Summary
이 프로토콜은 골절 치유 연구를 위해 골수 내 와이어로 안정화된 마우스의 대퇴골에 골절 골절을 확립하기 위한 수술 절차를 설명합니다.
Abstract
뼈는 상당한 재생 능력을 가지고 있습니다. 그러나 골절 치유는 복잡한 과정이며, 병변의 정도와 환자의 연령 및 전반적인 건강 상태에 따라 실패가 발생하여 유합이 지연되거나 유합되지 않을 수 있습니다. 고에너지 외상과 노화로 인한 골절의 증가로 인해 골격/중간엽 줄기세포/기질 세포와 생체모방 생체재료의 조합을 기반으로 한 뼈 복구를 개선하기 위한 혁신적인 치료 전략의 개발이 시급합니다. 이를 위해 신뢰할 수 있는 동물 모델을 사용하는 것은 치유 결과를 결정하는 주요 세포 및 분자 메커니즘을 더 잘 이해하는 데 필수적입니다. 모든 모델 중에서 마우스는 실험 분석을 위한 다양한 형질전환 균주와 시약을 제공하기 때문에 선호되는 연구 모델입니다. 그러나 마우스에서 골절을 확립하는 것은 크기가 작기 때문에 기술적으로 어려울 수 있습니다. 따라서 이 논문은 연골 굳은살 형성을 통해 골수 내 와이어로 안정화되고 가장 일반적인 뼈 복구 과정과 유사한 마우스에서 대퇴골 골절의 외과적 확립 절차를 시연하는 것을 목표로 합니다.
Introduction
골격은 중요하고 기능적으로 다재다능한 기관입니다. 골격의 뼈는 신체의 자세와 움직임을 가능하게 하고, 내부 장기를 보호하며, 생리적 반응을 통합하는 호르몬을 생산하고, 조혈과 미네랄 저장의 장소이다1. 골절된 뼈는 재생 능력이 뛰어나 부상 전의 형태와 기능을 완전히 회복할 수 있습니다. 치유 과정은 혈종의 형성과 염증 반응으로 시작되며, 이는 골막, 내막, 골수에서 골격 줄기/전구 세포의 활성화 및 응축을 유도하고 이후 분화하여 부드러운 연골 굳은살을 형성합니다. 골절된 말단의 가교는 연골 골격이 확장되고 광물화되어 단단한 골질 굳은살을 형성하는 내연골 형성과 유사한 과정을 통해 발생합니다. 마지막으로, 딱딱한 굳은살은 파골세포와 조골세포에 의해 점차적으로 리모델링되어 원래의 뼈 구조를 복원합니다 2,3.
골절 치유 과정은 상당히 견고하지만, 사건의 복잡한 요약을 수반하며, 골절된 뼈의 기계적 안정화 방식, 감염 발생 및 주변 연조직 손상의 중증도와 같은 부상 요인뿐만 아니라 환자의 일반적인 건강 상태, 연령 및 성별을 포함한 여러 개별 요인에 의해 크게 영향을 받는다4, 5,6입니다. 따라서 실패가 흔하여 불유합이 발생하여 환자의 재활과 삶의 질에 큰 영향을 미친다 7,8. 고에너지 외상과 노화로 인한 골절 건수 증가와 높은 치료 비용으로 인해 비유합 골절은 전 세계 의료 시스템에 부담이 되고 있습니다 9,10. 이러한 부담 증가는 골격/중간엽 줄기세포/기질 세포와 생체모방 생체재료(13,14)의 조합을 기반으로 뼈 복구(bone repair)11,12를 개선하기 위한 혁신적인 치료 전략의 시급한 필요성을 강조한다.
이 목표를 달성하기 위해 동물 모델은 골절 치유 메커니즘의 기본 생물학을 이해하는 것을 목표로 하는 연구와 뼈 복구를 촉진하기 위한 새로운 치료 전략을 고안하는 것을 목표로 하는 개념 증명 전임상 연구에서 널리 사용되었습니다 15,16,17. 마우스와 같은 소동물 모델은 실험 분석을 위한 유전자 변형 균주 및 시약의 광범위한 가용성과 낮은 유지 관리 비용으로 인해 골절 치유 연구에 탁월합니다. 또한, 마우스는 빠른 치유 시간 경과를 가지며, 이는 복구 과정(15)의 모든 단계의 시간적 분석을 가능하게 한다. 그러나 동물의 크기가 작기 때문에 인간에게 적용되는 것과 유사한 고정 모드로 골절을 외과적으로 생산하는 데 어려움이 있을 수 있습니다. 이 프로토콜은 연골 굳은살 형성을 통해 가장 일반적인 뼈 복구 과정과 유사한 골수 내 와이어로 안정화된 개방 대퇴 절골술을 사용하여 마우스의 골절 치유에 대한 간단하고 저렴한 모델을 설명하며 골절 부위에 대한 접근이 필요한 기본 및 중개 조사 모두에 사용할 수 있습니다.
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Protocol
모든 실험은 리우데자네이루 연방 대학교 보건 과학 센터의 동물 사용 및 관리 위원회(프로토콜 번호 101/21)의 승인을 받았습니다. 이 연구에서는 생후 10-12주(체중 25-30g)의 수컷 Balb/c 마우스를 사용했습니다. 수술 절차는 마우스당 약 15-20분이 소요됩니다. 각 시술 전에 필요한 기구( 재료 표에 나열됨)는 수술대를 덮고 있는 멸균 수술 필드 위에 정리되어야 합니다(그림 1A). 금속 수술 기구는 123°C에서 30분 동안 자체 밀봉 봉투에 고압멸균해야 합니다. 바늘 및 거즈 패드와 같은 일회용품은 멸균 상태로 조달해야 합니다.
1. 동물 준비
- 쥐를 마취하고 기관 동물 관리 및 사용 프로그램에서 승인한 수의학 권장 요법에 따라 진통을 수행합니다.
알림: 가능한 경우 흡입 마취를 수행하는 것이 좋습니다. 흡입 마취를 위한 프로토콜에 대한 설명은 Ewald et al.18의 보고서에서 찾을 수 있습니다. 그러나 골면역학 연구를 위해 골절이 발생하는 경우 이소플루란을 포함한 여러 휘발성 마취제가 선천성 및 적응 면역 세포 모두의 활동에 영향을 미친다는 증거가 있으므로 이러한 유형의 마취를 피해야 합니다19,20. - 마우스가 움직이지 않으면 왼쪽 다리를 면도한 다음 멸균 수술용 드레이프로 덮인 37°C의 따뜻한 가열 패드( 재료 표 참조)의 수술대로 옮깁니다.
- 10% 포비돈-요오드 스폰지로 피부를 문질러 절개 부위를 소독합니다. 소독은 절개선을 따라 시작하여 원형 패턴으로 바깥쪽으로 확장되어야 합니다. 멸균 거즈 패드로 문지른 부위를 말리고 70% 에탄올로 세척한 다음 멸균 거즈 패드로 다시 건조시킵니다. 이 절차를 세 번 반복합니다.
- 마우스를 오른쪽 측면 욕창 위치에 놓고 수술용 테이프로 발을 고정합니다(그림 1C).
- 절개 부위만 보이도록 마우스를 드레이프합니다(그림 1D).
2. 수술 절차
- 수술 중에는 쥐가 숨을 쉬고 있는지 지속적으로 확인하고 눈에 안약을 넣어 건조를 방지하고 쥐가 실명하는 것을 방지하십시오.
알림: 전체 수술 절차는 숙련된 외과의가 수행할 때 일반적으로 ~15-20분이 소요됩니다. 따라서 시술을 시작할 때 안약을 한 번 바르는 것으로 충분합니다. 시술이 길어지기 시작하면 눈이 건조해지기 시작하는 것으로 확인될 때마다 추가 적용을 수행할 수 있습니다. - 절개를 진행하기 전에 꼬리를 꼬집어 통증 반응 반사를 확인하고 호흡 속도(분당 흉부 움직임 횟수 계산)를 육안으로 검사하여 마취 깊이를 평가합니다.21. 최적의 마취 상태에서 마우스는 꼬리 꼬집기에 반응하지 않아야 하며 호흡 속도는 분당 약 55-65회여야 합니다21.
- 메스 블레이드(11번, 재료 표 참조)로 경골 결절 수준에서 시작하여 슬개골 수준까지 확장한 다음 동일한 거리 동안 대퇴골 원위 쪽으로 1cm 피부 측면 슬개골 절개를 합니다(그림 1E).
- 끝이 뭉툭한 가위로 절개선 주변의 피하 근막을 절개하여 근막, 외측 광대, 대퇴 이두근을 노출시킨다22.
- 11번 메스를 사용하여 경골 결절 수준에서 시작하여 대퇴골 원위 수준까지 이두박근 대퇴골 아포뉴로시스를 따라 관절낭을 열고 무릎 관절에 접근하기 위해 피부에서 만든 것과 유사한 근막 라타를 또 한 번 절개합니다(그림 1F, G).
- 직선 톱니 모양의 정밀 팁 핀셋( 재료 표 참조)의 끝을 그 아래에 놓고 슬개골 및 대퇴사두근 인대와 함께 옆으로 밀어 대퇴골의 과두를 노출시켜 슬개골의 내측 탈구를 수행합니다(그림 1H).
- 톱니 모양의 팁 핀셋으로 대퇴골을 잡고 무릎을 90°로 구부리고 26G의 피하 주사 바늘로 과두 간 포사를 통해 대퇴골의 골수내를 수동으로 천공합니다(그림 1I, J).
- 무릎을 90°로 구부린 상태에서 1.0인치(0.016mm) 스테인리스강 막대 와이어(그림 0.40K, 삽입)( 재료 표 참조)의 세그먼트를 대퇴골의 수질관으로 개구부를 통해 대퇴골의 수질관으로 삽입합니다(그림 1K).
알림: 무릎을 90°로 구부린 상태로 유지하는 것은 와이어를 수질관에 적절하게 삽입하는 데 중요합니다. 그렇게 하지 않으면 뼈와 주변의 연조직 병변에서 와이어가 빠져나가게 됩니다. - 직선 톱니 모양의 팁 핀셋으로 와이어의 미리 구부러진 말단을 조정하여 측면 과두에 단단히 고정합니다(그림 1L). 와이어를 제자리에 고정하는 것 외에도 구부러진 사지는 와이어의 사후 제거를 용이하게 합니다.
- 톱니 모양의 팁 핀셋으로 뭉툭한 끝 절개를 통해 외측 광대와 대퇴 이두근을 분리하여 대퇴골의 원위 단부에 접근합니다(그림 1M).
- 대퇴골 골격 주위에 약 90° 각도로 절개 가위를 삽입하고 전체 피질 절골술을 부드럽게 수행합니다(그림 1N).
알림: 생쥐 대퇴골은 쉽게 절단됩니다. 골수 내 와이어의 구부러짐과 광범위한 골절 분쇄를 피하기 위해 절골술 중 과도한 힘을 가하지 마십시오. - 직선 톱니 모양의 정밀 팁 핀셋의 끝을 과두 부위 위로 밀어 근육과 슬개골의 위치를 변경합니다.
- 6-0 흡수성 봉합사로 근육 근막을 닫은 다음 6-0 나일론 봉합사( 재료 표 참조)를 사용하여 피부를 닫습니다(그림 1O).
- 복구를 위해 마우스를 개별 깨끗한 케이지로 옮깁니다. 깨어나면 마우스는 무제한 체중 부하로 자유롭게 움직일 수 있어야 합니다.
- 수술 후 다음 날에는 기관 동물 관리 및 사용 프로그램에서 승인한 수의사 권장 요법에 따라 진통을 수행합니다.
3. 엑스레이 영상
- 1.1단계에서 설명한 대로 마우스를 마취합니다.
알림: 수술 직후 방사선 촬영을 수행하고 마우스가 여전히 최적의 마취 상태(2.2단계)인 경우 이 단계를 수행할 필요가 없습니다. - 골절된 대퇴골의 깨끗한 측면 보기를 위해 마우스를 등쪽 욕창 위치에 놓고 수술한 뒷다리를 옆으로 약간 당깁니다.
- 수술용 테이프로 발을 고정합니다.
- 사용 가능한 장비 프로토콜에 따라 방사선 촬영을 수행합니다.
알림: 이 연구를 위해 디지털 치과용 X선 발생기는 70kVp 전압, 7mA 전류 및 0.2초 노출 시간 매개변수와 함께 사용되었습니다.
4. 조직학 처리 및 H&E 염색
- 복강 내 마취제 과다 투여로 쥐를 안락사시킵니다(기관 동물 관리 및 사용 프로그램에서 승인한 수의학 권장 요법 참조). 꼬리 꼬집음으로 마취 깊이를 확인한 후 경추 탈구를 실시합니다. 다음으로, 골절된 뼈를 채취하여 과도한 주변 근육 조직23을 제거하고 10% 완충 포르말린 용액(pH 7.4)에 3일 동안 뼈를 고정합니다.
- 뼈 샘플을 라벨이 부착된 조직학 카세트( 재료 표 참조)에 넣고 석회질 제거를 위해 10일 동안 인산염 완충 식염수(PBS), pH 7.4에 14% EDTA에 담그십시오. 석회질 제거 용액을 일주일에 두 번 교체하십시오.
- 에탄올 농도가 증가하는 일련의 용액(70%, 80%, 90%, 100%, 100%)에서 샘플을 각각 1시간 동안 탈수합니다.
- 각각 30분 동안 두 개의 순차적인 크실렌 수조에서 샘플을 제거합니다.
- 왁스 침투의 경우 샘플을 60°C의 두 개의 순차적 파라핀 수조에 30분 동안 담그십시오. 다음으로, 샘플들을 절편화(24)를 위한 블록에 포함시킨다.
참고: 굳은살을 더 잘 보려면 긴 축이 수평 위치에 있는 뼈를 포함하여 세로 절단을 허용합니다. - 조직을 마이크로톰으로 4μm 두께의 절편으로 자릅니다( 재료 표 참조).
- 섹션을 56°C 수조에 띄우고 조직학적 슬라이드에 섹션을 장착합니다( 재료 표 참조).
- H&E 염색의 경우 5분 동안 3개의 순차적인 크실렌 수조에서 슬라이드를 탈파라핀화하고 5분 동안 에탄올 농도를 감소시키는 일련의 용액(95%, 80% 및 70%)으로 조직을 재수화합니다.
- 슬라이드를 수돗물로 30초 동안 헹구고 Harris hematoxylin( 재료 표 참조)으로 슬라이드를 6분 동안 염색한 다음 수돗물로 30초 더 헹굽니다.
- 슬라이드를 에탄올에 1% 염산에 30초 동안 담근 다음 70% 에탄올에 30초 동안 담그십시오.
- 에오신( 재료 표 참조)으로 2분 동안 염색하고 수돗물로 30초 동안 세척합니다.
- 슬라이드를 에탄올(70%, 80%, 95% 동안 5분)로 탈수하고 각각 5분 동안 두 개의 크실렌 욕조로 정화합니다.
- 장착을 위해 각 슬라이드에 장착 매체( 재료 표 참조)를 1-2방울 떨어뜨리고 깨끗한 커버슬립으로 슬라이드를 덮습니다.
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Representative Results
골절 수술의 성공 여부를 평가하는 가장 간단하고 즉각적인 방법은 X선 영상입니다. 방사선 사진은 수술 직후 마우스가 마취된 상태에서 수행될 수 있으며, 이후 골절 후 7일, 14일, 21일 후에 굳은살 형성 및 진행을 평가할 수 있습니다. 허용되는 골절 패턴은 피질이 완전히 파열되고, 와이어가 수관 내에 올바르게 배치되고, 골절선이 횡방향(뼈 축에 대해 90° 각도), 비스듬한 패턴(단편 변위가 없는 곡선 또는 경사 패턴) 또는 짧은 경사(뼈 축에 대해 약 30°)인 패턴입니다(그림 2A-D). 이러한 패턴은 뼈 조각이 적절하게 정렬(감소)되어 모델의 주요 목적을 달성하는 경우 모두 내연골 형성(즉, 굳은살 형성)을 통해 복구로 진행되기 때문에 허용됩니다. 따라서 허용할 수 없는 골절은 광범위한 분쇄(여러 개의 작은 뼈 조각)가 있는 골절, 잘못된 정렬로 인해 사지가 짧아진 골절, 잘못된 와이어가 있는 골절입니다(그림 3). 허용할 수 없는 골절 패턴을 가진 동물은 연구에서 제외되어야 합니다. 시간이 지남에 따라 골절 부위에 견고하고 눈에 띄는 굳은살이 관찰되어야 합니다(그림 4).
또한 골절 후 7일, 14일, 21일에 조직학적 검사를 시행하여 골절 부위 내의 조직 신생을 평가할 수 있습니다. 골수 내 와이어를 사용한 고정은 뼈 조각의 어느 정도의 움직임을 허용하기 때문에 재생 과정은 골화의 내연골 메커니즘을 따르며, 7일째에 골절선 주변에서 유리질 연골의 견고한 영역이 보입니다(그림 5A, B). 14일째에는 연골 부위 주변에서 골화 전선이 관찰되어 섬유주 뼈와 재구성된 골수로 채워진 공동을 형성합니다(그림 5C,D). 마지막으로, 21일째에 연골 부위가 섬유주 뼈로 거의 완전히 대체되어 성공적인 뼈 가교(그림 5E,F)와 골절 치유 연구에 대한 모델의 타당성을 나타냅니다.
그림 1: 마우스의 골수 내 와이어로 고정된 대퇴골 골절을 생성하는 수술 절차의 단계를 보여주는 현미경 사진. (A) 수술대에 있는 멸균 수술 기구의 구성. (B) 마취제의 복강내 주사. (C) 측면 욕창 자세에서 마우스의 위치 및 발의 고정. (D) 마우스의 드레이핑, 수술할 부위만 노출된 채로. (E) 피부 외측 슬개골 절개. (에프,지) 근막 절개 부위의 모습. (H) 대퇴 과두 부위를 노출시키는 슬개골의 내측 탈구. (I) intercondylar fossa에서 바늘의 위치. (J) 대퇴골 수질관의 천공. (K) 대퇴골 개구부를 통한 골수내 와이어의 삽입. (L) 측면 과두에서 와이어의 구부러진 말단 조정. (M) 주변 근육의 뭉툭한 끝 분리. (N) 전체 대뇌 피질 대퇴 절골술. (O) 연조직의 폐쇄. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 허용 가능한 골절 패턴의 대표적인 방사선 사진. (A,B) 횡방향 골절(골절선은 뼈 축에 대해 90° 각도를 이룹니다). (C) 짧은 경사 골절(골절선이 뼈 축에 대해 30° 미만). (D) 축소 가능한 단편 골절(뼈의 작은 조각은 거의 보이지 않지만 뼈의 해부학적 정렬은 남아 있음). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3: 잘못 배치된 전선의 대표적인 방사선 사진. (A) 이 마우스에서는 와이어가 근위 대퇴골 조각의 골수 관에 있지 않아 골절된 뼈가 잘못 고정됩니다. (B) 이 경우 와이어는 뼈 조각을 통과하지 않았으며 골절된 뼈는 완전히 정렬되지 않았습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4: 골절 부위에 보이는 굳은살. 수술 후 (A) 14일째 및 (B) 21일째의 골절 굳은살의 대표적인 방사선 사진으로, 모델의 재생 과정이 간접(연골내) 경로를 따른다는 것을 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 5: 골절 굳은살의 조직학적 분석. 수술 후 (A,B) 7일째, (C,D) 14일째, (E,F) 21일째에 H& E로 염색된 골절된 뼈의 대표 이미지. 굳은살의 진화에 주목하십시오. 굳은살은 처음에 골절선 주변의 광범위한 부위의 유리질 연골을 나타내고(A에 삽입, B에 확대), 이 영역은 섬유주 뼈 형성을 위한 템플릿 역할을 하며(C에 삽입, D에 확대), 이 과정은 연골이 뼈로 완전히 대체되어 뼈 가교(E, F)에서 확대됨). 스케일 바: (A,C,D) 500 μm; (B,D,F) 100μm입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
전 세계적으로 골절 건수가 증가함에 따라9,10,25 불유합에 대한 혁신적인 치료법이 점점 더 시급해지고 있습니다. 골절 치유는 장기간에 걸쳐 발생하는 사건들의 복잡하고 긴밀하게 조율된 총합을 포함하므로3, 유효한 동물 모델의 사용은 뼈 복구의 성공을 결정하는 메커니즘에 대한 이해를 높이고 효과적인 약물 및 치료 프로토콜을 선택하는 데 중요하다16,17.
마우스에서 대퇴골과 경골 모두 긴 골절 치유 연구에 사용할 수 있습니다. 이 모델에서는 경골 대신 대퇴골이 선택되었는데, 이는 대퇴골이 직경이 더 크고 연조직 커버리지가 더 나은 직선 뼈이기 때문입니다. 반면에, 마우스 경골의 골격은 구부러져 있고, 그 구경은 말단부를 따라 점진적으로 감소하며, 이는 골수내 고정 장치(26)의 삽입을 복잡하게 만든다. 따라서 대퇴골의 특성은 골수 내 고정이 의도된 모델에 이상적입니다. 성별과 관련하여, 수컷이 암컷에 비해 더 두드러진 연골 굳은살 형성으로 골절 치유가 더 빠르다는 증거가 있기 때문에 수컷 마우스를 사용하였다27. 그러나 필요한 경우 여성 대퇴골의 약간 더 작은 길이에 맞게 골수 내 와이어의 크기를 조정하기만 하면 이 기술을 여성에게 쉽게 적용할 수 있습니다.
단두대(28)와 함께 3점 굽힘 메커니즘을 이용한 폐쇄 골절 모델과 비교하여, 여기에 설명된 개방 수술 모델은 골절 부위를 노출시켜 연구자가 골절이 생성되는 것을 육안으로 볼 수 있기 때문에 유리하다. 이 시각화는 다음과 같은 용납할 수 없는 골절 패턴을 초래하는 기술적 오류를 방지하는 데 도움이 됩니다: 뼈의 해부학적 재정렬을 허용하지 않는 심각한 조각 변위(축소 불가능한 골절); 뼈가 여러 개의 작은 조각으로 광범위하게 조각화(분쇄), 복구 과정을 손상시킬 수 있는 상태; 및/또는 고정 장치의 잘못된 배치. 이 모델에서 골절은 부드러운 절골술에 의해 발생하기 때문에 광범위한 절편 변위 및/또는 분쇄는 일반적으로 관찰되지 않습니다.
그러나 이 기술은 다른 방법보다 더 기술적인 수술 기술과 쥐의 해부학적 구조에 대한 지식이 필요하다는 점에서 제한적입니다. 또한 마우스의 크기가 작기 때문에 쥐나 대형 동물 모델에 비해 조작이 더 까다롭습니다. 이러한 한계를 훈련으로 극복하면 허용 가능한 골절 생성의 성공률이 거의 100%에 달하여 연구에서 동물 제거 횟수를 줄일 수 있습니다.
또한, 개복 수술 골절 모델은 경피적 또는 전신 전달을 사용하여 적용할 수 없는 줄기/전구 세포, 생체 재료 및/또는 의약품과 같은 치료제의 국소 적용을 가능하게 한다26. 마지막으로, 골수내 장치를 사용한 고정은 플레이트 및 외부 장치보다 더 쉽고, 저렴하며, 더 맞춤화할 수 있으며, 긴 골절 치료에 가장 일반적으로 사용되는 임상 전략을 모방한다29. 따라서 여기에 설명된 모델은 기본 및 중개 환경 모두에서 골절 치유를 연구하기 위한 저비용 모델을 나타내며, 이는 이 연구가 골절 치유 생물학에 대한 지식 증가뿐만 아니라 뼈 복구를 위한 새로운 치료 전략 개발에 기여한다는 것을 의미합니다.
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Disclosures
저자는 상충되는 재정적 이해관계가 없습니다.
Acknowledgments
이 연구는 카를로스 샤가스 필류 리우데자네이루 연구 지원 재단(FAPERJ)의 지원을 받았습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alcohol 70º | Merck | 109-56-8 | Or any general available supplier |
| Canada balsam (mounting medium) | Merck | C1795 | Or any general available supplier |
| Cefazoline | ABL | Not applicable | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Coverslip | Merck | CSL284525 | Or any general available supplier |
| Dental X-Ray Generator | Focus | - | Sold by Instrumentarium Dental Inc. |
| DEPC water | Merck | W4502 | Or any general available supplier |
| Dissecting Scissor | ABC Instrumentos | 0327 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| EDTA | Vetec | 60REAVET014340 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Eosin solution | Laborclin | EA-65 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Ethanol P.A | Vetec | 60REAVET012053 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Gauze pads | Cremer | Not applicable | Or any general available supplier |
| Harris Hematoxylin Solution | Laborclin | 620503 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Heating pad | Tonkey Electrical Technology | E114273 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Histological slides | Merck | CSL294875X25 | Or any general available supplier |
| Histology cassettes | Merck | H0542-1CS | Or any general available supplier |
| Hydrochloric acid - 37% | Merck | 258148 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Insulin syringe | BD | 324918 | Or any general available supplier |
| Iodopovidone sponge | Rioquímica | 372106 | Or any general available supplier |
| Ketamine hydrochloride | Ceva | Not applicable | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Lacribel collyrium | Cristalia | Not applicable | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Microtome | Leica | 149AUTO00C1 | |
| Mouse Tooth Forceps Tweezer | ABC Instrumentos | 0164 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Needle 26 G | BD | 2239 | Or any general available supplier |
| Needle Holder | Golgran | 135-18 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Nonresorbable Nylon Suture thread nº 6 | Atramat | C1546-NT | Or any general available supplier |
| Paraffin | Exodo | 8002 - 74 - 2 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Paraformaldehyde | Sigma | 30525-89-4 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| PBS 1x | Lonza | BE17-516F | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Resorbable Nylon Suture thread nº 6 | Atramat | C1596-45B | Or any general available supplier |
| Rod Wire SS CrNi 0.016" | Orthometric | 56.50.2016 | |
| Scalpel nº 11 | Descarpak | 15782 | Or any general available supplier |
| Serrated Tip Tweezer | Quinelato | QC.404.12 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Shaver | Phillips | Not applicable | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Surgical tape | 3M | 2734 | Or any general available supplier |
| Surgical tnt field | Polarfix | 6153 | Or any general available supplier |
| Tramadol hydrochloride | Teuto | Not applicable | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Water bath for histology | Leica | HI1210 | |
| Xylazine hydrochloride | Ceva | Not applicable | Similar brands of the item may be used according to local availability |
| Xylene | Dinamica | 60READIN001105 | Similar brands of the item may be used according to local availability |
References
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