Summary
Målet med dette manuskriptet er å beskrive KitV558Δ/+ musemodell og teknikker for vellykket disseksjon og behandling av museprøver.
Abstract
Gastrointestinal stromal tumor (GIST) er den vanligste menneskelige sarkom og er vanligvis drevet av en enkelt mutasjon i KIT-reseptoren. På tvers av tumortyper er det utviklet mange musemodeller for å undersøke neste generasjon kreftbehandlinger. Men i GIST bruker de fleste in vivo-studier xenograftmusmodeller som har iboende begrensninger. Her beskriver vi en immunotokmpetent, genetisk konstruert musemodell av gastrointestinal stromal svulst som huser en KitV558Δ/+ mutasjon. I denne modellen er mutant KIT, oncogene ansvarlig for de fleste GISTs, drevet av sin endogene promotor som fører til en GIST som etterligner det histologiske utseendet og immuninfiltrering sett i menneskelige GISTs. Videre har denne modellen blitt brukt med hell for å undersøke både målrettede molekylære og immunterapier. Her beskriver vi avl og vedlikehold av en KitV558Δ/+ musekoloni. I tillegg beskriver dette dokumentet behandling og anskaffelse av GIST, drenering av mesenterisk lymfeknute og tilstøtende cecum i KitV558Δ/+ mus, samt prøvepreparering for molekylære og immunologiske analyser.
Introduction
GIST er den vanligste sarkom hos mennesker med en forekomst på ca 6000 tilfeller i USA1. GIST ser ut til å stamme fra de gastrointestinale pacemakercellene som kalles interstitialcellene i Cajal, og er vanligvis drevet av en enkelt mutasjon i tyrosinkinase KIT eller PDGFRA2. Kirurgi er bærebjelken i behandlingen for GIST og kan være kurativ, men pasienter med avansert sykdom kan behandles med tyrosinkinasehemmeren (TKI), imatinib. Siden introduksjonen for over 20 år siden har imatinib forvandlet behandlingsparadigmet i GIST, noe som forbedrer overlevelsen ved avansert sykdom fra 1 til over 5 år 3,4,5. Dessverre er imatinib sjelden kurativ på grunn av oppkjøpte KIT-mutasjoner, så det er behov for nye behandlinger for denne svulsten.
Musemodeller er et viktig forskningsverktøy i undersøkelsen av nye terapier i kreft. Flere subkutane xenograft- og pasientavledede xenograftmodeller er utviklet og undersøkt i GIST 6,7. Imidlertid representerer immunodeficient mus ikke fullt ut menneskelig GIST siden GISTs har differensial immunprofiler avhengig av deres onkogene mutasjon, og endring av gastrointestinal tumormikromiljø forbedrer effekten av TKI-terapi 8,9. KitV558Δ/+-musen har en heterzygot bakteriesletting i Kit exon 11, som koder juxtamembrane-domenet, det mest muterte nettstedet i humant GIST10. KitV558Δ/+ mus utvikler en enkelt cecal GIST med 100% penetrans, og svulster har lignende histologi, molekylær signalering, immuninfiltrasjon og respons på terapi som menneskelig GIST 8,11,12,13. Her beskriver vi avl, behandling og prøveisolasjon og prosessering i KitV558Δ/+ mus til bruk i molekylær og immunologisk forskning i GIST.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle mus ble plassert under patogenfrie forhold ved University of Pennsylvania i henhold til NIH-retningslinjer og med godkjenning fra University of Pennsylvania IACUC. Eutanasi ble utført etter standard driftsprosedyrer fra University of Pennsylvania Laboratory Animal Resources.
1. KitV558Δ /+ musavl
- Backcross KitV558Δ/+ musene mer enn 10 ganger på en C57BL/6J-bakgrunn ved hjelp av C57BL/6J-mus. For å gjøre dette, avle de mannlige KitV558Δ / + musene med kvinnelige C57BL / 6J mus med et 1: 2-forhold.
MERK: Det homozygote settetV558Δ/V558Δ genotype er dødelig i utero. Det er mulig å avle kvinnelige KitV558Δ/+ mus med mannlige C57BL/6J-mus, men kullstørrelsen er omtrent halvparten som det sett fra kvinnelige wildtype C57BL/6J mus. Videre produserer kvinnelige KitV558Δ/+ mus begrensede kull etter 4 måneder. - Genotype valpene ved 7-14 dagers alder ved tåklipping for å bekrefte tilstedeværelsen av KitV558Δ / + genotype. Bruk fremoverprimeren: TCTCCTCCAGAAACCCATGTATGAA; Reporter 1: CCTCGACAACCTTCCA; omvendt primer: TTGCGTCGGGTCTATGTAAACAT; og reporter 2: TCTCCTCGACCTTCCA for genotyping.
2. KitV558Δ /+ musebehandling
- Alder og kjønn matcher KitV558Δ/+-musene før behandling. Bruk alders- og sextilpassede mus i kohorter, da svulster fra kvinnelige KitV558Δ/+ mus er større enn de i mannlige mus. Behandle musene ved 8-12 uker, da svulster er etablert (figur 1).
- Gi tyrosinkinasehemmere oralt eller ved intraperitoneal (dvs.) injeksjon; KitV558Δ/+ svulster er følsomme for tyrosinkinasehemmere. Gi imatinib i en dose på 600 mg/l i drikkevann eller i.p. injeksjoner på 45 mg/kg to ganger daglig. Mål tumorvektreduksjon ved hjelp av digitale vekter etter disseksjon av tumor som vist i trinn 3, som er ca. 50 % ved 1 uke og 80 % etter 4 uker etter behandling med imatinib (figur 2).
3. KitV558Δ/+ museorganhøst
- Avlive mus ved CO 2-narkose med en strømningshastighet på 60% kammervolum per min. La mus i kammeret i minst 2 minutter etter at åndedrettet har opphørt, og utfør deretter cervical dislokasjon for å bekrefte døden.
- Steriliser alle instrumenter, bruk hansker gjennom hele prosedyren, og oppretthold et sterilt felt. Forbered huden med 70% etanol. Lag et 2 cm midtlinje vertikalt snitt ved hjelp av saks og gå inn i bukhulen. Lyse kraftig noen intra-abdominal adhesjoner.
- Følg trinnene beskrevet nedenfor for å fjerne den drenerende mesenteriske lymfeknuten.
- Identifiser cecum og løft sin mesenteri overlegent. Omtrent midtveis i bunnen av det koloniske mesenteriet, identifiser den mesenteriske lymfeknuten og disseker den skarpt. Lymfeknuten er off-white og ca 0,5 cm x 0,5 cm i størrelse.
- Del lymfeknutevev i tredjedeler for proteinisolasjon, histologi og enkeltcellet suspensjon etter behov. For enkeltcelle suspensjoner, plasser lymfeknutevev i 20 ml serumfrie medier (RPMI) og hold på is.
- For isolering av GIST og cecum, følg trinnene beskrevet nedenfor.
- Cecum i KitV558Δ/+ mus er for det meste erstattet av en GIST. Del forsiktig det ileokortiske krysset fra bunnen av svulsten. For å samle cecum, del tykktarmen igjen, 2 cm proksimalt til bunnen av svulsten.
- I 50%-60% av KitV558Δ/+ mus inneholder svulstens hode en hette av cecal vev, som vanligvis inneholder serøs væske, men kan sjelden inneholde pus (figur 3). Disseker hettevevet kraftig vekk fra tumorvevet.
- Del tumorvev og/eller cecum i tredjedeler for proteinisolasjon, histologi og encellet suspensjon etter behov. For enkeltcelle suspensjoner, plasser tumorvev eller cecum i HBSS med 2% FCS, nok til å dekke prøven og holde på is.
4. Vestlig flekkanalyse av GIST-vev
- Forbered vevslysbuffer som inneholder 50 mM TrisHCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% ubestemt vaskemiddel, 2 mM Na3VO4, 1 mM PMSF, 10 mM NaF og 20 μl/ml proteinasehemmerblanding.
- Forbered en 1x Tris-bufret saltløsning med 1% Tween 20 (TBST) ved å kombinere 1800 ml deionisert vann, 2 ml Tween 20 og 200 ml 10x Tris-bufret saltvann (TBS).
- Resuspend vev fra trinn 3.4.3 i et FACS-rør i 5 ml / g vev lysis buffer og homogenisere to ganger med en mekanisk homogenisator ved 15,000 RPM for 15 s på is. Inkuber lysate i 30 min på is.
- Overfør lysat til et 1,5 ml mikrosenterrør. Sentrifuger med maks hastighet i 20 min ved 4 °C. Overfør supernatant til et nytt mikrosenterrør.
- Kjør lysater på en 4% til 15% gradient gel, og overfør deretter til en nitrocellulosemembran, som beskrevet i14.
- Vask membranen en gang i 1x TBS i 5 min og blokker deretter membran i 5% melk i 1 time. Igjen, vask membranen en gang i 1x TBS i 10 min.
- Inkuberingsmembran i primært antistoff fortynnet 1:1000 i 5% BSA ved 4 °C over natten. Vask membranen 3x i 1x TBST i 10 min hver. Inkuber blott med sekundært antistoff fortynnet 1:2500 i 2,5% melk i 1 time ved romtemperatur.
- Vask membranen en gang i 1x TBS i 5 min. Tilsett nok HRP-substrat til å dekke membran, vanligvis 200-500 μL, og bruk en digital imager til å oppdage og kvantifisere chemiluminescens.
5. Immunhiistokjemi av GIST vev
- Fest vev fra trinn 3.3.2 eller 3.4.3 i 4% paraformaldehyd ved 4 °C over natten. Oppbevar vev i 70% EtOH til det er klart til behandling. Bygg inn og seksjonsblokker med 5 μm tykkelse på glasssklier, som beskrevet15,16.
- Fullstendig immunhiistokjemisk deteksjon ved hjelp av et grunnleggende immunodeteksjonssett, som tidligere beskrevet17.
6. Encellet suspensjon av mesenterisk lymfeknute
- Hell RPMI-medier med lymfeknuteprøve fra trinn 3.3.2 over et 100 μm filter. Flytt filteret til ny 50 ml konisk og mos lymfeknute med den myke enden av en 3 ml plastsprøyte. Vask filteret med 20 ml RPMI-medier.
- Sentrifuger filtratet ved 450 x g ved 4 °C i 5 minutter. Aspirer supernatanten.
- Resuspend pellet i 20 ml 1% FBS i PBS (perlebuffer) og hell over et 40 μm filter. Samle cellefiltratet. Telle celler ved hjelp av et hemocytometer.
- Sentrifuger filtratet ved 450 x g ved 4 °C i 5 minutter. Aspirer supernatanten. Resuspend i perlebuffer ved 6 x 107 celler/ml for strømningscytometri.
7. Enkeltcellet suspensjon av GIST
- Forbered kollagenasebuffer ved å tilsette 250 mg kollagenase IV, en tablett EDTA-fri proteasehemmer og 100 μL DNase I til 50 ml HBSS. Roter i 10 min ved romtemperatur til den er oppløst.
- Plasser GIST i en steril tallerken og tilsett 2,5 ml kollagenalissebuffer. Hakk svulst ved hjelp av en steril skalpell og saks til svulsten er i fine fragmenter. Bruk en stor borepipette for å aspirere svulsten og kollagenalen i et 50 ml rør.
- Inkuber i en ristende inkubator ved 100 o/min ved 37 °C i 30 minutter. Slukke reaksjon med 2 ml FBS.
- Hell kollagenasen med GIST-prøve over et 100 μm filter og mossvulst med den myke enden av en 3 ml plastsprøyte og samle i et 50 ml rør. Vask filteret med 20 ml HBSS. Sentrifuger filtratet ved 450 x g, 4 °C i 5 minutter. Aspirer supernatanten.
- Resuspend pellet i 20 ml perlebuffer og hell over et 40 μm filter. Samle filtraten og telle celler ved hjelp av et hemocytometer. Sentrifuger filtratet ved 450 x g, 4 °C i 5 minutter. Aspirer supernatanten. Resuspend i perlebuffer ved 6 x 107 celler/ml for strømningscytometri.
8. Single celle suspensjon av cecum
- Klargjør kollagenbufferen som i trinn 7.1. Bruk saks, del cecum langsgående for å eksponere den indre slimhinnen. Skjær i 0,5 cm seksjoner og legg i et 50 ml rør med 5 ml HBSS med 2% FBS. Rist kraftig i 30 s, sentrifuge ved 450 x g i 20 s, og aspirer deretter supernatanten.
- Tilsett 5 ml HBSS med 2 mM EDTA. Inkuber i en ristende inkubator ved 37 °C ved 100 o/min i 15 minutter. Sentrifuge ved 450 x g i 20 s. Aspirer supernatanten.
- Tilsett 5 ml HBSS. Rist kraftig i 30 s, sentrifuge ved 450 x g i 20 s, og aspirer deretter supernatanten. Gjenta en gang til.
- Tilsett 5 ml kollagenbuffer. Inkuber i en ristende inkubator ved 37 °C i 30 minutter ved 100 o/min. Rist kraftig hver 10. Slukke reaksjon med 2 ml FBS.
- Hell kollagen med cecumprøve over et 100 μm filter og mos med den myke enden av en 3 ml plastsprøyte. Vask filteret med 20 ml HBSS. Samle filtrat.
- Sentrifuger filtratet ved 450 x g i 5 min ved 4 °C. Aspirer supernatanten. Resuspend pellets i 20 ml perlebuffer og hell over et 40 μm filter. Samle filtrat- og telleceller ved hjelp av et hemocytometer.
- Sentrifuger filtratet ved 450 x g i 5 min ved 4 °C. Aspirer supernatanten. Resuspend i perlebuffer ved 6 x 107 celler/ml for strømningscytometri.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
KitV558Δ/+-musemodellen gjør det mulig å undersøke terapeutiske behandlinger i en immunokokkmusmodell. KitV558Δ/+ mus har en gjennomsnittlig levetid på 8 måneder på grunn av progressiv tarmobstruksjon (figur 4). Svulster fra KitV558Δ/+ mus uttrykker kanoniske markører av GIST, inkludert tyrosinkinaseSETTET og transmembrankanalen DOG1 (figur 5), samt transkripsjonsfaktoren ETV1 (ikke vist). Svulster kan studeres for endringer i KIT-signalveien, for eksempel nedstrømsmarkørene ERK og AKT (figur 6), eller immunmikromiljø som etterligner menneskelig GIST 8,11,12,13. MR8 eller CT (figur 7) kan også brukes til å spore tumorvolum som en nøyaktig måling av tumorrespons. En ubehandlet KitV558Δ/+ mus fikk 200 μL gastrograffin oralt 1 time før avbildning. CT-avbildning ble fullført på en vivaCT 80-plattform. 3D-rekonstruksjon ble utført med Fiji-programvare, som også kan måle tumorvolum.
Figur 1: Sammenligning av tumorvekter hos mannlige og kvinnelige KitV558Δ/+ mus. Svulster fra 9 uker gamle ubehandlede KitV558Δ/+ hann- og hunnmus ble isolert og veid (n = 15 mus/gruppe). Data representerer gjennomsnitt ± standardfeil av middelverdi (SEM); p-verdier ble beregnet ved hjelp av en elevs t-prøve ; * = P < 0,05. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Effekt av imatinib på svulster fra KitV558Δ/+ mus. KitV558Δ/+ mus ble behandlet med kjøretøy eller 600 mg/L imatinib i drikkevann i 1 eller 4 uker. Tumorer ble isolert og veid (n = 4-5 mus/gruppe). Data representerer gjennomsnittlig ± SEM; p-verdier ble beregnet ved hjelp av en enveis ANOVA-sammenligning med en Bonferroni-posttest for sammenligning av individuelle grupper; * = P < 0,05. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: SettV558Δ/+ svulst med hette. Representativt bilde av en svulst fra en KitV558Δ/+ mus med en cecal cap som inneholder serøs væske. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Levetiden til kitV558Δ/+ mus. Overlevelse av ubehandlede KitV558Δ/+ mus ble sporet i > 400 dager (n = 43 mus). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 5: Immunhiistokjemisk analyse. Representativ histologi av et settV558Δ /+ svulst der skala bar er 40 μm. Forkortelser: H&E = hematoksylin og eosinfarging; Kit = et kanonisk merke av GIST og reseptor tyrosin kinase; Dog1 = en kanonisk markør for GIST med rolle i aniontransport. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 6: Molekylær signalanalyse. KitV558Δ/+ mus ble behandlet med kjøretøy eller 600 mg/L imatinib i drikkevann i 1 uke. Mus fikk en enkelt i.p. injeksjon av kjøretøy eller 45 mg/kg imatinib 6 timer før analyse. Proteinlysater fra KitV558Δ/+ svulster ble undersøkt av vestlig blott (n = 2 mus/gruppe). Forkortelser: P Kit = fosforylatert Kit reseptor tyrosin kinase; T kit = total Kit reseptor tyrosin kinase; P ERK = fosforylatert mitogenaktivert protein kinase; T ERK = total mitogen aktivert protein kinase; P AKT = fosforylatert serin-threonin protein kinase; T AKT = total serine-threonine protein kinase. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 7: CT-bildeanalyse. 3D CT-rekonstruksjon av et ubehandlet settV558Δ/+ mus som demonstrerer en svulst (pil) i bekkenet. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
KitV558Δ/+ musemodellen er et kraftig forskningsverktøy i molekylær og immunologisk analyse av GIST. Selv om avlsstrategien krever et enkelt kryss, krever bruk av KitV558Δ/+ musekohorter i eksperimenter som analyserer tumorrespons omfattende avl. Mus bør være alder- og sex-matchet for å sikre lignende tumorvekter, og 10% av musene dør før 8 ukers alder når svulster etableres. Mindre omfattende avlsstrategier er mulig hvis du bruker avanserte avbildningsteknikker som CT eller MR for å spore tumorvolum i individuelle mus. Ikke desto mindre har KitV558Δ/+ mus blitt krysset til andre knock-out eller induserbare musemodeller, og avslører viktige immun- og molekylære mekanismer12.
Tumorceller fra KitV558Δ/+ mus isoleres enkelt ved kolonnesortering for KIT (CD117) eller ved strømningscytometri18. Isolerte tumorceller fra KitV558Δ/+ mus kan dyrkes in vitro12. Ved tidlige passasjer beholder isolerte tumorceller fra KitV558Δ/+ mus KIT-uttrykk og kan brukes til in vitro-studier . Men etter flere passasjer mister disse cellelinjene KIT-uttrykk, noe som begrenser deres anvendbarhet. Som de fleste musemodeller metastasererer ikke KitV558Δ/+ svulster, noe som begrenser studiet av ekstraintestinal GIST. På samme måte forekommer svulster fra KitV558Δ/+ mus bare i cecum, og celler isolert fra KitV558Δ / + svulster vokser ikke når de er isolert og injisert i leveren eller milten, noe som begrenser evalueringen av tumormikromiljøet fra forskjellige sykdomssteder. KitV558Δ/+ mutasjonen har heller ingen kjent innvirkning på den hematologiske utviklingen av celler i denne musemodellen.
Immunmikromiljøet i svulster fra KitV558Δ/+ mus inneholder for det meste makrofager etterfulgt av T-celler, som etterligner menneskelig GIST11 tett. Det er imidlertid viktig at cecal cap fjernes helt fra svulsten før vurdering av tumorvekt eller immuninfilt, da distinkte immunpopulasjoner eksisterer i svulsten kontra cecum. Etter vår erfaring er tumorvekter sammenlignbare selv blant de med caps, og det er ingen signifikant sammenheng mellom tyrosinkinasehemmerbehandling og utviklingen av en cecal cap. Videre har vi ikke funnet noen signifikant forskjell i tumormikromiljøet som sammenligner svulster med og uten cecal caps.
Mange genmodifiserte musemodeller er utviklet for bruk i kreftforskning, spesielt siden CRISPR-genredigeringen kom. Mens mange immunotokmpente modeller er avhengige av cre-loxP mediert aktivering av onkogenes eller inaktivering av tumordempergener, er KitV558Δ / + svulster drevet av deres endogene promotor. Følgelig er funnene i KitV558Δ /+ musemodellen svært oversettbare for menneskelig sykdom, spesielt i evalueringen av KIT-signalering19. Fremover bør KitV558Δ/+ musen fortsette å fungere som en verdifull modell som nye behandlingsstrategier, inkludert sjekkpunktblokade og CAR T-terapi, som fortsatt utforskes for behandling av bløtvevssvulster, inkludert GIST.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter å avsløre.
Acknowledgments
KitV558Δ/+ mus ble genetisk konstruert og delt av Dr. Peter Besmer10. Dette arbeidet ble støttet av NIH tilskudd R01 CA102613 og T32 CA251063.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 100 micron filter | EMSCO | 1194-2360 | |
| 1x RBC lysis buffer | Life Technologies | 00-4333-57 | |
| 3mL syringe | Thermo Fisher Scientific/BD Biosciences | 14823435 | |
| 4–15% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels, 10-well, 30 µl | Bio-Rad | 4561083 | |
| 4% Paraformaldehyde Solution | Thermo Fisher Scientific | AAJ19943K2 | |
| 40 micron filter | EMSCO | 1194-2340 | |
| 5M NaCl | Sigma Aldrich | S6546 | |
| 70 micron filter | EMSCO | 1194-2350 | |
| AKT antibody (C67E7) | Cell Signaling | 4691 | |
| C57BL/6J mice | The Jackson Laboratory | ||
| Collagenase IV | Sigma Aldrich | C5138 | |
| Complete mini edta free protease inhibitor | Thomas Scientific | C852A34 | |
| Countess II Automated Cell Counter | Thermo Fisher Scientific | ||
| Disposable Scalpels | Thermo Fisher Scientific/Exel International | 14-840-00 | |
| Dnase I | Thomas Scientific | C756V81 | |
| Dog1 antibody | abcam | ab64085 | |
| EDTA | Sigma Aldrich | E9884 | |
| ERK antibody (p44/42) | Cell Signaling | 9102 | |
| FBS | Thomas Scientific | C788U23 | |
| FIJI software | FIJI | https://imagej.net/software/fiji | |
| Fisherbrand 850 Homogenizer | Thermo Fisher Scientific | 15-340-169 | |
| HBSS | University of Pennsylvania Cell Center | ||
| Imatinib mesylate | Selleck Chemicals | S1026 | |
| KIT antibody (D13A2) | Cell Signaling | 3074 | |
| KitV558Δ/+ Genotyping | Transnetyx | ||
| Microcentrifuge tubes (1.5mL) | Thermo Fisher Scientific | 05-408-129 | |
| Mouse on Mouse Immunodetection Kit, Basic | Vector Laboratories | BMK-2202 | |
| Nitrocellulose Membrane, Precut, 0.45 µm | Rio-Rad | 1620145 | |
| Nonfat Dry Milk | Thermo Fisher Scientific | NC9121673 | |
| Nonidet P 40 Substitute | Sigma Aldrich | 74385 | |
| p-AKT antibody (S473) | Cell Signaling | 4060 | |
| p-ERK antibody (p44/42) | Cell Signaling | 9101 | |
| p-KIT antibody (Y719) | Cell Signaling | 3391 | |
| PMSF Protease Inhibitor | Thermo Fisher Scientific | 36978 | |
| Proeinase K | Thermo Fisher Scientific | BP170050 | |
| Round-Bottom Polystyrene Test (FACS) Tubes | Falcon/Thermo Fisher Scientific | 14-959-2A | |
| RPMI | University of Pennsylvania Cell Center | ||
| Sodium fluoride (NaF) | Sigma Aldrich | 201154 | |
| Sodium orthovanadate (Na3VO4) | Sigma Aldrich | S6508 | |
| SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate | Thermo Fisher Scientific | 34076 | |
| TBS buffer (10x) | University of Pennsylvania Cell Center | ||
| Tissue culture dish (100mm2) | Thermo Fisher Scientific/Falcon | 08-772E | |
| TrisHCL | Thermo Fisher Scientific | BP1757500 | |
| Tween 20 | Rio-Rad | 1706531 | |
| vivaCT 80 platform | Scanco medical |
References
- Mastrangelo, G., et al. Incidence of soft tissue sarcoma and beyond: a population-based prospective study in 3 European regions. Cancer. 118 (21), 5339-5348 (2012).
- Joensuu, H., DeMatteo, R. P. The management of gastrointestinal stromal tumors: a model for targeted and multidisciplinary therapy of malignancy. Annual Review of Medicine. 63, 247-258 (2012).
- Blanke, C. D., et al. Long-term results from a randomized phase II trial of standard- versus higher-dose imatinib mesylate for patients with unresectable or metastatic gastrointestinal stromal tumors expressing KIT. Journal of Clinical Oncology. 26 (4), 620-625 (2008).
- Demetri, G. D., et al. Efficacy and safety of regorafenib for advanced gastrointestinal stromal tumours after failure of imatinib and sunitinib (GRID): an international, multicentre, randomised, placebo-controlled, phase 3 trial. Lancet. 381 (9863), 295-302 (2013).
- Gold, J. S. Outcome of metastatic GIST in the era before tyrosine kinase inhibitors. Annals of Surgical Oncology. 14 (1), 134-142 (2007).
- Huynh, H., et al. Sorafenib induces growth suppression in mouse models of gastrointestinal stromal tumor. Molecular Cancer Therapeutics. 8 (1), 152-159 (2009).
- Na, Y. S., et al. Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success. Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).
- Balachandran, V. P., et al. Imatinib potentiates antitumor T cell responses in gastrointestinal stromal tumor through the inhibition of Ido. Nature Medicine. 17 (9), 1094-1100 (2011).
- Vitiello, G. A., et al. Differential immune profiles distinguish the mutational subtypes of gastrointestinal stromal tumor. Journal of Clinical Investigation. 129 (5), 1863-1877 (2019).
- Sommer, G., et al. Gastrointestinal stromal tumors in a mouse model by targeted mutation of the Kit receptor tyrosine kinase. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (11), 6706-6711 (2003).
- Cavnar, M. J., et al. KIT oncogene inhibition drives intratumoral macrophage M2 polarization. Journal of Experimental Medicine. 210 (13), 2873-2886 (2013).
- Medina, B. D., et al. Oncogenic kinase inhibition limits Batf3-dependent dendritic cell development and antitumor immunity. Journal of Experimental Medicine. 216 (6), 1359-1376 (2019).
- Zhang, J. Q., et al. Macrophages and CD8(+) T cells mediate the antitumor efficacy of combined CD40 ligation and imatinib therapy in gastrointestinal stromal tumors. Cancer Immunology Research. 6 (4), 434-447 (2018).
- General Protocol for Western Blotting. , Available from: https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Buttetin_6376.pdf (2022).
- Sadeghipour, A., Babaheidarian, P. Making formalin-fixed, paraffin embedded blocks. Biobanking: Methods and Protocols. , Springer. New York. 253-268 (2019).
- Sy, J., Ang, L. -C. Microtomy: Cutting formalin-fixed, paraffin-embedded sections. Biobanking: Methods and Protocols. , Springer. New York. 269-278 (2019).
- Seifert, A. M., et al. PD-1/PD-L1 blockade enhances T-cell activity and antitumor efficacy of imatinib in gastrointestinal stromal tumors. Clinical Cancer Research. 23 (2), 454-465 (2017).
- Liu, M., et al. Oncogenic KIT modulates Type I IFN-mediated antitumor immunity in GIST. Cancer Immunology Research. 9 (5), 542-553 (2021).
- Rossi, F., et al. Oncogenic Kit signaling and therapeutic intervention in a mouse model of gastrointestinal stromal tumor. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (34), 12843-12848 (2006).
