Summary
הפרוטוקול המוצג כאן מראה סינתזה של ג'לטין הידרוג'ל דביק חזק o-nitrosobenzaldehyde (ג'לטין-NB). לג'לטין-NB יכולת היצמדות מהירה ויעילה של רקמות, שיכולה להוות מחסום פיזי חזק להגנה על משטחי פצעים, ולכן הוא צפוי להיות מיושם בתחום הביוטכנולוגיה לתיקון פציעות.
Abstract
חומרי הדבקה הפכו לביו-חומרים פופולריים בתחום הביו-רפואי והנדסת רקמות. בעבודתנו הקודמת הצגנו חומר חדש - ג'לטין O-nitrosobenzaldehyde (ג'לטין-NB) - המשמש בעיקר להתחדשות רקמות ואומת במודלים של בעלי חיים של פגיעה בקרנית ומחלות מעי דלקתיות. זהו הידרוג'ל חדשני שנוצר על ידי שינוי ג'לטין ביולוגי עם o-nitrosobenzaldehyde (NB). ג'לטין-NB סונתז על ידי הפעלת קבוצת הקרבוקסיל של NB-COOH ותגובה עם ג'לטין באמצעות 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) ו-N-hydroxysuccinimide (NHS). התרכובת המתקבלת טוהרה כדי ליצור את המוצר הסופי, אשר ניתן לאחסן ביציבות במשך 18 חודשים לפחות. ל-NB יש היצמדות חזקה ל-NH2 על הרקמה, מה שיכול ליצור קשרים רבים של C = N, ובכך להגדיל את ההיצמדות של ג'לטין-NB לממשק הרקמה. תהליך ההכנה כולל שלבים לסינתזה של קבוצת NB-COOH, שינוי הקבוצה, סינתזה של ג'לטין-NB וטיהור התרכובת. המטרה היא לתאר בפירוט את תהליך הסינתזה הספציפי של ג'לטין-NB ולהדגים את היישום של ג'לטין-NB לתיקון נזקים. יתר על כן, הפרוטוקול מוצג כדי לחזק ולהרחיב עוד יותר את אופי החומר המיוצר על ידי הקהילה המדעית לתרחישים ישימים יותר.
Introduction
הידרוג'ל הוא סוג של פולימר תלת מימדי שנוצר על ידי נפיחות מים. בפרט, הידרוג'ל הנגזר מטריצה חוץ-תאית נמצא בשימוש נרחב בתחום הביוסינתזה והרפואה הרגנרטיבית בגלל התאימות הביולוגית המצוינת שלוויעילותו הטיפולית 1. הידרוג'לים דווחו לטיפול בכיבי קיבה, דלקת עצבים, אוטם שריר הלב 2,3,4 ומחלות אחרות. יתר על כן, הוכח כי ג'לטין-NB יכול לקדם את התוצאה של דלקת מחלת מעי דלקתית (IBD)5. הידרוג'לים מסורתיים כוללים גאם גלן, ג'לטין, חומצה היאלורונית, פוליאתילן גליקול (PEG), שכבות, הידרופוביות/הידרופיליות, אלגינט/פוליאקרילאמיד, רשת כפולה והידרוג'לים פוליאמפוטריים6, שלכולם יש היסטותאימות טובה ותכונות מכניות. עם זאת, הידרוג'לים מסורתיים אלה פגיעים ללחות ולאוויר בסביבה. אם הם נחשפים לאוויר במשך זמן רב, הם יאבדו מים ויתייבשו; אם הם שקועים במים במשך זמן רב, הם יספגו מים ויתרחבו7, ובכך יפחיתו את גמישותם ואת תפקודם המכני. בנוסף, שמירה על הידבקות רקמות של הידרוג'לים קונבנציונליים היא אתגר גדול8.
בהתבסס על זה, תכננו וסינתזנו ג'לטין-NB הידרוג'ל ננומטרי, שהוא הידרוג'ל חדשני שנוצר על-ידי שינוי ג'לטין ביולוגי עם NB (איור 1). NB יש יכולת הדבקה חזקה ל -NH 2 על הרקמה, אשר יכול ליצור מספר רב של קשרים C = N, ובכך להגדיל את ההדבקה של ממשק רקמת הידרוג'ל. הדבקה חזקה זו יכולה לגרום להידרוג'ל להיצמד היטב לפני הרקמה, ובכך ליצור ציפוי מולקולרי ברמה ננומטרית. במחקרים קודמים של הצוות, אושר כי סוג זה של ציפוי הידרוג'ל שונה שיפר את הידבקות רקמות9; הוא יכול להיצמד ביציבות לאיברי ורקמות הקרנית והמעיים ולמלא תפקידים נגד דלקת, בידוד מחסום וקידום התחדשות. המטרה היא להציג את תהליך הסינתזה הספציפי של ג'לטין-NB בפירוט כאן, כך שניתן יהיה ליישם את הג'לטין-NB בתרחישים נוספים של תיקון נזקים. יתר על כן, אנו מעודדים חוקרים אחרים לחזק ולהרחיב עוד יותר את אופי החומר הזה כדי להתאים לתרחישי יישום נוספים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
עכברי C57BL/6 נרכשו מבית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'ג'יאנג בבית החולים סר ראן ראן שו. הארנבים הניו זילנדים נרכשו מאוניברסיטת ג'ג'יאנג. בעלי החיים הוחזקו בתנאי מחזור טבעי של אור-חושך וקיבלו מזון ומי שתייה באופן חופשי. כל הליכי הניסוי אושרו באופן אתי על ידי ההנחיות המוסדיות של הנחיות התקן של ועדת האתיקה של אוניברסיטת ג'ג'יאנג (ZJU20200156) ובית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'ג'יאנג סר ראן ראן ראן שו בית החולים טיפול ושימוש בבעלי חיים, אשר התאימו למדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (SRRSH202107106).
1. סינתזה של NB-COOH
- הכינו 4-הידרוקסי-3-(מתוקסי-D3) בנזלדהיד (8.90 גרם, 58.5 מילימול, 1.06 שווה ערך [eq.]), אשלגן פחמתי (10.2 גרם, 73.8 מילימול, 1.34 eq.) ומתיל 4-ברומובוטיראט (9.89 גרם, 55.0 מילימול, 1.0 eq.) בהתבסס על הפרוטוקול שהוצע במחקרהקודם 10. ממיסים את התרכובות ב-40 מ"ל N, N-דימתילפורממיד (DMF) ומערבבים בטמפרטורת הסביבה במשך 16 שעות.
- הוסף 200 מ"ל של מים 0 °C לתערובת לזרז את התערובת כדי לקבל מוצר גולמי.
- יש להמיס שוב ושוב את המוצר הגולמי ב-DMF ולאחר מכן לזרז במשך חמישה מחזורים. לזרז את המוצר הגולמי ולייבש אותו ב 80 ° C במשך 2 שעות כדי לקבל את המוצר המוקדם.
2. שינוי ועיבוד כימי
- בצע את החלפת ipso של מתיל 4-(4-formyl-2-methoxyphenoxy methoxyphenyl) butanoic acid methyl ester כמתואר להלן.
- הוסף 9.4 גרם של מתיל 4-(4-formyl-2-methoxyphenoxy) butanoate (37.3 mM, 1 eq.) באיטיות לתמיסה מקוררת מראש (-2 ° C) של 70% חומצה חנקתית (140 מ"ל) וערבבו ב -2 ° C במשך 3 שעות.
הערה: בהתאם לטמפרטורה של תגובת הניטרציה, החלפת ipso של moiety פורמיל יתרחש. - סנן את התערובת (~ 9.0 גרם) עם 200 מ"ל של 0 ° C מים, ולאחר מכן לטהר אותו DMF כדי לזרז מוצר מוצק.
- הידרוליזה של המוצר המוצק בחומצה טריפלואורואצטית (TFA)/H2O, 1:10 v/v (100 מ"ל) ב-90°C ויבש. הסר את הממס מתחת ל- 80 kPa כדי לקבל את מוצר הביניים הסופי, אבקה יבשה בצבע צהוב בהיר.
- ממיסים את מוצר הביניים (7.4 גרם, 23.8 מילימול, 1.0 eq.) בטטרהידרופורן (THF)/אתנול, 1:1 v/v (100 מ"ל). לאחר מכן הוסף 1.43 גרם של NaBH4 (35.7 mM, 1.5 eq.) לאט ב 0 ° C. לאחר 3 שעות, הסר את כל הממסים תחת ואקום והשהה את השאריות בתמיסת מים ודיכלורומתאן ביחס 1:1 (50 מ"ל כל אחד).
- הכינו דיכלורומתאן כדי לחלץ את המוצר מהשכבה המימית. מסירים את השכבה האורגנית ומייבשים מעל מגנזיום גופרתי.
- לטהר את המוצר הגולמי על ידי כרומטוגרפיה של עמודי ג'ל סיליקה באמצעות DCM/MeOH ביחס של 10:1 (1% TEA). לבסוף, להשיג 5.31 גרם (18.6 mM, 78.3%) של אבקה צהבהב טהור יחסית NB-COOH.
3. סינתזה של ג'לטין-NB
- הכינו 5 גרם של ג'לטין עבור אצווה אחת של שינוי. הכן תמיסת ג'לטין הומוגנית על ידי המסת 5 גרם של ג'לטין ב 100 מ"ל של מים deionized ולאחסן ב 37 ° C.
הערה: כאן, המקורי 33 x 10-5 שומות ε-קבוצות אמינו / g ג'לטין11 מוגדר. - הגדר את יחס ההזנה (FR) כיחס המולרי בין קבוצות NB וקבוצות אמינו ראשוניות בג'לטין. במחקר זה, 53 מ"ג של NB עם 1 גרם של ג'לטין הוגדר FRNB = 1.
- יש להמיס 1,060 מ"ג של NB-COOH ב-5 מ"ל של דימתיל סולפוקסיד (DMSO) כדי להפעיל את קבוצות הקרבוקסיל של NB-COOH. מכיוון שקבוצת NB רגישה לאור אולטרה סגול (UV) כאשר היא בתמיסה, תמיד יש להרחיק אותה מאור.
- הוסיפו 746 מ"ג של 1-(3-דימתילאמינופרופיל)-3-אתילקרבודימיד הידרוכלוריד (EDC) לתמיסת NB-COOH DMSO וערבבו במשך 5 דקות. לאחר המסת EDC, יש להוסיף 448 מ"ג של N-הידרוקסיסוקסינימיד (NHS) ולערבב במשך 5 דקות.
- השתמשו במשפך טיפה כדי לזרוק באיטיות את התערובת בקצב של 0.5 מ"ל/דקה לתוך תמיסת הג'לטין המומס תוך ערבוב נמרץ כדי להגיב ב-45°C במשך 4 שעות.
4. טיהור ואחסון המוצר
- דיאליזה של תמיסת הג'לטין-NB כנגד עודפי מים שעברו דה-יוניזציה למשך 3 ימים לפחות, ולאחר מכן לאסוף, להקפיא וליופיליזציה כדי להשיג את קצפי הג'לטין-NB. יש לשמור את הקצף במייבש בחושך לשימוש נוסף.
- יש להמיס את קצפי הג'לטין-NB המיובשים בהקפאה במים נטולי יונים, בטמפרטורה של 37°C, מיד לפני השימוש.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איור 2A מראה סכמה של התגובות הכימיות העיקריות המעורבות בסינתזה של ג'לטין-NB, אשר מקדם אינטגרציה של רקמות על-ידי השתלת קבוצות NB על ג'לטין. איור 2B מראה שה-O-nitrobenzene של הידרוג'ל הג'לטין-NB הופך לקבוצת NB מיד לאחר הקרנת UV, ואז ניתן להצליב את קבוצת האלדהיד הפעילה עם קבוצת אמינו כדי ליצור בסיס Schiff. איור 2C מצביע על כך שיחסים שונים של קבוצות NB יכולים להוביל למבנים צולבים שונים של ג'לטין-NB.
במקביל נערך גם אפיון ראשוני של התכונות הפיזיקליות של ג'לטין-NB. כפי שניתן לראות באיור 3, לג'לטין-NB יש ג'לציה חזקה כאשר יחס ההזנה (FR) של NB נמוך. משמעות הדבר היא כי ג'לטין-NB עם FR נמוך יוצר הידרוג'ל רך בשל נוכחות של מספר רב של קבוצות אמינו שיכולות להגיב עם קבוצות אלדהיד photogenerated בעוד ג'לטין-NB עם FR גבוה יכול לשמור על טיפה גמישה. ראינו גם שהמורפולוגיה הכוללת של ג'לטין-NB נצמדת ביציבות לפני השטח של הקרנית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM), כפי שמוצג באיור 3C. עם זאת, משטח קרנית פצוע שטופל בכלום או בג'לטין נראה חלק. איור 3D מראה כי לג'לטין-NB המסומן באופן פלואורסצנטי יש את היכולת להיצמד לרקמת המעי וליצור ציפוי צפוף. עם זאת, עוצמת הפלואורסצנטיות של קבוצת הג'לטין חלשה מאוד, מה שמעיד על כך שהיא אינה נצמדת היטב לדופן המעי. איור 3E מראה שגם ג'לטין וגם ג'לטין-NB מסוגלים בתחילה להיצמד ללוח האמין. עם זאת, לאחר שפיכת מלח חוצץ פוספט (PBS) לתוך הצלחת aminated ולשנות אותו כל 4 שעות במשך 24 שעות, רק ג 'לטין-NB שומר על פלואורסצנטיות חזקה, המציין כי הוא דבק חזק. תוצאות אלה מצביעות על כך שג'לטין-NB יכול להיצמד לפני השטח של הרקמה וליצור שכבה צפופה אחידה ויציבה. כפי שניתן לראות באיור 3F, הספקטרום של משטח הקרנית ומשטח שטופל בג'לטין כמעט זהים. עם זאת, בקבוצה שטופלה בג'לטין-NB, יש שיא נוסף המופיע ב 400 eV, המציין היווצרות של קשרי C = N רבים ברקמה לאחר טיפול בג'לטין מופעל UV-NB12.
איור 1: שלבים של תגובת הסינתזה של NB-COOH. האיור מספק ייצוג סכמטי של תגובת סינתזה לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: תכנון וסינתזה של ג'לטין-NB. (A) סכמה של התגובה הכימית להיווצרות ג'לטין-NB. (B) תרשים סכמטי המדגים את שינוי המבנה הכימי המופעל על ידי צילום של הידרוג'ל ג'לטין-NB. O-nitrobenzene מומר לקבוצות NB תחת חשיפה לקרינת UV. לאחר מכן, קבוצת אלדהיד הפעילה יכלה לאחר מכן להצליב עם קבוצות אמינו כדי ליצור בסיסי שיף. (C) סכמה של ג'לטין-NB היוצר הידרוג'ל וציפוי תחת יחסי הזנה שונים. נתון זה שונהמ-12. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3: אפיון של ג'לטין-NB. (A) ביצועי הג'לינג המשתנים של ג'לטין-NB עם יחסי הזנה שונים של NB. (1-4) מייצגים יחסי הזנה של 0.5, 1, 2 ו-4 NB של ג'לטין-NB, בהתאמה. (B) מבט גס על תמיסת ג'לטין-NB משונה בלתי פעילה, ותמיסת ג'לטין-NB לאחר תאורת UV. (C) תמונות SEM של משטח הקרנית הפגוע, הג'לטין ומשטח הקרנית המטופל בציפוי חלבון ג'לטין-NB-4. פסי קנה מידה: 30 מיקרומטר (לוחות עליונים); 40 מיקרומטר (פנלים תחתונים, מוגדלים). (D) תמונות פלואורסצנטיות של משטח המעי הגס של עכברים המסומנות על-ידי ציפוי מולקולרי של ג'לטין וג'לטין-NB. פסי קנה מידה: 200 מיקרומטר. (E) תמונות פלואורסצנטיות של לוחות הציפוי המולקולרי של ג'לטין וג'לטין-NB שטופלו בציפוי מולקולרי ב-0 שעות ו-24 שעות. פסי קנה מידה: 20 מיקרומטר. (F) ספקטרוסקופיית פוטונים בקרני רנטגן (XPS) של קשר ג'לטין-NB-4 לרקמה. אנרגיות הקשר של הפפטיד -C-NH- וקבוצת האמינו אמין C-NH2 הנעות עקב הופעת שיא הקשר C = N חושפות את היווצרות ה- UV של בסיסי שיף. נתון זה שונהמ-5 ו-12. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
חומרי דבק הם סוג חדש של חומר. יותר ויותר חוקרים מחויבים לסינתזה של חומרי דבק מסוגים שונים, ומנסים למצוא את יישומם בביוטכנולוגיה, הנדסת רקמות, רפואה רגנרטיבית ותחומים נוספים, מה שהוביל לפיתוח נמרץ בשנים האחרונות. בנוסף להתמקדות בהדבקה חזקה של חומרי דבק, החוקרים גם מקדישים תשומת לב רבה יותר לתכונות אחרות, כגון הזרקה, ריפוי עצמי, המוסטטי, אנטיבקטריאלי, הסרה מבוקרת וכן הלאה13. יישומים חדשים אלה מרחיבים מאוד את היקף היישום של חומרי הדבקה עם סיכויי יישום מבטיחים.
במאמר זה הוצגה שיטת הסינתזה של ג'לטין-NB הידרוג'ל חדשני. ג'לטין-NB יש הידבקות חזקה, והוא דיווח כי זה יכול להיות מיושם על תיקון של פגיעה בקרנית ופגיעה מעיים בפועל קליני 5,12. לכן, זה ערך אקדמי רב היישום כדי לפופולרי את שיטת ההכנה של ג 'לטין NB.
שלב המפתח להכנת ג'לטין-NB הוא תהליך הסינתזה. אנו מציעים את הרעיון של יחס הזנה (FR), שהוא היחס המולרי בין קבוצת NB לבין קבוצת האמינו העיקרית בג'לטין. ה- FR לסינתזה של ג'לטין-NB אינו קבוע וניתן לכוונן אותו בהתאם לאופי ממשק הרקמה הדבק. עבור קרניות ארנב, FR של טיפות עיניים ג'לטין-NB הוא FRNB = 2, בעוד שמספר קבוצות האמינו על פני השטח של מעי גס עכבר הוא גבוה יחסית12; FRNB = 2 מוכיח שאינו FR האופטימלי לכך, ובדרך כלל יש להגדיל אותו לכ -4 כדי להשיג את אפקט ההדבקה האופטימלי. בעת סינתזה של ג'לטין-NB בתרחישי יישום שונים, יש צורך להגדיר שיפוע FR טרום ניסוי כדי לחקור את אפקט ההדבקה הטוב ביותר. בנוסף, הזכרנו במאמר כי NB צריך להיות רחוק מאור UV בכל עת, כי קבוצות NB רגישים מאוד UV; אנו ממליצים להימנע ככל האפשר מכל מקורות האור הישירים במהלך תהליך הסינתזה, כדי למזער את ההשפעה של אור UV על קבוצות NB.
יחד עם זאת, לטכנולוגיית סינתזה זו יש כמה מגבלות. לדוגמה, התשואה הנמוכה של מוצרים גולמיים מובילה לצורך בצריכה גדולה יותר של חומרי גלם. אנו מנסים לשנות תנאי תגובה שונים כדי לשפר את התפוקה, כגון התאמת טמפרטורת התגובה והארכה נוספת של זמן התגובה. אנו נעדכן את התקדמות המחקר בזמן. חוקרים יכולים להתייחס לסרטון כדי לשפר את אסטרטגיית ההכנה של ג'לטין o-nitrosobenzaldehyde או לשנות עוד יותר את הקבוצה על בסיס זה כדי לענות על צרכים ביו-רפואיים נוספים. אנו מאמינים כי שיטת הסינתזה של ג'לטין o-nitrosobenzaldehyde המתוארת במאמר זה תאיץ את הפיתוח של רפואה ביוסינתטית ורגנרטיבית. בנוסף, ג'לטין-NB צפוי להיות מיושם עוד יותר במקרים קליניים קריטיים, כגון דימום הנגרם על ידי פגיעה חריפה בכלי הדם, קרע של כבד וטחול, ניקוב קיבה בעתיד.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
למחברים אין מה לחשוף.
Acknowledgments
ללא.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1-(3Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodimide hydrochloride (EDC) | Aladdin | L287553 | |
| 4-Hydroxy-3-(methoxy-D3) benzaldehyde | Shanghai Acmec Biochemical Co., Ltd | H946072 | |
| DCM | Aladdin | D154840 | |
| Dichloromethane | Sigma-Aldrich | 270997 | |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | 20-139 | |
| dimethylformamide (DMF) | Sigma-Aldrich | PHR1553 | |
| gelatin | Sigma-Aldrich | 1288485 | |
| magnesium sulfate | Sigma-Aldrich | M7506 | |
| MeOH | Sigma-Aldrich | 1424109 | |
| methyl 4-(4-formyl-2-methoxyphenoxy methoxyphenyl) butanoic acid methyl ester | chemsrc | 141333-27-9 | |
| methyl 4-bromobutyrate | Aladdin | M158832 | |
| NaBH4 | Sigma-Aldrich | 215511 | |
| N-hydroxysuccinimide (NHS) | Aladdin | D342712 | |
| nitric acid | Sigma-Aldrich | 225711 | |
| potassium carbonate | Sigma-Aldrich | 209619 | |
| SEM (Nova Nano 450) | Thermo FEI | 17024560 | |
| THF/EtOH | Aladdin | D380010 | |
| trifluoroacetic acid (TFA) | Sigma-Aldrich | 8.0826 |
References
- Tam, R. Y., Smith, L. J., Shoichet, M. S. Engineering cellular microenvironments with photo- and enzymatically responsive hydrogels: toward biomimetic 3D cell culture models. Accounts of Chemical Research. 50 (4), 703-713 (2017).
- Xu, X., et al. Bioadhesive hydrogels demonstrating pH-independent and ultrafast gelation promote gastric ulcer healing in pigs. Science Translational Medicine. 12 (558), (2020).
- Zheng, J., et al. Directed self-assembly of herbal small molecules into sustained release hydrogels for treating neural inflammation. Nature Communications. 10 (1), 1604 (2019).
- Seif-Naraghi, S. B., et al. Safety and efficacy of an injectable extracellular matrix hydrogel for treating myocardial infarction. Science Translational Medicine. 5 (173), (2013).
- Mao, Q., et al. GelNB molecular coating as a biophysical barrier to isolate intestinal irritating metabolites and regulate intestinal microbial homeostasis in the treatment of inflammatory bowel disease. Bioactive Materials. 19, 251-267 (2022).
- Nan, J., et al. A highly elastic and fatigue-resistant natural protein-reinforced hydrogel electrolyte for reversible-compressible quasi-solid-state supercapacitors. Advanced Science. 7 (14), 2000587 (2020).
- Matsumoto, K., Sakikawa, N., Miyata, T. Thermo-responsive gels that absorb moisture and ooze water. Nature Communications. 9 (1), 2315 (2018).
- Liu, R., et al. resilient, adhesive, and anti-freezing hydrogels cross-linked with a macromolecular cross-linker for wearable strain sensors. ACS Applied Materials & Interfaces. 13 (35), 42052-42062 (2021).
- Hong, Y., et al. A strongly adhesive hemostatic hydrogel for the repair of arterial and heart bleeds. Nature Communications. 10 (1), 2060 (2019).
- Yang, Y., et al. Tissue-integratable and biocompatible photogelation by the imine crosslinking reaction. Advanced Materials. 28 (14), 2724-2730 (2016).
- Ofner, C. M., Bubnis, W. A. Chemical and swelling evaluations of amino group crosslinking in gelatin and modified gelatin matrices. Pharmaceutical Research. 13 (12), 1821-1827 (1996).
- Zhang, Y., et al. A long-term retaining molecular coating for corneal regeneration. Bioactive Materials. 6 (12), 4447-4454 (2021).
- Liang, Y., Li, Z., Huang, Y., Yu, R., Guo, B. Dual-dynamic-bond cross-linked antibacterial adhesive hydrogel sealants with on-demand removability for post-wound-closure and infected wound healing. ACS Nano. 15 (4), 7078-7093 (2021).
