| Mechanical ventilator (Rodent ventilator) | UGO Basile S.R.L. | 7025 | Volume controlled respirator |
| Metal clip | Hemoclip | 523735 | Surgical consumables |
| Microscope | Leica | M651 | Manual surgical microscope for microsurgical procedures |
| Millar Mikro-Tip pressure catheters | ADInstruments | SPR-671 | Hemodynamics assessment |
| Moria Iris forceps | Fine Science Tools | 11373-12 | Surgical forceps |
| Noyes spring scissors | Fine Science Tools | 15013-12 | Surgical scissors |
| Povidone iodine/iodophor solution | B/Braun | 16332M01 | Disinfection |
| PowerLab | ADInstruments | 4_35 | Hemodynamics assessment |
| Prolene Suture, 4-0 | Ethicon | EH7830 | Surgical consumables |
| Rib spreader (Alm selfretaining retractor blunt, 70 mm, 2 3/4″) | Austos | AE-BV010R | Surgical instruments |
| Serrated Graefe forceps | Fine Science Tools | 11052-10 | Surgical forceps |
| Silk Suture, 4-0 | Ethicon | K871 | Surgical consumables |
| Skin disinfiction solution (colored) | B/Braun | 19412M07 | Disinfection |
| Spectra 360 Elektrode gel | Parker Laboratories | TB-250-0241H | Echocardiography consumables |
| Sponge points tissue | Sugi | REF 30601 | Surgical consumables |
| Sprague-Dawley rat | Janvier Labs, Le Genest-Saint-Isle, France | Study animals | |
| Tracheal cannula | Outer diameter 2 mm | ||
| Xylazin | CP-Pharma | 401510.00.00 | Anesthetic |
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