クリーンルーム環境と細胞療法のための微生物制御およびモニタリング戦略
Summary
このプロトコルは、クリーンルーム環境で微生物のバイオバーデンを最小限に抑えるためのベストプラクティスを要約し、環境モニタリング、プロセスモニタリング、製品無菌試験などの戦略が含まれています。これは、現在の適正組織慣行基準および現在の適正製造基準を満たす必要がある製造および試験施設に関連しています。
Abstract
堅牢なガウン、クリーニング、環境モニタリング、および人員モニタリング対策を組み込んだ十分に検証された全体的なプログラムは、細胞療法製造スイートおよび対応する試験所の微生物バイオバーデンを最小限に抑えて、施設が管理状態で稼働していることを確認するために重要です。無菌試験などの品質管理手段 による 製品の安全性の確保は、最小限の操作(セクション361)と最小限の操作(セクション351)の両方のヒト細胞、組織、および細胞および組織ベースの製品(HCT / Ps)の規制要件です。このビデオでは、米国薬局方(USP)および国立衛生研究所(NIH)の代替無菌試験方法が提供する、ガウン、洗浄、材料のステージング、環境モニタリング、プロセスモニタリング、直接接種を使用した製品無菌試験など、クリーンルーム環境で操作するための最良の無菌プラクティスを開発および組み込む方法についての段階的なガイドを提供します。このプロトコルは、現在の適正組織基準(cGTP)および現在の適正製造基準(cGMP)を満たすことが期待される施設向けのリファレンスガイドとして意図されています。
Introduction
環境モニタリング(EM)、プロセスモニタリング、および製品無菌試験を通じて強力な微生物モニタリングプログラムを実施することは、細胞療法ラボにおける現在の適正組織慣行(cGTP)および現在の適正製造基準(cGMP)の規制要件です1。さらに、米国食品医薬品局(FDA)は、製品の品質管理(QC)テストを実施する研究所も、無菌充填作業に使用されるものに匹敵する施設と管理を採用する必要があることを期待しています2。
このプロトコルには4つの主要なセクションがあります:1)人員のガウン、クリーニング、および材料のステージングを含む無菌慣行。2)生存可能な空気および表面培養および非生存粒子空気モニタリングを含むEM。3)セトリングプレートや手袋をはめた指先のサンプリングを含むプロセスモニタリング。4)公定書米国薬局方(USP)方法3またはNIH代替無菌試験方法4による製品無菌試験。これらの対策を一緒に使用すると、施設を管理状態に保つための効果的な方法になります。
ここで説明する手法は目新しいものではありません。しかし、規制当局や専門機関からの現在の基準には詳細が欠けているため、特に現場での製造と製品の無菌性試験が急速に出現している学術センターでは、微生物モニタリングや標準化されていない慣行の実施が行われていません1,5,6。.このプロトコルは、エンドユーザーの検証およびリスク評価と組み合わせて使用 すると、規制要件を満たす微生物モニタリングおよび制御プログラムを作成するためのガイドとして使用できます。
Protocol
1.無菌の慣行 クリーンルームスペースの人員ガウン注:この手順は、未分類のスペースでの最初のガウン、その後の国際標準化機構(ISO)8エリア、次にISO7エリアへの入場に基づいています。この手順は、既存のスペースをクリーンルーム機能に変換しようとするラボに関連しています。理想的には、すべての初期ガウンはISO8分類スペースで行われます(未分類スペースで?…
Representative Results
期待される結果を 表1に示します。EMデータを確認し、適切な調査を行い、アクション、アラート、またはISO制限の逸脱に対応する必要があります。生存不可能な粒子の逸脱が発生した場合は、ISO 14644-Annex A、sec A.5.57に従って進める必要があります。エクスカーションがすぐに識別可能な異常発生に起因する可能性がある場合は、元のサンプリング結果を文書化?…
Discussion
このプロトコルには、クリーンルームやBSC内の無菌技術や一方向の気流の維持など、いくつかの重要な領域があります。 ベストプラクティスには、乱気流を最小限に抑えるためにゆっくりと慎重に移動することが含まれます。無菌操作は、上からではなく、製品の側面から実行する必要があります。クローズドシステム処理と最終滅菌原料の使用が推奨されます。重要な場所で話したり、壁…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、国立衛生研究所臨床センターの学内研究プログラムによってサポートされました。内容は著者の責任であり、国立衛生研究所の公式見解を表すものではありません。
Materials
| 20-25°C Incubator | Lab preference | ||
| 30-35°C Incubator | Lab preference | ||
| Alcohol-based hand sanitizer | Lab preference | ||
| BacT/ALERT Dual-T instrument | BioMerieux Industry | ||
| Beard cover | Lab preference | ||
| Biosafety cabinet (BSC) | Lab preference | ||
| Cleanroom shoes | Lab preference | ||
| Fluidthioglycollate medium (FTM) | Hardy Diagnostics | U84 | USP |
| Handheld cleaning mop | Contec | 2665LF | |
| Hypodermic needle | Lab preference | ||
| iFA+ BacT/ALERT bottle | Biomerieux | 412990 | |
| iFN+ BacT/ALERT bottle | Biomerieux | 412991 | |
| Isokinetic head | Lab preference | ||
| Laser particle counter | TSI Incorporated | 9500-01 | |
| LpH III | Steris | 1S16CX | |
| Mirror | Lab preference | ||
| Non-sterile bouffant | Lab preference | ||
| Non-sterile gloves | Lab preference | ||
| Non-sterile shoe covers | Lab preference | ||
| Non-sterile sleeve covers | Lab preference | ||
| Parafilm | Lab preference | ||
| Peridox RTU | Contec | CR85335IR | |
| Plastic bag | Lab preference | ||
| Sabouraud Dextrose Agar with Lecithinase and Tween (SABLT) | Hardy Diagnostics | P595 | USP, irradiated |
| Sabouraurd Dextrose Agar (SAB) | Hardy Diagnostics | W565 | USP, irradiated |
| Safety glasses | Lab preference | ||
| Scrubs (top and bottom) | Lab preference | ||
| Spor-Klenx RTU | Steris | 6525M2 | |
| Sterile 70% isopropyl alcohol (IPA) | Decon CiDehol | 8316 | |
| Sterile alcohol wipe | Lab preference | ||
| Sterile boot covers | Kimberly Clark | Cat# varies based on size | |
| Sterile coveralls | Kimberly Clark | Cat# varies based on size | |
| Sterile face mask | Lab preference | ||
| Sterile gloves | Lab preference | ||
| Sterile hood | Kimberly Clark | Cat# varies based on size | |
| Sterile low-lint wipes | Texwipe | TX3210 | |
| Sterile mop cleaning pads | Contec | MEQT0002SZ | |
| Sterile sleeve covers | Kimberly Clark | 36077 | |
| Sterile spreading rod | Fisher Scientific | 14665231 | |
| Sterile syringe | Lab preference | ||
| Tacky mats | Lab preference | ||
| Tryptic Soy Agar (TSA) | Hardy Diagnostics | W570R | USP, irradiated |
| Tryptic Soy Agar with Lecithinase and Tween (TSALT) | Hardy Diagnostics | P520R | USP, irradiated |
| Tryptic Soy Broth (TSB) | Hardy Diagnostics | U46 | USP |
| Tubing | Lab preference | ||
| Vesphene III | Steris | 1S15CX | |
| Viable air sampler | Hardy Diagnostics | BAS22K | |
| Vortex | Lab preference |
References
- Cundell, T., Atkins, J. W., Lau, A. F. Sterility testing for hematopoietic stem cells. Journal of Clinical Microbiology. , (2023).
- United States Food and Drug Administration. Guidance for Industry. Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing – Current Good Manufacturing Practice. United States Food and Drug Administration. , (2004).
- United States Pharmacopeia – National Formulary. USP<71> Sterility Tests in USP43-NF38. United States Pharmacopeia – National Formulary. , (2022).
- England, M. R., Stock, F., Gebo, J. E. T., Frank, K. M., Lau, A. F. Comprehensive evaluation of compendial USP<71>, BacT/Alert Dual-T, and Bactec FX for detection of product sterility testing contaminants. Journal of Clinical Microbiology. 57 (2), 01548 (2019).
- Gebo, J. E. T., East, A. D., Lau, A. F. A side-by-side comparison of clinical versus current good manufacturing practices (cGMP) microbiology laboratory requirements for sterility testing of cellular and gene therapy products. Clinical Microbiology Newsletter. 43 (21), 181-191 (2021).
- Gebo, J. E. T., Lau, A. F. Sterility testing for cellular therapies: What is the role of the clinical microbiology laboratory. Journal of Clinical Microbiology. 58 (7), 01492 (2020).
- International Organization for Standardization. ISO 14644-1:2015 Cleanrooms and associated controlled environments – Part 1: Classification of air cleanliness by particle concentration. International Organization for Standardization. , (2015).
- Parenteral Drug Association. PDA Technical Report No. 13 Revised 2022 (TR 13) Fundamentals of an Environmental Monitoring Program. Parenteral Drug Association, Inc. , (2022).
- United States Pharmacopeia – National Formulary. USP<1116> Microbiological Evaluation of Cleanrooms and Other Controlled Environments in USP43-NF38 2S. United States Pharmacopeia – National Formulary. , (2020).
- Guinet, R., et al. Multicenter study on incubation conditions for environmental monitoring and aseptic process simulation. PDA journal of pharmaceutical science and technology. 71 (1), 43-49 (2017).
- Gordon, O., Berchtold, M., Staerk, A., Roesti, D. Comparison of different incubation conditions for microbiological environmental monitoring. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology. 68 (5), 394-406 (2014).
- Anders, H. J., et al. Multisite qualification of an automated incubator and colony counter for environmental and bioburden applications in pharmaceutical microbiology. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology. , (2022).
- United States Pharmacopeia – National Formulary. USP<1072> Disinfectants and Antiseptics. United States Pharmacopeia – National Formulary. , (2020).
- United States Pharmacopeia – National Formulary. USP<1071> Rapid Microbial Tests for Release of Sterile Short-Life Products: A Risk-Based Approach in USP43-NF38 2S. United States Pharmacopeia – National Formulary. , (2020).
- United States Pharmacopeia – National Formulary. PUSP<1223> Validation of Alternative Microbiological Methods in USP43-NF38 2S. United States Pharmacopeia – National Formulary. , (2020).
- Parenteral Drug Association. PDA Technical Report No. 33, Revised 2013 (TR 33) Evaluation, Validation and Implementation of Alternative and Rapid Microbiological Methods. Parenteral Drug Association, Inc. , (2013).
- Putnam, N. E., Lau, A. F. Comprehensive study identifies a sensitive, low-risk, closed-system model for detection of fungal contaminants in cell and gene therapy products. Journal of Clinical Microbiology. 59 (11), 0135721 (2021).
- Pharmaceutical Inspection Convention & Pharmaceutical Inspection Co-operation. Guide to Good Manufacturing Practice for Medicinal Products Annexes (PE 009-16 (Annexes)). Pharmaceutical Inspection Convention & Pharmaceutical Inspection Co-operation Scheme. , (2022).
- United States Pharmacopeia – National Formulary. USP<825> Radiopharmaceuticals – Preparation, Compounding, Dispensing, and Repackaging in USP43-NF38 2S. United States Pharmacopeia – National Formulary. , (2020).
Tags
Keywords:
Microbial ControlMicrobial MonitoringCleanroom EnvironmentsCellular TherapiesClinical MicrobiologySterility TestingCGMPCulture-based MethodsRegulatory RequirementsRisk-based ApproachEnd-user ValidationGowningCleaningEnvironmental MonitoringPersonnel MonitoringMicrobial BioburdenQuality ControlSterility TestingAseptic PracticesUSP <71>CBER
Cite This Article
East, A. D., Gebo, J. E. T., Lau, A. F. Microbial Control and Monitoring Strategies for Cleanroom Environments and Cellular Therapies. J. Vis. Exp. (193), e65209, doi:10.3791/65209 (2023).