نقدم خطوة بخطوة تعليمات لتوليد الوهم حديثي الولادة ، فضلا عن تشريح وإعداد الغدة الصعترية لخارج الجسم بواسطة التصوير 2 – فوتون الميكروسكوب.
Abstract
الميكروسكوب ثنائي الفوتون (TPM) يتيح لنا صورة عميقة في الغدة الصعترية وتوثيق الأحداث التي تعتبر مهمة لتطوير خلية توتية. لمتابعة هجرة الأفراد في حشد من thymocytes ، فإننا توليد الوهم حديثي الولادة حيث يتم استخلاص أقل من واحد في المئة من thymocytes من الجهات المانحة التي تم المعدلة وراثيا لبروتين فلوري أعرب بتواجد مطلق. لإنشاء هذه الجزئية hematopoetic الوهم ، يتم حقن الأطفال حديثي الولادة مع متلقي نخاع العظم بين 3-7 أيام من العمر. بعد 4-6 أسابيع ، يتم التضحية الماوس ويتم تشريح بعناية التوتة bissected والحفاظ على بنية النسيج التي سيتم تصويرها. يتم لصقها الغدة الصعترية في الصعود إلى ساترة استعدادا للخارج الجسم بواسطة التصوير TPM. أثناء التصوير يتم الاحتفاظ بها في الغدة الصعترية DMEM دون الحمراء الفينول التي perfused مع الأكسجين 95 ٪ و 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون ودرجة حرارة إلى 37 درجة مئوية. باستخدام هذا النهج ، يمكننا دراسة الأحداث اللازمة لجيل من ذخيرة متنوعة الخلايا التائية.
Protocol
نقل بالتبني حقن الولدان مع 50 100ul من نخاع العظام باستخدام حقنة الانسولين 2-4 مرات خلال الأيام 3-7 الأولى من الحياة ، مع نسبة المانحة إلى المضيف النهائي 1:1. تهدف لموقع الحقن تحت القص والقفص الصدري ، ولكن قبل الأمعاء والمعدة. ادخال الإبرة بعيدا بما ف?…
Discussion
التصوير ثنائي الفوتون في الغدة الصعترية تمكننا من النظر في الهيئات ، الذين يعيشون على حالها والتفاعلات والأحداث التي تكمن وراء الهجرات الاختيار داخل الغدة الصعترية.