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तिब्बती चिकित्सा में मल्टी-इंडेक्स घटकों का एक इन विट्रो विघटन निर्धारण रोडियोला ग्रैन्यूल

Published: November 4, 2022 doi: 10.3791/64670
Automatic Translation
1, 2, 3, 3, 3, 1, 1
1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. Ltd

Summary

यहां, हम विट्रो में रोडियोला ग्रैन्यूल्स (आरजी) के विघटन का परीक्षण करते हैं, अल्ट्राप्योर पानी में सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट के विघटन वक्र खींचते हैं, और वक्रों को विभिन्न गणितीय मॉडल में फिट करते हैं। यह प्रोटोकॉल विवो बायोइक्विवलेंस और आरजी के विवो-इन विट्रो सहसंबंध अध्ययनों के लिए जानकारी और मार्गदर्शन प्रदान करता है।

Abstract

तिब्बती दवा रोडियोला ग्रैन्यूल्स (आरजी) की संरचना जटिल है, और आरजी की समग्र गुणवत्ता निर्धारित करना मुश्किल है। इसलिए, आरजी के बहु-घटक इन विट्रो विघटन को निर्धारित करने के लिए एक विधि स्थापित करना गुणवत्ता नियंत्रण के लिए बहुत महत्वपूर्ण है। यह अध्ययन चीनी फार्माकोपिया (2020 संस्करण) से चौथे सामान्य नियम 0931 की दूसरी पैडल विधि का उपयोग करता है, जो संयुक्त राज्य अमेरिका फार्माकोपिया (यूएसपी) के उपकरण 2 के अनुरूप है। विघटन तंत्र को विघटन माध्यम के रूप में अल्ट्राप्योर पानी के साथ 100 आरपीएम की घूर्णन गति पर सेट किया गया था। प्रत्येक समय बिंदु पर 1 एमएल की नमूना मात्रा एकत्र की गई थी। इसके अलावा, विभिन्न समय बिंदुओं पर आरजी में गैलिक एसिड, सैलिड्रोसाइड और एथिल गैलिक एसिड का संचयी विघटन उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) द्वारा निर्धारित किया गया था। अंत में, विघटन वक्रों को खींचा गया था, और वक्रों को गोम्पर्ट्ज़मॉड, गोम्पर्ट्ज़, लॉजिस्टिक और वीबुल समीकरणों में फिट किया गया था। परिणामों से पता चला कि आरजी में गैलिक एसिड का संचयी विघटन 1 मिनट में 80% से अधिक था, सैलिड्रोसाइड और एथिल गैलिक एसिड का संचयी विघटन 5 मिनट में 65% से अधिक था, और प्रत्येक सूचकांक घटक का संचयी विघटन 30 मिनट के बाद कम हो गया। वक्र फिटिंग ने प्रदर्शित किया कि गोम्पर्ट्ज़मॉड समीकरण आरजी के प्रत्येक सूचकांक घटक के लिए सबसे अच्छा फिटिंग मॉडल था। अंत में, इस प्रोटोकॉल में वर्णित विघटन परीक्षण विधि सरल, सटीक और विश्वसनीय है। यह इन विट्रो में आरजी में सूचकांक घटकों के विघटन व्यवहार को चिह्नित कर सकता है, जो आरजी के गुणवत्ता नियंत्रण और अन्य जातीय यौगिकों के गुणवत्ता मूल्यांकन के लिए एक पद्धतिगत संदर्भ प्रदान करता है।

Introduction

चीन में, कार्डियोवैस्कुलर बीमारियों की व्यापकता में वृद्धि जारी है, और कार्डियोवैस्कुलर बीमारियों की रुग्णता और मृत्यु दर चीनी निवासियों के बीच पहले स्थान परहै। कोरोनरी हृदय रोग का एनजाइना पेक्टोरिस कोरोनरी एथेरोस्क्लेरोसिस के कारण ल्यूमिनल स्टेनोसिस के कारण होता है, जो अपेक्षाकृत अपर्याप्त कोरोनरी रक्त की आपूर्ति और मायोकार्डियल इस्किमिया और हाइपोक्सिया2 की ओर जाता है। हाल के वर्षों में, कोरोनरी हृदय रोग के उपचार में पारंपरिक चीनी चिकित्सा के उपचारात्मक प्रभाव कोकई डॉक्टरों द्वारा मान्यता दी गई है।

पारंपरिक चीनी चिकित्सा नैदानिक लक्षणों को कम करने और रोगियों के जीवन की गुणवत्ता में सुधार करने में महत्वपूर्ण भूमिकानिभाती है। रोडियोला ग्रैन्यूल (आरजी) तिब्बती पठार औषधीय पौधे रोडियोला रोसेआ एल से निकाले और परिष्कृत किए जाते हैं। आरजी के मुख्य घटक सैलिड्रोसाइड, रोडियोसिन और फ्लेवोनोइड्स 5,6 हैं। आरजी में क्यूई7 को पूरक करने और दर्द से राहत देने के लिए रक्त परिसंचरण को सक्रिय और बढ़ावा देने का प्रभाव है। नैदानिक रूप से, इसका उपयोग क्यूई की कमी और रक्त ठहराव, कोरोनरी हृदय रोग, एनजाइना पेक्टोरिस 8 के कारण छाती की रुकावटों के इलाज के लिए किया जाताहै। अकेले सामग्री निर्धारण दवाओं की आंतरिक गुणवत्ता को पूरी तरह से प्रतिबिंबित नहीं करता है, क्योंकि विट्रो में विघटन और विघटन दोनों दवाओं की जैव उपलब्धता और प्रभावकारिता को प्रभावित कर सकते हैं। चीनी चिकित्सा के विघटन के लिए निरीक्षण विधियों में घूर्णन टोकरी विधि, पैडल विधि और छोटी कप विधि शामिल हैं। घूर्णन टोकरी विधि का नुकसान यह है कि घूर्णन टोकरी का केवल बाहरी हिस्सा रोटेशन के दौरान विघटन माध्यम के संपर्क में आता है, जो वास्तविक दुनिया के विघटन व्यवहार को प्रतिबिंबित नहीं करता है। पैडल विधि उपरोक्त कमी को दूर कर सकती है, जो इसे कुछ ठोस चीनी दवा तैयारी के लिए टोकरी विधि की तुलना में अधिक उपयुक्त बनातीहै। वर्तमान में, आरजी के इन विट्रो विघटन विश्लेषण पर कोई रिपोर्ट नहीं है। आरजी की गुणवत्ता को अधिक व्यापक रूप से नियंत्रित करने के लिए, आरजी में तीन सूचकांक घटकों (गैलिक एसिड, सैलिड्रोसाइड और एथिल गैलेट) के विघटन व्यवहार की जांच की गई थी। यह अध्ययन आरजी के गुणवत्ता नियंत्रण के लिए डेटा प्रदान करता है और अन्य जातीय यौगिक तैयारी के गुणवत्ता मूल्यांकन के लिए एक पद्धतिगत संदर्भ प्रदान करता है।

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Protocol

1. समाधान तैयार करना

  1. संदर्भ पदार्थ स्टॉक समाधान तैयार करें: इलेक्ट्रॉनिक विश्लेषणात्मक संतुलन पर अलग से 10.6 मिलीग्राम सैलिड्रोसाइड, 5.24 मिलीग्राम गैलिक एसिड और 5.21 मिलीग्राम एथिल गैलिक एसिड का वजन करें और उन्हें व्यक्तिगत रूप से 5 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में जोड़ें। फिर, 5 एमएल में घुलने और पतला करने के लिए एचपीएलसी-ग्रेड मेथनॉल जोड़ें। अंत में, क्रमशः 2.120 मिलीग्राम / एमएल, 1.048 मिलीग्राम / एमएल, और 1.042 मिलीग्राम / एमएल की द्रव्यमान सांद्रता के साथ संदर्भ पदार्थ स्टॉक समाधान प्राप्त करने के लिए अच्छी तरह से हिलाएं।
    नोट: संदर्भ पदार्थ स्टॉक समाधान में बाद के मानक वक्र में प्रत्येक समाधान के स्टॉक समाधान के रूप में 2.120 मिलीग्राम / एमएल सैलिड्रोसाइड, 1.048 मिलीग्राम / एमएल गैलिक एसिड और 1.042 मिलीग्राम / एमएल एथिल गैलेट शामिल हैं।
  2. परीक्षण नमूना समाधान तैयार करें। 30 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक क्लींजिंग मशीन (पावर: 200 डब्ल्यू, आवृत्ति: 40 kHz) का उपयोग करके 10 एमएल एचपीएलसी-ग्रेड मेथनॉल के साथ 2.8 ग्राम आरजी (सामग्री की तालिका) निकालें, और फिर सिस्टम अनुकूलन शीलता परीक्षण के लिए इसे 0.22 μm फ़िल्टर के साथ फ़िल्टर करें।
  3. एक मिश्रित संदर्भ समाधान तैयार करें जिसमें 0.590 मिलीग्राम / एमएल सैलिड्रोसाइड, 2.030 मिलीग्राम / एमएल गैलिक एसिड और 1.930 मिलीग्राम / एमएल एथिल गैलेट शामिल हैं।
    नोट: प्रत्येक मानक (2.950 मिलीग्राम सैलिड्रोसाइड, 10.150 मिलीग्राम गैलिक एसिड, और 9.650 मिलीग्राम एथिल गैलिक एसिड) को विघटन माध्यम के रूप में एचपीएलसी-ग्रेड मेथनॉल में 5 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में भंग कर दिया जाता है।
  4. अल्ट्राप्योर पानी निष्कर्षण के लिए आरजी के प्रत्येक विशिष्ट घटक की सैद्धांतिक सामग्री प्राप्त करें।
    1. 500 एमएल शंक्वाकार फ्लास्क में 2.8 ग्राम आरजी रखें, 200 एमएल अल्ट्राप्योर पानी जोड़ें, और 60 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक रूप से अर्क (पावर: 200 डब्ल्यू, आवृत्ति: 40 किलोहर्ट्ज) जोड़ें। फिर, इसे 0.22 μm फ़िल्टर के साथ फ़िल्टर करें।
    2. निम्नलिखित प्रयोग में प्राप्त रैखिक समीकरण के अनुसार परीक्षण समाधान की सामग्री निर्धारित करें।

2. क्रोमैटोग्राफिक स्थिति

  1. उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी के लिए तालिका 1 में दिखाए गए क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों को सेट करें। उपयोग किए गए उपकरण के बारे में विवरण के लिए, सामग्री की तालिका देखें।

3. सिस्टम अनुकूलनशीलता परीक्षण

  1. रैखिक संबंध की जांच करें।
    1. गैलिक एसिड और एथिल गैलेट के संदर्भ स्टॉक समाधान को 5, 10, 25, 50 और 125 बार पतला करें, और मानक वक्र खींचने के लिए ढाल एकाग्रता समाधान प्राप्त करने के लिए सैलिड्रोसाइड के संदर्भ स्टॉक समाधान को 2, 4, 8, 16 और 32 बार पतला करें।
      नोट: नमूना उपचार के प्रारंभिक प्रयोग के अनुसार मानक वक्र के कमजोर पड़ने के अनुपात को समायोजित करें। प्रारंभिक प्रयोग में, तीन मानकों के स्टॉक समाधानों को पहले 5, 10, 25, 50 और 125 बार पतला किया गया था, और फिर पहले मानक वक्र को प्लॉट किया गया था। हालांकि, जब परीक्षण नमूने की एकाग्रता का पता लगाया गया था, तो यह पाया गया कि सैलिड्रोसाइड की सांद्रता इस मानक वक्र की रैखिक सीमा के भीतर नहीं आती थी और इसलिए, उन्हें वक्र में शामिल करने के लिए सांद्रता को समायोजित किया गया था। सारांश में, उपरोक्त प्रारंभिक प्रयोगों का उपयोग बाद के प्रयोगात्मक अध्ययनों के लिए तीन परीक्षण नमूनों की अंतिम कमजोर पड़ने की सांद्रता निर्धारित करने के लिए किया गया था।
  2. परिशुद्धता परीक्षण: एचपीएलसी प्रणाली में मिश्रित संदर्भ समाधान के 10 μL को प्रतिदिन छह बार इंजेक्ट करें और चरण 2.1 में वर्णित समान एचपीएलसी स्थितियों के साथ नमूने चलाएं। प्रत्येक सुविधा घटक का चरम क्षेत्र रिकॉर्ड करें.
  3. स्थिरता परीक्षण प्रयोग: तैयार नमूना समाधान के 10 μL इंजेक्ट करें और क्रमशः 0 घंटे, 6 घंटे, 10 घंटे, 12 घंटे, 14 घंटे, 16 घंटे, 18 घंटे, 20 घंटे और 24 घंटे के बाद क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों के अनुसार एचपीएलसी के चरम क्षेत्रों को निर्धारित करें।
    नोट: पीक क्षेत्र एचपीएलसी सिस्टम द्वारा स्वचालित रूप से दर्ज किए जाते हैं।
  4. प्रजनन क्षमता परीक्षण: चरण 1.2 में विधि के अनुसार परीक्षण नमूना समाधान तैयार करने के लिए आरजी के एक ही बैच के छह नमूने लें। एचपीएलसी प्रणाली में प्रत्येक नमूने के 10 μL इंजेक्ट करें। चरण 2.1 में वर्णित नमूने चलाएँ और पुनरुत्पादकता निर्धारित करें।
    नोट: छह नमूनों के बीच एकाग्रता अंतर की तुलना करके पुनरावृत्ति का मूल्यांकन किया गया था।
  5. पुनर्प्राप्ति प्रयोग
    1. परीक्षण समाधान के लिए आरजी के एक ही बैच के छह भाग तैयार करें। फिर, रिकवरी दर की गणना करने के लिए परीक्षण समाधान में प्रत्येक सूचकांक घटक के संदर्भ पदार्थ का लगभग 50% जोड़ें। चरण 2.1 में वर्णित समान शर्तों के साथ एचपीएलसी सिस्टम में इन नमूनों को चलाएं।
    2. रिकवरी दर की गणना करें।
      नोट: रिकवरी दर = (सी - ए) / बी एक्स 100, जहां ए परीक्षण समाधान में मापा जाने वाला घटक की मात्रा है, बी संदर्भ पदार्थ की मात्रा है, और सी संदर्भ पदार्थ और आरजी नमूना वाले समाधान का मापा मूल्य है। उपरोक्त चरणों (यानी, चरण 3.1-3.5) को निष्पादित करने के लिए क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों के लिए चरण 2.1 देखें।

4. इन विट्रो विघटन परीक्षण

  1. चीनी फार्माकोपिया (2020 संस्करण) 12 से सामान्य नियम 0931 की दूसरी विधि की पैडल विधि का उपयोग करके विघटन परीक्षण करें।
    नोट: नमूना करण तकनीक और उपकरण: दवा विघटन उपकरण (सामग्री की तालिका) में एक विघटन कप, एक पैडल, एक तापमान नियंत्रण प्रणाली और एक गति समायोजन प्रणाली है। विघटन प्रयोग शुरू करने से पहले, पानी को एक निर्धारित तापमान पर गर्म किया जाता है, और फिर संबंधित गति निर्धारित की जाती है। आरजी जोड़ने के तुरंत बाद समय रिकॉर्ड करना शुरू करें।
  2. दवा विघटन उपकरण के विघटन कप में 100 एमएल अल्ट्राप्योर पानी जोड़ें और तापमान को 37 डिग्री सेल्सियस ± 0.5 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखें। रोटेशन की गति 100 आरपीएम पर सेट करें।
    नोट: विघटन तंत्र में एक हीटिंग डिवाइस होता है जो सिस्टम के भीतर तापमान सेट करने की अनुमति देता है। पानी में सैलिड्रोसाइड की विघटन दर, कृत्रिम गैस्ट्रिक रस (पतला हाइड्रोक्लोरिक एसिड का 16.4 एमएल [234 एमएल केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड पानी के साथ 1000 एमएल तक पतला] लगभग 800 एमएल पानी और 10 ग्राम पेप्सिन के साथ, अच्छी तरह से हिलाया गया, और 1,000 एमएल तक पानी से पतला), और कृत्रिम आंतों का रस (फॉस्फेट बफर [पीएच 6.8] जिसमें ट्रिप्सिन होता है) में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। सबसे आसानी से उपलब्ध पानी (अल्ट्राप्योर) को विघटन माध्यम के रूप में चुना गया था।
  3. विघटन कप में 2.8 ग्राम आरजी जोड़ें और विघटन की अवधि को तुरंत रिकॉर्ड करना शुरू करें। 1 मिनट, 5 मिनट, 10 मिनट, 20 मिनट, 30 मिनट और 60 मिनट पर इंजेक्टर के साथ नमूने के कुल 1 एमएल एकत्र करें, और विघटन कप में मात्रा को तुरंत उसी तापमान पर विघटन माध्यम के साथ बनाएं।
    नोट: विघटन कप में नमूना ट्यूब छोटे नमूना वॉल्यूम एकत्र नहीं कर सकता है, इसलिए इंजेक्टर का उपयोग नमूना एकत्र करने के लिए किया जाता है। निर्दिष्ट संग्रह समय बिंदुओं को गुम होने से बचने के लिए नमूने जल्दी से एकत्र किए जाने चाहिए।
  4. एकत्र किए गए नमूनों को तुरंत 0.22 μm माइक्रोपोरस झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर करें और बाद में छान लें। एचपीएलसी द्वारा प्रत्येक समय बिंदु पर प्रत्येक घटक की सामग्री निर्धारित करें (चरण 2.1 के अनुसार) और संचयी विघटन की गणना करें।
    1. संचयी विघटन की गणना करने के लिए, प्रत्येक समय बिंदु (X n) के विघटन की गणनाकरें:
      Xn = A / B x 100, जहां A प्रत्येक समय बिंदु पर मापा गया घटकों की मात्रा है और B प्रत्येक घटक की सैद्धांतिक सामग्री है।
    2. फिर, संचयी विघटन (वाई) की गणना करें:
      Y = Xn + (X1 + ... + Xn-1) x V2 / V1, जहां V1 विघटन माध्यम का कुल आयतन है और V2 प्रत्येक नमूने के बाद जोड़े गए विलेय का आयतन है।
      नोट: क्रोमैटोग्राम में सैलिड्रोसाइड और गैलिक एसिड के कम प्रतिक्रिया मूल्यों के कारण, 1 मिनट के समय बिंदु पर सैलिड्रोसाइड और एथिल गैलेट के संचयी विघटन को विघटन वक्र में प्लॉट नहीं किया गया था।

5. विघटन मॉडल फिट करना

  1. डेटा विश्लेषण सॉफ़्टवेयर में प्रत्येक समय बिंदु पर संचयी विघटन डेटा आयात करें।
  2. गोम्पर्ट्ज़मॉड समीकरण, गोम्पर्ट्ज़ समीकरण, लॉजिस्टिक समीकरण और वीबुल समीकरण14 को फिट करने के लिए डेटा विश्लेषण सॉफ़्टवेयर में दवा विघटन विश्लेषण प्लग-इन का उपयोग करें। आर2 का मान जितना बड़ा होगा, वक्र-फिटिंग प्रभाव उतना ही बेहतर होगा।
    1. सॉफ़्टवेयर प्रारंभ करें, मूल डेटा संपादन विंडो दर्ज करने के लिए Book1 विंडो का चयन करें।
    2. पहले कॉलम ए (एक्स) में- लॉन्ग नेम इनपुट टाइम, समय को समय के रूप में परिभाषित करें, और प्रत्येक विघटन निर्धारण समय इनपुट करें। दूसरे कॉलम बी (वाई) -लॉन्ग नाम में इनपुट डेटा, डेटा को संचयी विघटन के रूप में परिभाषित करें, प्रत्येक विघटन निर्धारण समय के संचयी विघटन प्रतिशत को इनपुट करें।
    3. डेटा इनपुट के बाद, कॉलम ए (एक्स) और बी (वाई) का चयन करें, और सॉफ्टवेयर मेनू बार में ड्रग विघटन विश्लेषण प्लग-इन का चयन करें और फिट विघटन डेटा > कॉन्केनेट फिट > ओके पर क्लिक करें। सॉफ्टवेयर प्रत्येक मॉडल के उपयुक्त परिणाम उत्पन्न करता है।

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Representative Results

इस अध्ययन में, आरजी की सटीकता, स्थिरता, पुनरावृत्ति और नमूना वसूली सभी चीनी फार्माकोपिया (वॉल्यूम 4, 2020)12 में निर्दिष्ट पद्धतिगत सीमा के भीतर थे, यह दर्शाता है कि विधि संभव थी। बार-बार डिबगिंग के बाद, यह निर्धारित किया गया था कि इस अध्ययन में उपयोग किए गए क्षालन ढाल में आरजी में तीन सूचकांक घटकों के लिए अच्छा रिज़ॉल्यूशन (चित्रा 1) था। आरजी में तीन सूचकांक घटकों का एक विशिष्ट एकाग्रता सीमा (तालिका 2) के भीतर एक अच्छा रैखिक संबंध था। सटीक परीक्षण परिणाम (तालिका 3) से पता चला है कि सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट के चरम क्षेत्रों का सापेक्ष मानक विचलन (आरएसडी) क्रमशः 1.95%, 2.83% और 1.42% था, यह दर्शाता है कि उपकरण की परिशुद्धता अच्छी थी। स्थिरता परीक्षण के परिणाम (तालिका 4) से पता चला है कि सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट के चरम क्षेत्रों का आरएसडी क्रमशः 2.37%, 2.47%, और 2.82% था, यह सुझाव देते हुए कि नमूना समाधान 24 घंटे के भीतर स्थिर था। पुनरावृत्ति परीक्षण के परिणाम (तालिका 5) से पता चला है कि सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट के चरम क्षेत्रों के आरएसडी क्रमशः 2.79%, 2.67% और 1.55% थे, यह दर्शाते हुए कि इस विधि की पुनरावृत्ति अच्छी थी। रिकवरी प्रयोग के परिणामों ने संकेत दिया कि सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट की औसत वसूली क्रमशः 99.91%, 100.40% और 102.80% थी (तालिका 6)।

इस अध्ययन में इन विट्रो विघटन प्रयोग एचपीएलसी द्वारा प्रत्येक समय बिंदु पर आरजी नमूनों में तीन विशिष्ट घटकों (सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट) की सामग्री निर्धारित करना था, और फिर संचयी विघटन की गणना करना था। प्रत्येक घटक के विघटन वक्र चित्र 2 में दिखाए गए हैं। नमूने को विघटन कप में डालने के बाद, आरजी में गैलिक एसिड का संचयी विघटन 1 मिनट के बाद 80% से अधिक था। सैलिड्रोसाइड और एथिल गैलिक एसिड का संचयी विघटन 5 मिनट के बाद 65% से अधिक था, जो डेटा में परिलक्षित हुआ था कि प्रत्येक सूचकांक घटक 5 मिनट के बाद 60% से अधिक भंग हो सकता है। हालांकि, प्रत्येक सूचकांक घटक का संचयी विघटन 30 मिनट के बाद कम हो गया। इसके अलावा, विघटन वक्रों को गोम्पर्ट्ज़मॉड समीकरण, गोम्पर्ट्ज़ समीकरण, लॉजिस्टिक समीकरण और वीबुल समीकरण में फिट किया गया था। परिणामों से पता चला कि गोम्पर्ट्ज़मॉड समीकरण आरजी में तीन सूचकांक घटकों (सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट) के लिए सबसे अच्छा फिटिंग मॉडल था। आरजी में तीन सूचकांक घटकों के विघटन मॉडल फिटिंग परिणाम तालिका 7 में दिखाए गए हैं।

Figure 1
चित्रा 1: चरण 2.1 (एन = 1) में उल्लिखित क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों को सेट करने के बाद तीन विशिष्ट घटकों के प्रतिनिधि क्रोमैटोग्राम। पीक 1 गैलिक एसिड है, पीक 2 सैलिड्रोसाइड है, और पीक 3 एथिल गैलेट है। (बी) संदर्भ समाधान का क्रोमैटोग्राम। पीक 1 गैलिक एसिड है, पीक 2 सैलिड्रोसाइड है, और पीक 3 एथिल गैलेट है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्र 2: विशिष्ट घटकों का विघटन वक्र (n = 4) (A) प्रशासन के बाद 1 मिनट, 5 मिनट, 10 मिनट, 20 मिनट, 30 मिनट और 60 मिनट पर गैलिक एसिड का संचयी विघटन। (बी) प्रशासन के बाद 5 मिनट, 10 मिनट, 20 मिनट, 30 मिनट और 60 मिनट पर सालिड्रोसाइड का संचयी विघटन। (सी) प्रशासन के बाद 5 मिनट, 10 मिनट, 20 मिनट, 30 मिनट और 60 मिनट पर एथिल गैलेट का संचयी विघटन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

दशा प्राचल
क्रोमैटोग्राफिक कॉलम C18 (4.6 mm x 250 mm, 5 μm)
मोबाइल चरण एसिटोनिट्राइल (ए) -0.2% एसिटिक एसिड (बी)
प्रवणता क्षालन 0-5 मिनट, 0% -4% ए; 5-15 मिनट, 4% -5% ए; 15-20 मिनट, 5% -7% ए; 20-30 मिनट, 7% -14% ए; 30-40 मिनट, 14% -13% ए; 40-45 मिनट, 13% -4% A
प्रवाह दर 1.0 mL/
स्तंभ तापमान 30 °C
तरंगदैर्ध्य का पता लगाना 275 एनएम
नमूना मात्रा 10 μL

तालिका 1: इस प्रयोग में निर्धारित क्रोमैटोग्राफिक स्थितियां। तालिका क्रोमैटोग्राफिक कॉलम, मोबाइल चरण, ग्रेडिएंट एल्यूशन, प्रवाह दर, कॉलम तापमान, डिटेक्शन तरंग दैर्ध्य और नमूना मात्रा के विवरण को सूचीबद्ध करती है।

अनुक्रमणिका घटक रैखिक समीकरण R2 रैखिकता की सीमा (mg/mL)
सालिड्रोसाइड Y = 2221X - 19.742 0.9996 0.06625–2.12
गैलिक एसिड Y = 29497X - 224 0.9997 0.008384–1.048
एथिल गैलेट Y = 28902X - 86.171 0.9999 0.008336–1.042

तालिका 2: आरजी में सूचकांक घटकों का रैखिक संबंध। आरजी में तीन सूचकांक घटकों में एक विशिष्ट एकाग्रता सीमा में एक अच्छा रैखिक संबंध था।

सूचकांक घटकों का चरम क्षेत्र 1 2 3 4 5 6 RSD %
सालिड्रोसाइड 900.6 917.4 899.8 917.4 940.1 890.5 1.95
गैलिक एसिड 6430.2 6544.2 6281.2 6327.7 6142.5 6636.9 2.83
एथिल गैलेट 12748.9 12833.1 13190.4 13152.3 13128.3 13090.5 1.42

तालिका 3: सटीक माप के परिणाम। सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट के चरम क्षेत्रों का आरएसडी 1.95%, 2.83% और 1.42% (एन = 6) था।

सूचकांक घटकों का चरम क्षेत्र 0 घंटे 6 घंटे 12 घंटे 18 घंटे 21 घंटे 24 घंटे RSD %
सालिड्रोसाइड 486.6 509 479 505.1 502.8 492 2.37
गैलिक एसिड 3236.5 3359.8 3152.2 3347.6 3337 3319.9 2.47
एथिल गैलेट 442 413 421 429 443.8 436 2.82

तालिका 4: स्थिरता परीक्षण के परिणाम। सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट के चरम क्षेत्रों का आरएसडी 2.37%, 2.47% और 2.82% (एन = 6) था।

सूचकांक घटकों का चरम क्षेत्र 1 2 3 4 5 6 RSD %
सालिड्रोसाइड 1337.3 1276.5 1283.7 1286.8 1242.6 1237.2 2.83
गैलिक एसिड 8432.1 8976.1 8792 9083.1 9040.2 8751.4 2.74
एथिल गैलेट 422.8 415.3 421.9 416.3 428.9 406.1 1.87

तालिका 5: प्रजनन क्षमता परीक्षण के परिणाम। सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट के चरम क्षेत्रों का आरएसडी 2.83%, 2.74% और 1.87% (एन = 6) था।

ज्ञात सामग्री (mg) मात्रा जोड़ना (मिलीग्राम) मात्रा मापना (मिलीग्राम) वसूली (%) औसत वसूली (%) आरएसडी (%)
0.5838 0.406 0.9783 97.18 99.91 2.70
0.5743 0.406 0.9984 104.47
0.5751 0.406 0.9755 98.63
0.5764 0.406 0.9776 98.81
0.5906 0.406 0.991 98.6
0.5802 0.406 0.9934 101.77
0.1234 0.118 0.2424 100.87 100.4 1.67
0.1214 0.118 0.2428 102.85
0.1216 0.118 0.2396 100
0.1218 0.118 0.2389 99.19
0.1249 0.118 0.2406 98.09
0.1226 0.118 0.2423 101.4
0.0221 0.386 0.4232 103.91 103.8 2.02
0.0218 0.386 0.4115 100.97
0.0218 0.386 0.4176 102.55
0.0218 0.386 0.4337 106.7
0.0224 0.386 0.4302 105.65
0.022 0.386 0.4198 103.05

तालिका 6: नमूना वसूली दर माप के परिणाम। सैलिड्रोसाइड, गैलिक एसिड और एथिल गैलेट की वसूली दर का आरएसडी क्रमशः 2.70%, 1.67% और 2.02% था।

अनुक्रमणिका घटक विघटन समीकरण R2
गैलिक एसिड GompertzMod 0.4978
गोम्पर्ट्ज़ 0.3740
उपस्कर 0.3739
वीबुल 0.3739
सालिड्रोसाइड GompertzMod 0.9894
गोम्पर्ट्ज़ 0.9783
उपस्कर 0.9781
वीबुल 0.9781
एथिल गैलेट GompertzMod 0.9895
गोम्पर्ट्ज़ 0.9852
उपस्कर 0.9853
वीबुल 0.9853

तालिका 7: अल्ट्राप्योर पानी में तीन सूचकांक घटकों के विघटन मॉडल के वक्र-फिटिंग परिणाम। आरजी के प्रत्येक सूचकांक घटक के उपयुक्त परिणाम गोम्पर्ट्ज़मॉड समीकरण के साथ सबसे अच्छे थे।

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Discussion

विघटन परीक्षण गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट15 में ठोस मौखिक तैयारी के विघटन और विघटन को अनुकरण करने के लिए एक आदर्श इन विट्रो विधि है। यह ठोस मौखिक तैयारी की गुणवत्ता का मूल्यांकन और नियंत्रण करने के लिए एक महत्वपूर्ण सूचकांक है। इसलिए, विघटन परीक्षण ठोस दवा मौखिक तैयारी के विकास में एक आवश्यक भूमिकानिभाता है। विशेष रूप से, पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) गुणवत्ता नियंत्रण प्रौद्योगिकी के विकास के साथ, विघटन का निर्धारण धीरे-धीरे चीनी और जातीय चिकित्सा यौगिक तैयारी17,18 के स्क्रीनिंग अध्ययनों पर लागू किया गया है।

वर्तमान में, विट्रो में टीसीएम और जातीय चिकित्सा के विघटन का निर्धारण मुख्य रूप से एक एकल सूचकांक घटक का पता लगाने पर आधारित है। हालांकि, पारंपरिक चीनी चिकित्सा और जातीय चिकित्सा की ठोस तैयारी एक जटिल है, और उनका विघटन कई कारकों (जैसे, तापमान, विघटन माध्यम, आदि) और उनकी जटिल रासायनिक संरचना19,20 से प्रभावित होता है। इसलिए, बहु-सूचकांक घटकों का पता लगाना विभिन्न घटकों के पारस्परिक प्रभाव और विघटन अंतर को बेहतर ढंग से प्रतिबिंबित कर सकता है। इस पेपर में, आरजी में तीन सूचकांक घटकों (गैलिक एसिड, सैलिड्रोसाइड और एथिल गैलेट) के इन विट्रो विघटन परीक्षण को मापा गया था, और इन तीन विशिष्ट घटकों के विघटन वक्रों को प्लॉट किया गया था, जिसने आरजी के गुणवत्ता नियंत्रण के लिए एक संदर्भ प्रदान किया था।

प्रयोग के दौरान, निम्नलिखित दो बिंदुओं पर विशेष रूप से ध्यान दिया जाना चाहिए। सबसे पहले, चीनी फार्माकोपिया 2020 संस्करण12 के अनुसार विघटन परीक्षण के लिए नमूना लेते समय, नमूना संग्रह के तुरंत बाद 37 डिग्री सेल्सियस ± 0.5 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर विघटन माध्यम की समान मात्रा को फिर से भरना चाहिए, जो प्रयोगात्मक प्रक्रिया में महत्वपूर्ण कदम है। दूसरे, नमूने ब्लेड के शीर्ष और विघटन माध्यम की सतह के बीच के क्षेत्र से एकत्र किए जाने चाहिए, विघटन कप की आंतरिक दीवार से ~ 10 मिमी। ऐसा इसलिए है क्योंकि दवा के विघटन की शुरुआत से लेकर पूर्ण विघटन के समय तक एक एकाग्रता ढाल होती है। एकाग्रता ढाल सरगर्मी की गति के व्युत्क्रमानुपाती होती है, इसलिए घुलित दवा एकाग्रता अविघटित दवा के पास सबसे अधिक होती है और सबसे कम होती है जहां सरगर्मी कमजोर होती है। इसलिए, इन दो चरम सीमाओं पर नमूना लेने से बचनाचाहिए।

यद्यपि मल्टी-इंडेक्स घटकों का पता लगाने से एकल-सूचकांक घटकों का पता लगाने की तुलना में टीसीएम / जातीय चिकित्सा यौगिक फॉर्मूलेशन के विभिन्न घटकों के विघटन भिन्नता को बेहतर ढंग से प्रतिबिंबित किया जा सकता है, लेकिन इसकी कुछ सीमाएं हैं। नमूने एकत्र करने के लिए सिरिंज का उपयोग करते समय मानव त्रुटि की क्षमता होती है। माप की सटीकता और सटीकता में सुधार किया जा सकता है यदि स्वचालित दवा विघटन मापलागू किया जा सकता है।

सारांश में, हमने आरजी में बहु-सूचकांक घटकों को निर्धारित करने के लिए एक इन विट्रो विघटन विधि स्थापित की है, जो आरजी के आगे के अध्ययन के लिए एक आधार प्रदान करती है। यह प्रयोग विवो बायोइक्विवलेंस अध्ययनों और अन्य जातीय दवाओं के विवो-इन विट्रो सहसंबंध अध्ययनों के लिए जानकारी और मार्गदर्शन प्रदान करसकता है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

इस काम को चीन के राष्ट्रीय कुंजी अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2017वाईएफसी 1703904), विश्वविद्यालय (चेंगदू विश्वविद्यालय ऑफ टीसीएम) - उद्यम (तिब्बत रोडियोला फार्मास्युटिकल होल्डिंग कंपनी लिमिटेड) सहयोग परियोजना (1052022040101) द्वारा वित्त पोषित किया गया था; सिचुआन प्रांत के विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग की क्षेत्रीय नवाचार और सहयोग परियोजना (2020YFQ0032); और किंघाई प्रांत के विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग के प्रमुख आर एंड डी और परिवर्तन कार्यक्रम (2020-एसएफ-सी 33)।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Chromatographic column ZORBAX Eclipse   XDB-C18 4.6 mm x 250 mm, 5 µm
Drug dissolution tester Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd. RCZ-6B3
Electronic analytical balance Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd. FA1004
Ethyl gallate (HPLC, ≥98%) Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. DSTDM006301
Function drawing software OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA 2022
Gallic acid (HPLC, ≥98%) Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. DSTDM000802
High performance liquid chromatography Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. Agilent 1260 Infinity Equation 1
HPLC grade methanol Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd. 216565
Injector Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instrument Co., Ltd. 0.7 (22 G)
Millipore filter Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd φ13 0.22 Nylon66
Rhodiola granules Tibet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd. 210501
Salidroside (HPLC, ≥98%) Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. DST200425-037
Ultra pure water systemic Merck Millipore Ltd. Milli-Q
Ultrasonic cleansing machine Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd SB-8200 DTS

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References

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चिकित्सा अंक 189 रोडियोला ग्रैन्यूल इन विट्रो विघटन निर्धारण विधि गैलिक एसिड सैलिड्रोसाइड एथिल गैलेट
तिब्बती चिकित्सा में मल्टी-इंडेक्स घटकों का एक <em>इन विट्रो</em> विघटन निर्धारण रोडियोला ग्रैन्यूल
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Du, Q., He, Q., Zhang, F., Mi, J., Li, Y., Wang, S., Zhang, Y. An In Vitro Dissolution Determination of Multi-Index Components in Tibetan Medicine Rhodiola Granules. J. Vis. Exp. (189), e64670, doi:10.3791/64670 (2022).

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