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Bioengineering

Caractérisation viscoélastique de fantômes de gélatine imitant les tissus mous à l’aide de l’indentation et de l’élastographie par résonance magnétique

Published: May 10, 2022 doi: 10.3791/63770

Summary

Cet article présente une démonstration et un résumé des protocoles de fabrication de fantômes de gélatine qui imitent les tissus mous, ainsi que la caractérisation viscoélastique correspondante à l’aide de l’indentation et de l’élastographie par résonance magnétique.

Abstract

La caractérisation des propriétés biomécaniques des tissus biologiques mous est importante pour comprendre la mécanique tissulaire et explorer les mécanismes biomécaniques liés à la maladie, aux blessures et au développement. La méthode d’essai mécanique est le moyen le plus simple de caractérisation tissulaire et est considérée comme une vérification pour la mesure in vivo . Parmi les nombreuses techniques de test mécanique ex vivo , le test d’indentation fournit un moyen fiable, en particulier pour les échantillons petits, difficiles à fixer et viscoélastiques tels que le tissu cérébral. L’élastographie par résonance magnétique (EMR) est une méthode cliniquement utilisée pour mesurer les propriétés biomécaniques des tissus mous. Sur la base de la propagation des ondes de cisaillement dans les tissus mous enregistrée à l’aide de MRE, les propriétés viscoélastiques des tissus mous peuvent être estimées in vivo sur la base de l’équation d’onde. Ici, les propriétés viscoélastiques des fantômes de gélatine avec deux concentrations différentes ont été mesurées par EMR et indentation. Les protocoles de fabrication fantôme, de test et d’estimation du module ont été présentés.

Introduction

La plupart des tissus biologiques mous semblent avoir des propriétés viscoélastiques qui sont importantes pour comprendre leur lésion et leur développement 1,2. En outre, les propriétés viscoélastiques sont des biomarqueurs importants dans le diagnostic d’une variété de maladies telles que la fibrose et le cancer 3,4,5,6. Par conséquent, la caractérisation des propriétés viscoélastiques des tissus mous est cruciale. Parmi les nombreuses techniques de caractérisation utilisées, le test mécanique ex vivo d’échantillons de tissus et l’élastographie in vivo par imagerie biomédicale sont les deux méthodes les plus utilisées.

Bien que diverses techniques d’essais mécaniques aient été utilisées pour la caractérisation des tissus mous, il n’est pas facile de satisfaire aux exigences relatives à la taille de l’échantillon et aux conditions d’essai. Par exemple, les essais de cisaillement doivent avoir des échantillons fixés fermement entre les plaques de cisaillement7. Les essais biaxiaux conviennent mieux aux tissus membranaires et ont des exigences de serrage spécifiques 8,9. Un test de compression est couramment utilisé pour les tests tissulaires, mais ne peut pas caractériser des positions spécifiques dans un échantillon10. Le test d’indentation n’a pas d’exigences supplémentaires pour fixer l’échantillon de tissu et peut être utilisé pour mesurer de nombreux échantillons de tissus biologiques tels que le cerveau et le foie. De plus, avec une petite tête de pénétrateur, les propriétés régionales au sein d’un échantillon pourraient être testées. Par conséquent, des tests d’indentation ont été adoptés pour tester une variété de tissus mous 1,3,11.

La caractérisation des propriétés biomécaniques des tissus mous in vivo est importante pour les études translationnelles et les applications cliniques de la biomécanique. Les modalités d’imagerie biomédicale telles que l’imagerie par ultrasons (US) et l’imagerie par résonance magnétique (RM) sont les techniques les plus utilisées. Bien que l’imagerie américaine soit relativement bon marché et facile à réaliser, elle souffre d’un faible contraste et est difficile à mesurer des organes tels que le cerveau. Capable d’imager des structures profondes, l’élastographie par résonance magnétique (EMR) a pu mesurer une variété de tissus mous 6,12, en particulier le cerveau13,14. Avec des vibrations externes appliquées, MRE pourrait mesurer les propriétés viscoélastiques des tissus mous à une fréquence spécifique.

Des études ont montré qu’à 50-60 Hz, le module de cisaillement du cerveau normal est ~1,5-2,5kPa 5,6,13,14,15 et ~2-2,5 kPa pour le foie normal 16. Par conséquent, les fantômes de gélatine qui ont des propriétés biomécaniques similaires ont été largement utilisés pour imiter les tissus mous à des fins de test et de validation17,18,19. Dans ce protocole, des fantômes de gélatine avec deux concentrations différentes ont été préparés et testés. Les propriétés viscoélastiques des fantômes de gélatine ont été caractérisées à l’aide d’un dispositif électromagnétique EMRsur mesure 14 et d’un dispositif d’indentation 1,3. Les protocoles de test pourraient être utilisés pour tester de nombreux tissus mous tels que le cerveau ou le foie.

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Protocol

1. Préparation fantôme de gélatine

  1. Peser la gélatine, le glycérol et l’eau conformément au tableau 1. Mélanger la poudre de gélatine avec de l’eau pour obtenir la solution de gélatine.
    NOTA: Les concentrations des composants individuels pour la préparation des deux fantômes sont indiquées dans le tableau 1. Plus la concentration de gélatine est élevée, plus le fantôme est rigide.
  2. Chauffer la solution de gélatine à 60 °C au bain-marie. Ajouter du glycérol à la solution de gélatine tout en maintenant la température.
    NOTE: Le glycérol stabilise les mélanges de gélatine en augmentant leur température de fusion et leur module de cisaillement17.
  3. Remuer la solution et la chauffer à nouveau à 60 °C. Verser la solution mélangée dans un récipient qui sera utilisé pour les essais d’EMR et d’indentation. Refroidir la solution à température ambiante et attendre que la solution soit solidifiée.

2. Test EMR

  1. Placez la plaque vibrante sur le dessus du fantôme de gélatine. Assurez-vous que le contact entre le fantôme et la plaque vibrante est ferme (Figure 1A).
    NOTE: La plaque de vibration est en polyamide avec une dimension de 50 x 50 x 5 mm3.
  2. Placez le fantôme de gélatine dans la bobine de tête. Placez des éponges et des sacs de sable autour du fantôme de gélatine pour vous assurer que le fantôme est bien placé. Utilisez un actionneur électromagnétique sur mesure avec une barre de transmission14,18. Montez un actionneur électromagnétique sur la bobine de tête. Connectez la barre de transmission à la plaque vibrante (Figure 1B).
  3. Connectez les lignes électriques de l’actionneur à l’amplificateur. Connectez les lignes de commande au contrôleur (Figure 1C).
  4. Paramètres de l’actionneur et de l’IRM
    1. Réglez la forme d’onde, la fréquence de vibration et l’amplitude dans le générateur de fonctions. Réglez l’amplitude de vibration souhaitée en ajustant l’amplificateur de puissance.
      REMARQUE: Ici, la forme d’onde est définie sur sinusoïdale dans le générateur de fonctions; la fréquence de vibration est réglée sur 40 Hz ou 50 Hz, et l’amplitude est réglée sur 1,5 Vpp. Dans l’amplificateur de puissance, le rapport d’amplification est réglé sur 40%.
    2. Réglez le générateur de fonctions pour qu’il fonctionne en mode déclenchement. Connectez la ligne de déclenchement au port de déclenchement externe de l’appareil IRM.
    3. Réglez la fréquence de balayage EMR (actionneur) sur la même que celle du générateur de fonctions, de sorte que le gradient de codage de mouvement soit synchronisé avec le mouvement de la plaque vibrante.
  5. Mesure et analyse des données
    1. Suivez les procédures de positionnement d’imagerie de routine. Utilisez une séquence EMR basée sur l’écho de gradient (GRE) 2D pour l’imagerie du fantôme de gélatine20. Réglez les paramètres d’imagerie GRE-MRE comme suit : angle de retournement = 30° ; TR/TE = 50/31 ms; Champ de vision = 300 mm; Épaisseur de tranche = 5 mm; Taille du voxel = 2,34 x 2,34 mm2.
    2. Mesurez les images de phase à quatre points temporels dans un cycle sinusoïdal. Appliquez des dégradés d’encodage de mouvement positifs et négatifs à chaque point temporel.
    3. Sur la base de l’image de phase acquise, supprimez la phase d’arrière-plan en soustrayant les images de phase codées positives et négatives. Décompressez la phase avec un algorithme de tri basé sur la fiabilité21.
    4. Extrayez la composante principale du mouvement en appliquant la transformée de Fourier rapide aux images de phase non encapsulées. Filtrez l’image de phase avec un filtre passe-bande numérique. Estimer le module de cisaillement avec un algorithme d’inversion directe (DI) 2D pour obtenir le module de stockage G' et le module de perte G''13,14.
      REMARQUE : La fréquence de coupure du filtre passe-bande est de [0,04 0,08]. La taille de la fenêtre d’ajustement de l’algorithme DI est de 11 x 11.

3. Essai d’indentation

  1. Utilisez un poinçon circulaire ou une lame chirurgicale pour couper le fantôme de gélatine en un échantillon cylindrique ou cuboïde, respectivement. Assurez-vous que l’épaisseur de l’échantillon est comprise entre 3 et 10 mm et que le diamètre de l’échantillon cylindrique ou le côté long du cuboïde est supérieur à 4 mm. Utilisez une lame tranchante pour couper la surface de l’échantillon afin de le rendre aussi lisse que possible pour l’indentation.
  2. Activez la puissance du testeur d’indentation. Effectuez les opérations suivantes à l’aide du programme de contrôle des pénétrateurs conçu pour automatiser la procédure de contact du pénétrateur (programme personnalisé ; voir Tableau des matériaux).
    1. Cliquez sur le bouton Back off (Retour désactivé) dans l’interface graphique pour initialiser le processus d’étalonnage (Figure 2B). Lisez la valeur du capteur laser et tapez la valeur dans la zone Ligne de base .
      REMARQUE: Pendant le processus d’étalonnage, la distance entre le capteur laser et la plaque de déflecteur est ajustée à une valeur prédéfinie spécifique.
    2. Placez une lame de verre sur la plaque de déflecteur et notez la valeur indiquée par le capteur laser. Ensuite, placez l’échantillon sur la lame de verre et placez-les ensemble sur la plaque de déflecteur. Lisez la valeur du capteur laser et tapez cette valeur dans la zone Exemple + Diapositive .
      REMARQUE: Le capteur laser est utilisé pour enregistrer le déplacement de l’indentation, mais il est également utilisé pour mesurer l’épaisseur de l’échantillon avant le test.
    3. Prenons la différence entre les deux valeurs obtenues à l’étape 3.2.2 comme l’épaisseur de l’échantillon à la région d’intérêt (ROI).
    4. Placez soigneusement l’échantillon avec la lame de verre sous-jacente juste en dessous du pénétrateur, puis cliquez sur le bouton Contact pour lancer un contact automatique entre le pénétrateur et la surface de l’échantillon.
      REMARQUE : Si le contact automatique n’est pas satisfaisant, c’est-à-dire que le pénétrateur appuie profondément dans l’échantillon ou n’a pas de contact, ajustez la position du pénétrateur en tapant une valeur comprise entre 0,05 et 0,1 mm dans la case Décalage et répétez les étapes 1.2.1 à 1.2.4.
    5. En fonction de l’épaisseur de l’échantillon mesurée (étape 3.2.3), estimer le déplacement par indentation (c.-à-d. la profondeur totale de l’indentation) en multipliant l’épaisseur par la déformation d’essai en retrait (ici, elle est réglée sur ≤8 % pour maintenir l’indentation dans l’hypothèse de petite déformation).
    6. Tapez les valeurs de déplacement (étape 3.2.5) dans la zone Déplacement (mm). Réglez le temps de relaxation sur 180 s dans la zone Temps d’arrêt. Cliquez sur le bouton Indentation. Le déplacement et la force réactive pendant la procédure de maintien de rampe seront automatiquement enregistrés et enregistrés dans un fichier au chemin de fichier spécifié.
      Remarque : Le chemin d’accès au fichier peut être prédéfini comme le chemin d’enregistrement des données de test.
  3. Exportez les données d’indentation vers une feuille de calcul. Utiliser une série Equation 1 de Prony à deux termes pour ajuster la courbe de relaxation de force 1,3,11:
    Equation 2
  4. Estimer le module de cisaillement instantané (G 0) et le module de cisaillement à long terme (G) en fonction des paramètres ajustés :
    Equation 3
    NOTE: Dans les équations ci-dessus, C 0, C i et τi sont des paramètres de modèle de la série de Prony, F est la force d’indentation, R est le rayon du pénétrateur, X est le facteur de compensation pour l’hypothèse infinie du demi-espace, V est la vitesse d’indentation, t est la variable temporelle et t R est le temps de rampe.

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Representative Results

Conformément au protocole EMR, une propagation claire des ondes de cisaillement dans les fantômes de gélatine à 40 et 50 Hz a été observée (Figure 3). Les propriétés viscoélastiques mesurées à partir des EMR et des essais d’indentation sont illustrées à la figure 4. Les valeurs estimées de G' et G » à chaque essai pour chaque fantôme sont résumées dans le tableau 2. Conformément au protocole d’indentation, les propriétés viscoélastiques de chaque fantôme à chaque point d’essai sont résumées dans le tableau 3.

Comme le montre la figure 4, pour les mesures utilisant MRE, une comparaison des valeurs G' et G » mesurées à 40 et 50 Hz a montré des différences significatives entre les deux fantômes de gélatine (test t de Student, p < 0,05). De plus, des différences significatives ont été observées pour les valeurs G' et G » entre les mesures de 40 et 50 Hz (test t de Student, p < 0,05). De même, pour les mesures utilisant le test d’indentation, des différences significatives entre les deux fantômes ont été observées pour les valeurs G 0 et G (test t de Student, p < 0,05). L’EMR et l’indentation ont fourni des résultats cohérents pour distinguer les fantômes de gélatine mous et rigides.

Figure 1
Figure 1 : Essai EMR. (A) Placez la plaque vibrante sur le dessus du fantôme de gélatine. (B) Placez le fantôme de gélatine à l’intérieur de la bobine de tête et montez l’actionneur électromagnétique sur le dessus de la bobine de tête. (C) Une vue d’ensemble du système électromagnétique EMR montrant les connexions entre chaque composant. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 2
Figure 2 : Essai d’indentation. (A) Placez le fantôme de gélatine juste sous la tête du pénétrateur dans le testeur. (B) Préparez l’indentation à l’aide du panneau de configuration des contrôles de l’interface graphique. Entrez les paramètres d’indentation dans l’interface graphique pour configurer le test de relaxation de rampe. Observez les courbes d’indentation dans la fenêtre de la visionneuse de données. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 3
Figure 3 : Images de propagation des ondes pour les deux fantômes de gélatine à 40 et 50 Hz. Les quatre phases correspondent aux quatre points temporels à un cycle sinusoïdal. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 4
Figure 4 : Propriétés viscoélastiques mesurées à partir d’expériences d’EMR et d’indentation. (A) Cartes typiques estimées G' et G'' à 40 et 50 Hz pour les deux fantômes de gélatine de MRE. (B) Moyenne et écart type des valeurs G 0 et G pour les deux fantômes à partir de six essais répétés d’indentation. (C) Moyenne et écart type des valeurs G' et G'' à 40 et 50 Hz pour les deux fantômes de six essais EMR répétés. Le symbole de l’astérisque indique une différence significative (test t de Student; p < 0,05). Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Gélatine Eau Glycérol Total
Fantôme 1 100 (4.35%) 1200 (52.17%) 1000 (43.48%) 2300 (100%)
Fantôme 2 160 (6.96%) 1140 (49.56%) 1000 (43.48%) 2300 (100%)

Tableau 1 : La masse et la concentration massique de la gélatine, du glycérol et de l’eau utilisées pour préparer les deux fantômes de gélatine. L’unité de masse est le gramme.

Module (Pa) Essai 1 Essai 2 Essai 3 Essai 4 Essai 5 Essai 6 Méchant MST
Fantôme 1 40 Hz G' 2978 2976 2976 2974 2971 2972 2975 3
G'' 198 197 197 198 199 199 198 1
50 Hz G' 2854 2852 2852 2851 2850 2848 2851 2
G'' 341 342 342 342 341 341 341 1
Fantôme 2 40 Hz G' 5603 5589 5596 5590 5586 5588 5592 7
G'' 419 412 419 413 408 408 413 5
50 Hz G' 5343 5341 5336 5336 5329 5331 5336 6
G'' 317 317 318 324 321 323 320 3

Tableau 2 : Module de stockage (G') et module de perte (G ») des deux fantômes de gélatine mesurés par MRE. Chaque fantôme a été testé six fois à une fréquence d’actionnement de 40 et 50 Hz.

Essai 1 Essai 2 Essai 3 Essai 4 Essai 5 Essai 6 Méchant MST
Fantôme 1 C0 1.54 1.88 1.81 1.71 1.65 1.60 1.70 0.13
C1 0.64 0.16 0.09 0.16 0.16 0.21 0.23 0.20
C2 0.10 0.12 0.15 0.11 0.13 0.11 0.12 0.02
τ1 (s) 459.71 177.52 114.14 7.32 6.1 3.73 128.09 177.51
τ2 (s) 9.83 6.38 5.83 199.28 200.2 55.78 79.55 94.98
R2 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 0.99 1.00 0.00
G0 (Pa) 2273 2145 2040 1991 1935 1920 2051 136
G (Pa) 1535 1875 1808 1714 1650 1601 1697 128
Fantôme 2 C0 5.97 6.29 6.16 6.20 6.14 6.11 6.14 0.11
C1 0.29 0.30 0.43 0.38 0.18 0.48 0.34 0.11
C2 0.64 0.24 0.24 0.17 0.39 0.18 0.31 0.18
τ1 (s) 5.99 3.50 2.46 2.71 69.34 2.36 14.39 26.95
τ2 (s) 96.28 124.98 123.87 88.01 2.34 63.35 83.14 45.88
R2 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 0.00
G0 (Pa) 6899 6827 6825 6751 6710 6771 6797 67
G (Pa) 5967 6286 6160 6197 6144 6113 6145 105

Tableau 3 : Paramètres viscoélastiques estimés à partir des essais d’indentation pour les deux fantômes de gélatine. Chaque fantôme a été testé six fois.

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Discussion

Les fantômes de gélatine sont couramment utilisés comme matériaux imitant les tissus pour tester et valider des algorithmes et des dispositifs 17,19,22,23,24,25,26,27. L’une des études pionnières utilisant le fantôme de gélatine pour comparer les MRE et les tests de cisaillement dynamique a été présentée par Okamoto et coll. (2011)17. Dans leur étude, la concentration massique de gélatine était de ~2,8%, et les valeurs estimées G' et G'' après correction étaient comprises entre 1,06 et 1,15 kPa et 0,11 à 0,27 kPa, respectivement. Zeng et coll. (2020)19 ont également utilisé le fantôme de gélatine pour valider l’algorithme d’inversion des EMR. Avec une concentration massique de gélatine de ~3,5%, la valeur estimée de G' était de ~2,5 kPa. Étant donné que le module de cisaillement augmente avec la concentration de gélatine, ces valeurs étaient toutes cohérentes avec l’estimation de cette étude.

Pour faire des fantômes de gélatine, il est à noter qu’une agitation complète et approfondie est nécessaire lors du mélange d’une grande quantité de poudre de gélatine avec de l’eau. Ceci est nécessaire pour la dissolution complète pour faire des fantômes homogénéisés. Pour augmenter la température de fusion et le module de cisaillement, du glycérol a été ajouté au mélange17. Le bain-marie à environ 60 °C aidera à accélérer le mélange et est recommandé pendant le processus d’agitation. Habituellement, la gélatine sera formée dans un récipient avec une forme spécifique, par exemple, un cube ou un cylindre. Par conséquent, il est important de filtrer les bulles avant de verser la solution mélangée dans le récipient.

Lors de la préparation du test EMR, une transmission stable de l’onde de cisaillement est cruciale. Par conséquent, il est nécessaire de s’assurer que la plaque vibrante est fermement pressée sur le dessus du fantôme. Ceci afin d’éviter tout glissement possible entre la plaque et le fantôme. Cependant, cela apportera potentiellement un certain niveau de précontrainte locale. Ainsi, il est important de ne pas trop appuyer sur la plaque sur le fantôme. Lors de la mise en place de la fréquence d’actionnement, il est noté que l’amortissement de la propagation des ondes augmente avec la fréquence.

Il est suggéré de placer le dispositif d’indentation sur une table d’isolation des vibrations. En effet, même une petite vibration affectera le processus d’enregistrement de la rampe. De plus, un réétalonnage des capteurs est nécessaire si l’appareil n’a pas été utilisé pendant plus de 1 mois.

Pour avoir les meilleures performances de mesure de MRE, il est suggéré de maintenir la fréquence à moins de 100 Hz. En effet, plus la fréquence est élevée, plus la vibration est dissipée, induisant ainsi un SNR plus faible des images acquises. Le test d’indentation mesure principalement l’échantillon dans une gamme de fréquences inférieure à celle des EMR. Pour une discussion des conversions de paramètres entre les deux méthodes, on peut se référer à Chen et al. (2020)11. L’EMR et l’indentation peuvent être utilisés pour mesurer de nombreux tissus biologiques mous afin d’étudier les propriétés biomécaniques et d’explorer les biomarqueurs potentiels basés sur la biomécanique pour le diagnostic de la maladie ou l’évaluation du traitement.

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Disclosures

Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts.

Acknowledgments

Le soutien financier de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (subvention 31870941), de la Fondation des sciences naturelles de Shanghai (subvention 22ZR1429600) et de la Commission des sciences et de la technologie de la municipalité de Shanghai (subvention 19441907700) est reconnu.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
24-channel head & Neck coil United Imaging Healthcare 100120 Equipment
3T MR Scanner United Imaging Healthcare uMR 790 Equipment
Acquisition board Advantech Co PCI-1706U Equipment
Computer-Windows HP 790-07 Equipment
Electromagnetic actuator Shanghai Jiao Tong University Equipment
Function generator RIGOL DG1022Z Equipment
Gelatin CARTE D’OR Reagent
Glycerol Vance Bioenergy Sdn.Bhd Reagent
Indenter control program custom-designed Software; accessed via: https://github.com/aaronfeng369/FengLab_indentation_code.
Laser sensor Panasonic HG-C1050 Equipment
Load cell Transducer Technique GSO-10 Equipment
MATLAB Mathworks Software
Power amplifier Yamaha A-S201 Equipment
Voice coil electric motor SMAC Corporation DB2583 Equipment

DOWNLOAD MATERIALS LIST

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Bioengineering numéro 183
Caractérisation viscoélastique de fantômes de gélatine imitant les tissus mous à l’aide de l’indentation et de l’élastographie par résonance magnétique
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Feng, Y., Qiu, S., Chen, Y., Wang,More

Feng, Y., Qiu, S., Chen, Y., Wang, R., He, Z., Kong, L., Chen, Y., Ma, S. Viscoelastic Characterization of Soft Tissue-Mimicking Gelatin Phantoms using Indentation and Magnetic Resonance Elastography. J. Vis. Exp. (183), e63770, doi:10.3791/63770 (2022).

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