우리는 신생아 chimeras의 생성뿐만 아니라 2 광자 현미경으로 해부하고 예 생체내 이미징에 대한 thymus의 준비를위한 단계별 지침을 제시한다.
Abstract
두 광자 현미경 (TPM)는 thymus에 깊은 이미지를 우리를있게하고 thymocyte 발전을위한 중요한 이벤트를 문서. thymocytes의 군중에서 개인의 마이 그 레이션을 수행하기 위해, 우리는 thymocytes 미만 1퍼센트가 ubiquitously 표현 형광 단백질에 대한 유전자 변형되는 기증자에서 파생됩니다 신생아 chimeras를 생성합니다. 이러한 부분 hematopoetic chimeras를 생성하려면, 신생아받는 사람은 나이 3-7일 사이에 골수로 주입됩니다. 4~6주 후, 마우스가 희생되고 thymus은 신중하게 해부하고 몇 군데 될 조직의 구조를 보존 bissected. thymus는 TPM의 예 생체내 이미징에 대비하여 coverslip에 붙어있다. 이미징 동안 thymus는 95 % 산소와 5 % 이산화탄소로 perfused 37을 따뜻하게합니다 페놀 레드 ° C.없는 DMEM에 저장됩니다 이 방법을 사용, 우리는 다양한 T 세포 레퍼토리의 생성에 필요한 이벤트를 공부할 수 있습니다.
Protocol
입양 전송 골수 50 – 100ul가 1시 1분의 최종 기증자 대 호스트 비율과 함께, 생명의 첫 3-7일 동안 인슐린 주사기에게 2-4 번 사용하는 neonates을 주사. 흉골과 흉곽 아래에 주사 사이트에 대한하지만 창자와 위 이상을 목표로하고 있습니다. 멀리 충분하지 소중히 다이어프램를 신중 복막을 침투 바늘을 삽입합니다. 골수의 일부가 주사하는 동안 손실되는 것이 일반적입니다. 당신은 피부가 서서히 ?…
Discussion
thymus에서 두 광자 이미징 살고, 손상 기관 상호 작용과 thymus 내에 선택 이벤트를 기초로 마이 그 레이션 검사 우리에게 있습니다.