Summary
Det föreliggande protokollet beskriver en standardiserad kirurgisk metod för den elastasinducerade AAA-modellen genom direkt applicering av elastas på adventitia av infrarenal abdominal aorta hos möss.
Abstract
Abdominal aortaaneurysm (AAA), även om den främst är asymptomatisk, är potentiellt livshotande eftersom bristningen av AAA vanligtvis har ett förödande resultat. För närvarande finns det flera distinkta experimentella modeller av AAA, var och en betonar en annan aspekt i patogenesen av AAA. Den elasasinducerade AAA-modellen är den näst mest använda AAA-modellen för gnagare. Denna modell innefattar direkt infusion eller applicering av svin bukspottkörtelelastas (PPE) till det infrarenala segmentet av aortan. På grund av tekniska utmaningar utförs de flesta elastasinducerade AAA-modeller idag med den externa applikationen snarare än en intraluminal infusion av personlig skyddsutrustning. Infiltrationen av elastas kommer att orsaka nedbrytning av elastiska lameller i de mediala skikten, vilket resulterar i förlust av aortaväggsintegritet och efterföljande utvidgning av bukaortan. En nackdel med den elastasinducerade AAA-modellen är dock den oundvikliga variationen i hur operationen utförs. Specifikt kan den kirurgiska tekniken för att isolera det infrarenala segmentet av aortan, materialet som används för aortaförpackning och PPE-inkubation, den enzymatiska aktiviteten hos PPE och tidslängden för PPE-applicering alla vara viktiga determinanter som påverkar den eventuella AAA-bildningshastigheten och aneurysmdiametern. I synnerhet kan skillnaden i dessa faktorer från olika studier om AAA leda till reproducerbarhetsproblem. Denna artikel beskriver en detaljerad kirurgisk process av den elastasinducerade AAA-modellen genom direkt applicering av personlig skyddsutrustning på adventitia av den infrarenala bukaortan i musen. Efter denna procedur kan en stabil AAA-bildningshastighet på cirka 80% hos manliga och kvinnliga möss uppnås. Konsistensen och reproducerbarheten av AAA-studier med hjälp av en elastasinducerad AAA-modell kan förbättras avsevärt genom att upprätta ett standardkirurgiskt ingrepp.
Introduction
Abdominal aortaaneurysm (AAA) definieras som en segmentell dilatation av bukaortan med minst 50% ökning av kärlets diameter1. AAA är potentiellt dödligt, eftersom brottet kan resultera i en extremt hög dödlighet, även med intervention 2,3,4. Det har rapporterats att AAA är ansvarig för cirka 13 000 dödsfall årligen i USA, vilket gör det till den 10: e ledande dödsorsaken 1,5.
Patogenesen av AAA är ännu inte helt förstådd 6,7,8. För att undersöka den molekylära mekanismen för AAA och testa potentiella terapeutiska mål har flera experimentella AAA-modeller fastställts 9,10. Gnagaremodeller av AAA inkluderar elastas, kalciumklorid, angiotensin II och xenograftmodeller, bland vilka den elastasinducerade AAA-modellen är den näst mest använda modellen 10,11,12,13,14,15,16,17. Denna modell innefattar direkt infusion eller applicering av svin bukspottkörtelelastas (PPE) till det infrarenala segmentet av aortan. Penetreringen av elastas i det mediala skiktet av aortan kommer att orsaka nedbrytning av elastiska lameller och infiltration av inflammatoriska celler, vilket leder till förlust av aortaväggsintegritet och efterföljande utvidgning av bukaorta 7,18. Den elastasinducerade AAA-modellen rapporterades först av Anidjar et al. 1990 med råttor, där ett isolerat segment av aortan perfusionerades medelastas 17. Senare under 2012 rapporterades en modifierad modell med periadventitiell applicering av personlig skyddsutrustning av Bhamidipati et al.19. Numera är de flesta operationer för den elastasinducerade AAA-modellen inspirerade av Bhamidipatis grupp och utförs med extern applikation snarare än intraluminal perfusion av PPE. Även om den externa applikationen har mindre krav på fina kirurgiska färdigheter, är incidensen av AAA relativt lägre och storleken något mindre än för intraluminal perfusion11,19.
Även om den används i stor utsträckning i AAA-studier, har den elastasinducerade AAA-modellen vissa begränsningar. En varning i denna modell är de oundvikliga variationerna i hur operationen utförs, vilket kan leda till frågan om reproducerbarhet. Till exempel kan skillnaden finnas i det kirurgiska ingreppet angående hur det infrarenala segmentet av aortan isoleras och vilken del av segmentet som väljs för PPE-applikation bland olika laboratorier. Den enzymatiska aktiviteten hos personlig skyddsutrustning och varaktigheten för inkubation av personlig skyddsutrustning kan också variera. Dessa är emellertid alla väsentliga determinanter som påverkar den slutliga AAA-bildningshastigheten och aneurysmdiametern. Variationen av dessa kritiska determinanter gör datajämförelse av AAA-studier från olika grupper som använder denna modell mycket svår. Därför behövs ett standardiserat kirurgiskt ingrepp som ett verktyg för att få jämförbara resultat från olika institutioner.
Denna artikel beskriver ett standardiserat kirurgiskt protokoll för den elastasinducerade AAA-modellen genom direkt applicering av personlig skyddsutrustning på adventitia av infrarenal abdominal aorta hos möss. Detaljer om kirurgiskt material och procedurer som är nödvändiga för framgångsrik och robust generering av AAA hos möss med hjälp av denna modell kommer också att diskuteras.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djurprotokollen godkändes av University of Michigan Institutional Animal Care and Use Committee (PRO00010092). Manliga och kvinnliga C57BL / 6J vildtyp (WT) möss, ~ 7 veckors ålder, användes för experimenten.
1. Beredning av djur
- Mata mössen med standard chow diet (se Materialtabell) före och efter operationen.
OBS: Olika stammar och åldrar av möss kan användas. Ålder från 5,5-12 veckor rekommenderas dock för att uppnå maximal incidens. - För varje mus, administrera 5 mg/kg Karprofen subkutant 30 min före induktion av anestesi.
- Efter 30 min, administrera 100 mg/kg ketamin och 5 mg/kg xylazin via intraperitoneal injektion för att inducera anestesi.
2. Förberedelse för operation
- Förbered det kirurgiska materialet.
- Skär nitrilhandskarna i remsor på 4 cm x 4 mm. Skär bomullspuddarna i bitar av 3 cm x 2 mm. Autoklaver dessa med andra kirurgiska instrument, inklusive kirurgisk sax, vävnadstäcett och Halsted-Mosquito hemostater (se Materialtabell).
- Placera musen i ryggläge på en steril absorberande förbandsplatta. Immobilisera fram- och bakpoten med kirurgisk tejp.
- Använd bomullsspetsade applikatorer (se Materialtabell) för att borsta hårborttagningslotion över mitten och nedre buken och sedan svabba området med kirurgisk gasväv för att ta bort håret.
- Desinficera det kirurgiska området minst tre gånger i en cirkulär rörelse med alternerande applikationer av 70% alkohol och en jodbaserad eller klorhexidinbaserad skrubba. Låt torka.
3. Kirurgisk procedur
- Utför följande steg för att komma åt bukhålan.
- Testa musen för bristen på tå-nypa svar före hudsnitt.
- Gör ett 2,5 cm längsgående snitt på huden längs mittlinjen i mitten och underlivet med kirurgisk sax.
- Dra försiktigt upp den underliggande muskeln och gör ett 2,5 cm längsgående snitt längs linea alba för att komma åt bukhålan.
- Exponera buken aorta.
- Använd vätade bomullsspetsade applikatorer för att flytta tarmarna och magen till höger om musen.
OBS: Helst kommer detta att exponera det infrarenala segmentet av aortan. Om aortan är svår att lokalisera kan höger njure och höger njurartär identifiera aortan (eftersom den högra njuren har en något lägre anatomisk plats än vänster njure). - Använd pincett för att försiktigt ta bort bindväven som täcker buken aorta och sämre vena cava (IVC).
OBS: Bukaortan och IVC finns i samma kärlmantel. Det är onödigt att ta bort all bindväv eftersom fullständigt avlägsnande skulle öka risken för att skada dessa två kärl. - Använd pincett för att försiktigt dissekera baksidan av bukaortan och IVC från de underliggande musklerna.
OBS: Spetsarna på tången ska gå in i mantelns baksida tvärs över och skapa ett hål i fascian som förbinder manteln med de underliggande musklerna. När hålet är gjort, förläng dess storlek genom att långsamt släppa tången. - Placera en bit av 4 cm x 4 mm handskranden (som tidigare nämnts, steg 2.1.1) genom baksidan av bukaortan och IVC och räta sedan ut randen. Placera randen ~ 0,5 cm från höger njurartär.
OBS: Se till att hålet är tillräckligt stort så att den omgivande fascian inte vrider randen. - Ovanför randen, placera en bit av 3 cm x 2 mm bomullsdyna genom baksidan av bukaortan och IVC, räta sedan ut bomullsdynan.
- Använd vätade bomullsspetsade applikatorer för att flytta tarmarna och magen till höger om musen.
- Inkubera elastasen.
- Använd en pipett för att släppa 30 μL svin bukspottkörtelelastas (total enzymatisk aktivitet på 1,8 enhet, se materialtabell) på aortasegmentet ovanför bomullsdynan, linda sedan bomullsdynan och randen runt aortan och IVC. Skölj en bit av 10 cm x 10 cm gasväv med steril 0,9% saltlösning och placera den på buken.
OBS: Gasbindningen behöver endast partiell sköljning eftersom överdosering skulle riskera att späda ut elasasen under. - Efter 30 min, ta bort randen och bomullsdynan med pincett.
- Använd en pipett för att släppa 30 μL svin bukspottkörtelelastas (total enzymatisk aktivitet på 1,8 enhet, se materialtabell) på aortasegmentet ovanför bomullsdynan, linda sedan bomullsdynan och randen runt aortan och IVC. Skölj en bit av 10 cm x 10 cm gasväv med steril 0,9% saltlösning och placera den på buken.
- Stäng bukhålan enligt stegen nedan.
- Bevattna aortan och bukhålan med 500 μL steril 0,9% saltlösning. Använd en 10 cm x 10 cm gasbindning för att absorbera den återstående saltlösningen.
- Återanpassa muskelskikten med en löpande 6-0 icke-absorberbar monofilamentsutur.
- Stäng huden med 3-4 avbrutna 6-0 icke-absorberbara monofilamentsuturer.
4. Postoperativ vård
- Administrera 5 mg/kg karprofen subkutant på postoperativ dag 1.
- Ta bort hudsuturer på den postoperativa dagen 10.
5. Mätning av bukaortaaneurysmdiameter
- Avliva mössen genom att överdoseraCO 2 på postoperativ dag 14. Detta representerar tidpunkten för maximal dilatation.
- Gå till bukhålan enligt beskrivningen i steg 3.1.
- Utför vaskulär perfusion genom att injicera 10 ml 0,9% saltlösning i cirkulationen genom vänster kammare.
- Exponera det infrarenala segmentet av bukaortan enligt beskrivningen i steg 3.1-3.2. Ta försiktigt bort den omgivande bindväven och separera bukaortan från IVC.
- Mät diametern på bukaortan med en bromsok.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Totalt tjugotre 7 veckor gamla vildtypsmöss (WT), inklusive 12 honor och 11 män, opererades enligt det presenterade protokollet. Överlevnaden var 100% (kirurgisk mortalitet exkluderad). Maximal bukaortadiameter mättes med en bromsok.
AAA definierades som att utvidga bukaortan med en ökning av kärlets diameter med 50%. Därför valdes en 50% ökning av den maximala abdominala aortadiametern som brytpunkt för framgångsrik AAA-induktion. Baserat på detta kriterium var incidensen av AAA på postoperativ dag 14 91,7% för hondjur, med 11 av 12 som genomgick kirurgi utvecklade AAA; medan incidensen för handjur var 72,7%, med 8 av 11 som genomgick operation utvecklade AAA (Figur 1A). Bland de 19 djur där AAA förekommer finns det en 1,7-faldig och 1,6-faldig ökning av maximal bukaortadiameter hos kvinnor och män jämfört med icke-kirurgiska kontroller (Figur 1B). Representativa bilder av aortor från icke-kirurgiska och kirurgiska grupper på postoperativ dag 14 visas i figur 1C.
Figur 1: Karakterisering av AAA hos möss som genomgått operation. All mätning görs på postoperativ dag 14. (A) Incidensen av AAA hos möss som genomgick operation. (B) Maximal diameter för den infrarenala aortan hos möss från både icke-kirurgiska (n = 4 för både hona och manliga) och kirurgiska grupper (n = 12 för hona; n = 11 för hane). Uppgifterna är medelvärden ± SEM. *p < 0,05. (C) Representativa bilder av aortor hos möss från både icke-kirurgiska och kirurgiska grupper. Skalstång = 2 mm. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den elastasinducerade AAA-modellen rapporterades först av Anidjar et al. med råttor 199017. En mängd olika modifierade versioner har introducerats under de senaste trettio åren, tillsammans med betydande förbättringar av de kirurgiska teknikerna 19,20,21,22. Hundratals institut använder elastasinducerade AAA-modeller som den näst mest använda experimentella gnagarmodellen för AAA-studier12. Det är bara naturligt att olika grupper kommer att utföra operationen för denna modell något annorlunda. Som ett resultat är en varning för denna modell de oundvikliga variationerna av hur operationen utförs, vilket gör jämförelsen av data från olika grupper som använder denna modell mycket svår. Variationerna inkluderar men är inte begränsade till hur infrarenalt segment av aortan exponeras, hur omfattande fascialskiktet som täcker aortan rengörs, hur lång inkubationsperioden är, liksom materialet som används för aortaförpackning och elastainkubation och volymen elastas som läggs till förpackningsmaterialet. Dessa är emellertid alla väsentliga determinanter som påverkar den slutliga incidensen och diametern för AAA. Ett standardiserat kirurgiskt ingrepp behövs för att lösa frågan om reproducerbarhet orsakad av dessa variationer. Ett standardiserat kirurgiskt protokoll presenteras här för den elastasinducerade AAA-modellen genom direkt applicering av personlig skyddsutrustning på adventitia av den infrarenala bukaortan i musen.
Bortsett från den konsekventa induktionshastigheten för AAA äger detta protokoll fördelarna med låga kostnader och kort driftstid. Det kirurgiska materialet som används i detta protokoll kan alla enkelt erhållas till låga kostnader. Den genomsnittliga driftstiden för detta protokoll är 50 minuter, inklusive 30 min inkubation av personlig skyddsutrustning. Dessa fördelar kommer att möjliggöra enklare ledning av många djurstudier, vilket bidrar till mer betydande statistisk kraft och reproducerbarhet.
Exponering av bukaortan är det mest kritiska steget i detta protokoll. Det är viktigt att ta bort bindväven i kärlmanteln som omger bukaortan och IVC så att elastas får en bättre chans att tränga in i aortans mediala skikt. Att helt ta bort dessa bindväv är dock tidskrävande och riskerar att skada den underliggande aortan och IVC. Detta är det steg från vilket den mesta kirurgiska dödligheten orsakas. Om IVC eller aorta är skadad kommer de flesta djur inte att överleva följande 48 timmar även om de överlever operationen, eventuellt på grund av den kontinuerliga blödningen efter operationen som leder till exsanguination. Av denna anledning behöver en delikat balans mellan att exponera aortan i största möjliga utsträckning och inte skada de stora fartygen fundera över. Att lämna en liten mängd bindväv på kärlets mantel kommer att avsevärt minska perioperativ dödlighet samtidigt som det inte påverkar AAA: s förekomst. Därför rekommenderas det inte att helt avlägsna bindväven som täcker aortan och IVC för exponering för bukaortan. Ändå måste extrem försiktighet vidtas under bukaortan och IVC-dissektionen från intilliggande bindväv.
Anatomiskt är bukaortan och IVC nära fästa via ett tunt fasciaskikt och inneslutna tillsammans i samma kärlmantla. Vissa experimentella modeller som venös trombos kan kräva att aortan separeras från intilliggande IVC. Det är dock onödigt att göra det i den elasinducerade AAA-modellen23. Vissa kanske föredrar att rotera kärlmantlet medurs så att aortan kommer att ligga precis ovanför IVC, och elasas kan sedan appliceras direkt på aortan. Detta är onödigt eftersom bomullsdynan under är mättad med elastas, och aortan kommer kontinuerligt att utsättas för elastas oavsett dess anatomiska förhållande till IVC. Det rekommenderas att baksidan av aortan och IVC separeras tillräckligt från de underliggande musklerna via pincett . Om dissektionen inte är tillräckligt omfattande i detta steg kommer spänningskraften att skapas av den omgivande fascian och musklerna på randen och bomullsdynan, vilket resulterar i deras vridning och efterföljande ineffektiva absorbans av elastas.
En begränsning av detta protokoll är den slutliga formen av den inducerade AAA. Det är oundvikligt att när det släpps på aortan kommer en del elastas att strömma till andra segment av aortan som inte är inslagna av bomullsplattan. Dessutom kan närliggande blödning orsakad av dissektion, även av liten mängd, tvätta elastas bort från bomullsdynan till andra aortasegment under 30 minuters inkubationsperiod. Dessa kommer att leda till att elastas tränger in i andra segment av aortan, vilket orsakar nedbrytning av det mediala skiktet och utvidgning av bukaortan som inte är begränsad till segmentet som är insvept av bomullsplattan. Som ett resultat, istället för att uppvisa fusiformformade aneurysmer orsakade av fokal dilatation, visar vissa djur allmän utvidgning av ett långt segment av bukaortan. Den maximala aortadiametern hos dessa djur som har kontinuerlig utvidgning av aortan visar emellertid fortfarande en mer än 50% ökning jämfört med kontroller. Under tiden observeras ingen skillnad i maximal aortadiameter mellan djur som uppvisar kontinuerlig utvidgning och fokal utvidgning av bukaortan, vilket tyder på att aneurysmens form är en indikator på varken framgångsrik AAA-induktion eller faktisk AAA-storlek i detta fallprotokoll.
En annan begränsning av detta protokoll är att tillämpa denna metod på större djur. Den aktuella elastasinducerade AAA-modellen bör lätt appliceras på andra små djur som råttor. Emellertid, elastas ensam kanske inte är tillräckligt för större djur som grisar eller primater att inducera en konsekvent AAA fenotyp. Till exempel rapporterade Marinov et al. att elastasperfusion ensam hos svin kan orsaka vissa histologiska förändringar, inklusive elastinstörning, men kunde inte inducera konsekvent aneurysm24. Shannon A et al. rapporterade en svinmodell av infrarenal AAA inducerad av elastas. Det kräver emellertid en kombination av ballongangioplastik, perfusion, topikal elastas och en diet som innehåller BAPN (en lysyloxidashämmare som förhindrar kollagentvärbindning) med tanke på den betydande hållbarheten hos aorta25. Därför verkar det som om tillämpningen av ett standardiserat elastas-inducerat AAA-protokoll hos större djur fortfarande är ganska utmanande på grund av skillnaden i storlek och hållbarhet hos aortan mellan möss och större djur, de tekniska utmaningarna och den potentiellt höga kostnaden.
Sammanfattningsvis, trots vissa begränsningar, kan AAA induceras konsekvent hos både manliga och kvinnliga möss i detta standardiserade protokoll. Konsistensen och reproducerbarheten av AAA-studier som använder den elastasinducerade AAA-modellen förväntas förbättras avsevärt genom att fastställa detta standardkirurgiska ingrepp.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Vi tackar enheten för laboratoriedjurmedicin vid University of Michigan för deras hjälp med djurfoder och avel. Denna studie stöds av NIH RO1 HL138139, NIH RO1 HL153710 till J. Zhang, NIH RO1 HL109946, RO1 HL134569 till Y.E. Chen och American Heart Association grant 20POST35110064 till G. Zhao.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 6-0 non-absorbable monofilament suture | Pro Advantage | P420697 | |
| Carprofen | Zoetis Inc. | NDC: 54771-8507 | |
| Chow Diet | LabDiet | 3005659-220 | PicoLab 5L0D |
| Cotton Applicator | Dynarex | 4303 | |
| Cotton Pad | Rael | UPC: 810027130969 | |
| GraphPad Prism 8 | GraphPad Software Inc. | Version 8.4.3 | |
| Grarfe Forceps | Fine Science Tools | 11051-10 | |
| Halsted Mosquito Hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 | |
| Ketamine | Par Pharmaceutical | NDC: 42023-0115-10 | |
| Nitrile gloves | Fisherbrand | 19-130-1597 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15140122 | |
| Porcine pancreatic elastase | Sigma-Aldrich | E1250-100MG | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| Sterile 0.9% saline solution | Baxter | 2B1324X | |
| Xylazine | Akorn | NDC: 59399-110-20 |
References
- Kent, K. C. Clinical practice: Abdominal aortic aneurysms. The New England Journal of Medicine. 371 (22), 2101-2108 (2014).
- Karthikesalingam, A., et al. Mortality from ruptured abdominal aortic aneurysms: Clinical lessons from a comparison of outcomes in England and the USA. Lancet. 383 (9921), 963-969 (2014).
- Noel, A. A., et al. Ruptured abdominal aortic aneurysms: The excessive mortality rate of conventional repair. Journal of Vascular Surgery. 34 (1), 41-46 (2001).
- Lederle, F. A., et al. Rupture rate of large abdominal aortic aneurysms in patients refusing or unfit for elective repair. JAMA. 287 (22), 2968-2972 (2002).
- Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: Final data for 2009. National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1 (2011).
- Daugherty, A., Cassis, L. A. Mechanisms of abdominal aortic aneurysm formation. Current Atherosclerosis Reports. 4 (3), 222-227 (2002).
- Quintana, R. A., Taylor, W. R. Cellular mechanisms of aortic aneurysm formation. Circulation Research. 124 (4), 607-618 (2019).
- Kuivaniemi, H., Ryer, E. J., Elmore, J. R., Tromp, G. Understanding the pathogenesis of abdominal aortic aneurysms. Expert Review of Cardiovascular Therapy. 13 (9), 975-987 (2015).
- Trollope, A., Moxon, J. V., Moran, C. S., Golledge, J. Animal models of abdominal aortic aneurysm and their role in furthering management of human disease. Cardiovascular Pathology. 20 (2), 114-123 (2011).
- Patelis, N., et al. Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development. Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).
- Senemaud, J., et al. Translational relevance and recent advances of animal models of abdominal aortic aneurysm. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (3), 401-410 (2017).
- Lysgaard Poulsen, J., Stubbe, J., Lindholt, J. S. Animal models used to explore abdominal aortic aneurysms: A systematic review. European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 52 (4), 487-499 (2016).
- Tsui, J. C. Experimental models of abdominal aortic aneurysms. Open Cardiovascular Medicine Journal. 4, 221-230 (2010).
- Manning, M. W., Cassi, L. A., Huang, J., Szilvassy, S. J., Daugherty, A. Abdominal aortic aneurysms: Fresh insights from a novel animal model of the disease. Vascular Medicine. 7 (1), 45-54 (2002).
- Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride. Journal of Surgical Research. 99 (2), 371-376 (2001).
- Allaire, E., Guettier, C., Bruneval, P., Plissonnier, D., Michel, J. B. Cell-free arterial grafts: Morphologic characteristics of aortic isografts, allografts, and xenografts in rats. Journal of Vascular Surgery. 19 (3), 446-456 (1994).
- Anidjar, S., et al.
- Sun, J., et al. Mast cells modulate the pathogenesis of elastase-induced abdominal aortic aneurysms in mice. Journal of Clinical Investigation. 117 (11), 3359-3368 (2007).
- Bhamidipati, C. M., et al. Development of a novel murine model of aortic aneurysms using peri-adventitial elastase. Surgery. 152 (2), 238-246 (2012).
- Pyo, R., et al. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1641-1649 (2000).
- Tanaka, A., Hasegawa, T., Chen, Z., Okita, Y., Okada, K. A novel rat model of abdominal aortic aneurysm using a combination of intraluminal elastase infusion and extraluminal calcium chloride exposure. Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1423-1432 (2009).
- Busch, A., et al. Four surgical modifications to the classic elastase perfusion aneurysm model enable haemodynamic alterations and extended elastase perfusion. European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 56 (1), 102-109 (2018).
- Liang, W., et al. KLF11 protects against venous thrombosis via suppressing tissue factor expression. Thrombosis and Haemostasis. , (2021).
- Marinov, G. R., et al. Can the infusion of elastase in the abdominal aorta of the Yucatan miniature swine consistently produce experimental aneurysms. Journal of Investigative Surgery. 10 (3), 129-150 (1997).
- Shannon, A. H., et al. Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm. Journal of Visualized Experiments. (153), e60169 (2019).
