Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Tuina manipulation for at reducere betændelse og brusk tab i knæ slidgigt rotter

Published: June 30, 2023 doi: 10.3791/65451
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1
1Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
* These authors contributed equally

Summary

Vi præsenterer en protokol for Tuina-manipulation udført på gips-immobiliserede-inducerede knæartroserotter. Baseret på de foreløbige resultater foreslog det, at metodens effektivitet var afhængig af reduktion af inflammation og brusktab.

Abstract

Kliniske forsøg tyder på, at Tuina manipulation er effektiv til behandling af knæ slidgigt (KOA), mens yderligere undersøgelser er nødvendige for at opdage dens mekanisme. Derfor er manipulation af dyremodeller af knæartrose kritisk. Denne protokol giver en standardproces for Tuina-manipulation på KOA-rotter og en foreløbig udforskning af Tuina-mekanismen for KOA. Presse- og æltemanipulationsmetoden (en slags Tuina-manipulation, der refererer til presning og æltning af det specifikke område af kropsoverfladen) påføres på 5 akupunkter omkring knæleddet hos rotter. Manipulationens kraft og frekvens blev standardiseret ved fingertrykoptagelser, og rottens position under manipulation er beskrevet detaljeret i protokollen. Effekten af manipulation kan måles ved smerteadfærdstest og mikroskopiske fund i synovial og brusk. KOA rotter viste signifikant forbedring i smerteadfærd. Den inflammatoriske infiltration af synovialvæv blev reduceret i Tuina-gruppen, og ekspressionen af tumornekrosefaktor (TNF)-α var signifikant lavere. Sammenlignet med kontrolgruppen var chondrocytapoptose mindre i Tuina-gruppen. Denne undersøgelse giver en standardiseret protokol for Tuina-manipulation på KOA-rotter og foreløbigt bevis for, at de terapeutiske virkninger af Tuina kan være relateret til reduktion af synovial inflammation og forsinket chondrocytapoptose.

Introduction

Knæartrose (KOA) er en degenerativ sygdom, der hovedsageligt manifesteres i ledsmerter. Fibrose, revner, sårdannelse og tab af ledbrusk er hovedårsagerne til denne sygdom1. KOA har en høj prævalens og kan resultere i en dybtgående indvirkning på patienternes dagligdag og forårsage handicap i alvorlige tilfælde. Blandt personer i alderen 45-84 år stiger forekomsten af KOA med alderen, og forekomsten blandt personer i alderen 85 år og derover er 15%, med en overvægt hos kvinder 2,3. Derudover kan KOA medføre en alvorlig økonomisk byrde for både den enkelte og samfundet. En undersøgelse viste, at direkte sundhedsomkostninger på KOA pr. Indbygger nåede op til $ 8.858 ± $ 5.120 om året4. Med samfundets aldring er KOA blevet et verdensomspændende sundhedsproblem og et stort socialt problem samt et aktuelt emne for videnskabelig forskning.

Evidensbaserede undersøgelser har vist effektiviteten af Tuina-manipulation til behandling af KOA5. Tuina manipulation kunne lindre smerter og forbedre dysfunktion hos KOA-patienter, hvis mekanisme er relateret til antiinflammatoriske virkninger 6,7. Forskere fandt, at Tuina-manipulation effektivt hæmmede ekspressionen af inflammatoriske faktorer interleukin (IL)-β og 5-hydroxytryptamin og bremsede degenerationen af ledbrusk i en kanin KOA model8. Det foreslog, at Tuina kunne fremme blodcirkulationen og stofskiftet på læsionsstedet, hvilket hjalp med at fjerne inflammatoriske faktorer som IL-1, IL-6 og tumornekrosefaktor (TNF)-α og derved lindre de kliniske symptomer på KOA9. Derudover kan den passive bevægelse af leddet gennem Tuina-manipulation fremme penetration og diffusion af synovialvæske i ledbrusk og forbedrer vævets næringsstofmetabolisme10. Andre undersøgelser antydede, at Tuina-manipulation effektivt kan forbedre de biomekaniske indekser hos KOA-patienter11. Manipulationer anvendt på blødt væv kan forbedre stressfordelingen over lemmer og forbedre balancefunktionen12,13. På samme tid, med nogle fælles justeringsmanipulationer, kan justeringen af underekstremiteterne også justeres for at korrigere unormale gangarter14,15.

Virkningsmekanismen for Tuina-manipulation ved behandling af KOA skal stadig undersøges, og derfor er en eksperimentel undersøgelse nødvendig. Nøglen til anvendelsen af Tuina i forsøgsdyr er standardisering af modellering, dyrefiksering og interventionsmetoder16. Modelleringsmetoden bestemmer, om forsøgsdyret kan udvise sygdommens egenskaber. I mellemtiden kan passende fikseringsmetoder lette interventionen af Tuina-manipulationen og bedre afspejle effekten af Tuina. Standardiseringen af interventionsmetoder er den sværeste del af Tuina-manipulation. I 2010 nævnte det grundlæggende system af kinesiske akupunkturstandarder akupunkturpunktstandarderne for forsøgsdyr, hvilket gav mulighed for akupunktur- og Tuina-operationer i dyreforsøg17. Der er dog stadig vanskeligheder med at standardisere Tuina-manipulation. Der er flere typer Tuina-manipulation18. Valget af den specifikke manipulation afhænger hovedsageligt af den sygdom, der skal behandles, og de terapeutiske teorier, som udøveren foretrækker. I undersøgelsen af Tuina for KOA er der blevet lagt mere vægt på punktpressende manipulation (tryk på de specifikke akupunkter med tommelfingeren eller albuen), Yizhichan-skubbemanipulation (en skubbemanipulation ved at vrikke tommelfingeren) og tryk- og æltningsmanipulation (som refererer til at trykke og ælte det specifikke område af kropsoverfladen med finger eller håndflade)19. Presse- og æltningsmanipulation er en af de mest anvendte Tuina-manipulationer, der kombinerer presning og æltning for at bevæge det subkutane væv20. Tryk og æltning manipulation anvendt på akupunkter kan fremme blodcirkulationen og lindre smerter og repræsenterer den terapeutiske virkning af Tuina på KOA19.

I denne protokol vil virkningen af presse- og æltemanipulation på KOA-rotter blive beskrevet detaljeret, herunder udvalgte akupunkter, intensitet og hyppighed af manipulationen og rottens kropsposition, således at der kan gives reference for fremtidig forskning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Denne undersøgelse har bestået dyreetisk gennemgang foretaget af den eksperimentelle dyreetiske komité på Yueyang Hospital for integreret traditionel kinesisk og vestlig medicin tilknyttet Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (YYLAC-2022-166).

1. Tilberedning og gruppering af forsøgsdyr

  1. Forberedelse af dyr
    1. Bageste i alt 10 sunde SPF SD hunrotter på 200-220 g ved stuetemperatur (18-21 °C), fugtighed 40% -50%, 12 timer: 12 timers døgnrytmeskift. Udføre smerterelaterede dyreforsøg i nøje overensstemmelse med de relevante bestemmelser i dyreetiske retningslinjer og retningslinjer.
  2. Gruppering af dyr
    1. Opdel rotterne tilfældigt i Tuina-gruppen og kontrolgruppen. Behandl rotter fra Tuina-gruppen med presse- og æltemanipulation i 21 dage efter modellering. Sæt rotter fra kontrolgruppen i samme Tuina-rum og læg dem i en sort kludpose samtidigt, mens Tuina-gruppen er under behandling.

2. Modellering af dyr

  1. Bedøvelse af dyret
    1. Brug isofluran til gasbedøvelse. Placer rotten i induktionsboksen med en induktionskoncentration på 3%. Wobble kassen efter at have lagt rotten ned og bekræft bedøvelsen, når rotten vælter uden forsøg på at vende tilbage til den udsatte position.
    2. Fjern rotten fra induktionsboksen og fastgør næsen i bedøvelsesmasken. Isoflurankoncentrationen justeres til 2% for at opretholde anæstesi. Bekræft bedøvelsen, når rotten ikke reagerer, når den klemmer poterne. Påfør øjensalve på rotterne for at forhindre tørhed, når rotter bedøves, da øjenlågene ikke kan lukkes.
  2. Modelleringsmetode21
    1. Brug barbermaskine til at fjerne håret på højre bagben. Placer en medicinsk bomuldspude mellem rottens højre ankel og hofteled. Fastgør højre knæled ved 180° forlængelse med 5-6 lag våd gipsbandage jævnt. Spiralindpak gipsforbindelsen startende fra anklen og dækker 1/3 af den forrige. Brug en hårtørrer til at tørre og hærde gipset.
    2. Udvendigt pak gipset med protesebasismateriale, efter at gipsforbindelsen tørrer og hærder for at fastgøre gipset og forhindre det i at gnave.
    3. Bland protesebasismaterialerne for at gøre det klæbrigt og klæbe blandingen til ydersiden af gipset (blandingen må ikke overstige kanten af bandagen, figur 1). Når blandingen bliver hård, skal du slukke for anæstesimaskinen og vente på, at dyret vågner op naturligt. Overvåg rotterne for at forhindre anæstesiulykker, før rotterne vågner op.
    4. Fastgør gipset passende på rottens højre bagben, da en stram fiksering begrænser blodcirkulationen, mens en løs fiksering har tendens til at falde af. Overhold blodcirkulationen i terminalbenet. Hvis der opdages hævelse af terminalekstremiteten eller en lilla hudfarve, skal du straks afskære en del af gipset for at hjælpe med at genoprette cirkulationen. Genindfør gipset, hvis det er brudt og ikke opretholder underekstremitetsforlængelsen.
    5. Fjern gipset efter 3 ugers kontinuerlig immobilisering. Brug kirurgisk saks til at afskære protesebasismaterialet udenfor og gipsbandage. Skyl rottens underekstremitet med saltvand og tør det med gasbind. Hvis der er lokale hudlæsioner, steriliseres med iodophor.
  3. Verifikationaf model 22
    1. Røntgenbaseret verifikation
      1. Udfør en røntgenundersøgelse af højre knæ 1 dag efter afslutningen af modelleringen. Tag anteroposterior røntgenbilleder i liggende stilling med hoftebøjning ved 30 °, knæforlængelse ved 0 ° og hofteabduktion ved 15 °. Hold knæskallen direkte foran knæet og sæt radiatorrøret 110 mm fra knæleddet.
      2. Tag laterale røntgenbilleder i højre laterale decubitusposition med højre hoftefleksion ved 30° og højre knæforlængelse ved 0°. Lav venstre bens hoftefleksion ved 70° og knæbøjning ved 45°, og sæt radiatorrøret 110 mm væk fra knæleddet. Indstil detektionsparametrene som eksponeringsspænding 50 kV, strøm 250 mA, eksponeringsdosis 32 mAs og eksponeringstid 128 ms.
      3. Sammenlign med normale rotters røntgen, kontroller, at den modellerede knærøntgen viser smallere ledrum med osteofythyperplasi ved kanten.
    2. Osteoarthritis Research Society International (OARSI) scorer23
      1. Placer rotten i eutanasikassen og perfus CO2 med en hastighed på 30% -70% burvolumen pr. Minut. Stop perfusering af CO2 efter detektering af, at rotten er immobil, ikke trækker vejret, og at pupillen er udvidet. Overhold i yderligere 2 minutter for at bekræfte døden.
        BEMÆRK: Cervikal dislokation kan udføres efter CO2-baseret eutanasi som en sekundær form for at bekræfte døden. Fastgør rotten på bordet og tag fat i halen med den ene hånd. Tryk ned på rottens hoved med tommel- og pegefinger på den anden hånd. Bekræft døden, når du hører lyden af en revne, og rotten mister bevægelse og hjerteslag på samme tid.
      2. Fastgør rotten i liggende stilling med en sprøjtenål på et skumbræt med højre bagben bøjet i bortførelse og ekstern rotation. Klem huden op omkring knæleddet med kirurgisk saks. Udsæt musklerne omkring knæleddet ved at skære huden og derefter skære den subkutane fascia.
      3. Skær lårbenet og tibia diafysen af med en knoglesaks og fjern højre knæled. Fjern forsigtigt det ekstra bløde væv, såsom muskler og ledbånd, uden for leddet.
      4. Fastgør leddet i 4% paraformaldehyd i 24-48 timer ved 4 °C. Afkalk leddet i 10% myresyreopløsning i 3 dage, indtil knoglevævet let kan stikkes med en nål.
      5. Placer og trim det afkalkede væv i stinkhætten, og overfør det til en dehydreringsboks i dehydreringsmaskinen. Tilsæt 75% ethanol i 4 timer, derefter 90% ethanol i 2 timer, efterfulgt af 95% ethanol i 1 time, absolut ethanol i 30 minutter, en anden runde frisk absolut ethanol i 30 minutter, alkoholbenzen i 5-10 minutter, xylen i 5-10 minutter, en anden runde frisk xylen i 5-10 minutter, voks i 1 time, en anden runde frisk voks i 1 time, og sidste runde frisk voks i 1 time til dehydrering og gennemsigtig voksnedsænkning.
      6. Placer derefter vævet i maskinen til indlejring. Skær voksblokken i voksskiver på 4 μm, efter at paraffinen har stivnet sig, og flad skiven i varmt vand. Placer skiven på et glasglas og tør. Opbevar det ved stuetemperatur.
      7. Overhold bruskprøven og bedøm den i henhold til OA-bruskhistopatologisk gradvurdering (tabel 1)23. Hvis scoren for rotter efter modellering er signifikant højere end for de normale rotter, var modellering vellykket.

Tabel 1. Vurdering af OA-bruskhistopatologisk kvalitet. Grad er dybdeprogression i brusk. Samlet score = Karakter x Iscenesættelse. 0 for normale led, 24 for svær arthritis. Klik her for at downloade denne tabel.

Figure 1
Figur 1. Rotter immobiliseret i gips. Efter at rotterne blev bedøvet, blev deres højre underben pakket med gipsbandager, fastgjort i hyperudvidet position og dækket af et lag protesebasismaterialer udenfor. Klik her for at se en større version af denne figur.

3. Tuina manipulation

  1. Anvendelsesområde
    1. Vælg i alt 5 akupunkter på højre bagben af rotter, herunder ST34, ST35, SP10, EX-LE4 og BL40 (figur 2). Find akupunkterne i henhold til principperne for akupunktpositionering i 24.
  2. Stilling til ansøgning
    1. Skær en sort klud i en pose på 9 cm x 15 cm med en sideåbning og stram åbningen med et reb. Før Tuina-manipulationen skal du forsigtigt trække rottens hale for at få den til at grave sig ned i posen og udsætte bagbenene uden for posen.
    2. Brug den ene hånd til at holde rotten i den udsatte position, hold halen og bagbenet, mens den anden hånd anvender tryk- og æltemanipulation på et specifikt akupunkt (figur 3).
  3. Tuina manipulation
    1. Betjen tryk og æltning manipulation på de 5 akupunkter på højre bagben i 2 min hver. Placer kunstnerens tommelfinger på det valgte akupunkturpunkt for at udføre rytmisk tryk og æltning, køre huden og subkutant væv sammen i en cirkulær bevægelse.
    2. Brug fingertrykoptagelser (enheder i Newton) for at sikre ensartet intensitet og hyppighed af manipulationen. Hold intensiteten mellem 3-5 N og frekvensen ved 2 Hz (figur 4). Anvend manipulationen en gang dagligt i 21 dage.

Figure 2
Figur 2. Acupoints position. SP10 er placeret 5 mm over det indre knæled hos rotter. ST34 er placeret 5 mm over det ydre knæled hos rotter. EX-LE4 er placeret i den mediale side af knæbåndet hos rotter. ST35 er placeret i den laterale side af knæbåndet hos rotter. BL40 er placeret i midtpunktet af den tværgående popliteale stribe. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 3
Figur 3. Tuina manipulation anvendt på rotter. Rotterne blev holdt i en sort pose med deres bagben blottet. Udøveren holdt rottens hale med venstre hånd, mens højre hånd udførte manipulationen. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 4
Figur 4. Optagelser af fingertryk. En enhed, der registrerer kraften og frekvensen af fingertrykket, bruges til realtidsfeedback om intensiteten og frekvensen i processen med Tuina-manipulation. A) Trykføler og transmissionsudstyr. (B) Optagelser af fingertryk. (C) Den kraft, der er registreret under Tuina-manipulation. Klik her for at se en større version af denne figur.

4. Test af smerteadfærd

  1. Test smerteadfærd før og efter modellering og 1 dag efter (D1), 7 dage efter (D7), 14 dage efter (D14) og 21 dage efter (D21) Tuina-manipulationen, herunder mekanisk tilbagetrækningstærskel og poteudtagningslatenstest.
  2. Tærskelværdi for mekanisk tilbagetrækning (MWT)
    1. Placer rotterne i en 20 cm x 10 cm x 20 cm gennemsigtig hærdet glaskabine placeret på en 40 cm høj scene, der består af et trådgitter med en størrelse på 10 mm x 10 mm blænde. Hold rumtemperaturen på 23 °C ± 2 °C.
    2. Sæt rotterne i adfærdslaboratoriet i mindst 2 timer om dagen i adfærdstestfasen for at undgå interferens med testresultaterne på grund af dyrenes manglende tilpasning til miljøet i begyndelsen af den formelle test. Placer rotterne i adfærdslaboratoriet i 30 minutter før starten af den formelle test for at lette deres tilpasning til miljøet og for at reducere distraherende faktorer.
    3. Brug elektroniske Von Frey-fibre til at måle MWT. Stimuler rotten med fiberen i midten af foden og træk fiberen tilbage, når rotten viser tydelige bevægelser som at hæve benet og undgå. Maskinen kan automatisk registrere den maksimale trykværdi (N) i dette øjeblik.
    4. Start den næste stimulering i samme rotte mindst 15 s efter den aktuelle stimulering. Overskrid ikke 5 s under hver stimulering for at forhindre sensibilisering over for taktile stimuli i rotternes poter. Testen gentages 5x, indtil forskellen mellem de tre på hinanden følgende målinger er ubetydelig (inden for 10 N).
    5. Slet værdierne med store forskelle (maksimum- og minimumsværdierne), og tag gennemsnittet af de resterende tre værdier som den mekaniske tilbagetrækningstærskel.
  3. Pote tilbagetrækning latens (PWL)
    1. Placer rotterne i et lille rum af gennemsigtigt hærdet glas med en størrelse på 20 cm x 10 cm x 20 cm. Dæk toppen af rummet med et gennemsigtigt glasdæksel med ventilationshuller. Hold temperaturen på den gennemsigtige glasplade ved 28-30 °C, hvorpå rummet er placeret.
    2. Sæt rotterne i dette miljø i mindst 30 minutter for at akklimatisere sig inden starten af hver formel test. Hvis rotter urinerer eller afføring i rummet, skal du rengøre det med absorberende papir i tide for at undgå at påvirke den efterfølgende lysstrålingsvarmeoverførsel.
    3. Fokuser spotlightet på midten af rottens fod, og tryk på Start-knappen . Tryk på Stop-knappen , når rotten viser åbenlys adfærd såsom fodtilbagetrækning eller poteslikning, og registrer tiden på dette tidspunkt. Bestrålingstiden for spotlight bør ikke overstige 20 s for at undgå skader på rottens hud.
    4. Udfør den næste bestråling på den samme rotte efter mindst 10 minutter for at forhindre sensibilisering. Mål 5x på hver rotte.
    5. Fjern værdierne med store forskelle (maksimum- og minimumsværdien). Tag gennemsnittet af de resterende værdier som PWL.

5. Forberedelse af prøver

  1. Der udføres eutanasi på mus som beskrevet i 2.3.2.1.
  2. Forberedelse af synovial membran
    1. Fastgør rotten i liggende stilling med en sprøjtenål på et skumbræt med højre bagben bøjet i bortførelsen og ekstern rotation. Klem huden op omkring knæleddet med kirurgisk saks og udsæt musklerne omkring knæleddet hos rotter ved at skære huden og derefter skære den subkutane fascia.
    2. Tag patellar ligamentet som et vartegn for at fjerne muskelgrupperne over patellar ligamentet. Skær slutningen af patellar ligamentet (ved tibial tuberøsitet) omhyggeligt og find synovialmembranen, når ledbåndet klemmes opad nedenfra.
    3. Skær forsigtigt synovialvævet af med oftalmisk saks og vask blodet og synovialvæsken af med forkølet saltvand. Fastgør synovialmembranen i 4% paraformaldehyd i mindst 48 timer efter absorption af vand fra vævsoverfladen med rent gasbind.
    4. Prøven fremstilles som i trin 2.3.2.5-2.3.2.6. Udfør scoring som i trin 2.3.2.7.
  3. Udførelse af hæmatoxylin og eosin farvning
    1. Der voksafkøles til vand med xylen i 20 minutter, erstattes med en anden runde frisk xylen i 20 min, efterfulgt af behandling med vandfri ethanol i 5 min, erstattes med en anden runde frisk vandfri ethanol i 5 min, tilsæt derefter 90% ethanol i volumen i 5 min, 80% ethanol i volumen i 5 min, 70% ethanol i volumen i 5 min, og til sidst destilleret vand i 5 min.
    2. Dyp objektglasset i hæmatoxylinfarvningsopløsning i 3-8 min. Fjern diaset og skyl pletten af med destilleret vand. Flyt det ind i differentieringsvæsken (1% saltsyrealkohol) i næsten 30 s, så diaset falder til lyseblå. Skyl det med destilleret vand, og læg det i eosinfarvningsopløsning i 1-3 min.
    3. Dehydrer objektglasset med 95% ethanolvolumenfraktion i 5 min, erstat med en anden runde frisk 95% ethanol i 5 min, efterfulgt af vandfri ethanol i 5 min, erstat med en anden runde frisk vandfri ethanol i 5 min.
    4. Gør diaset gennemsigtigt ved at tilsætte xylen i 5 minutter, udskift det med endnu en runde frisk xylen i 5 minutter, og forsegl det derefter med neutral harpiks.
  4. Terminal-deoxynukleotidyltransferase-medieret nick end mærkning (TUNEL) på brusk
    1. Bruskprøven dehydreres i vandfri ethanol, 90% ethanol, 85% ethanol og 75% ethanol, indtil afvoksningshydreringen er afsluttet. Sug i PBS i 5 min. Tilsæt 3% H 2O2 dråbevis i 10 min.
    2. Tilsæt proteinase K arbejdsopløsning dråbevis og fordøjes ved 37 °C i 10 minutter. Tilsæt 20 μL mærkningsbuffer pr. skive for at holde den fugtig og ryste overskydende væske af efter tilberedning af arbejdsløsningen. Der tilsættes 20 μL arbejdsløsning til hvert objektglas og inkuberes i 2 timer ved 37 °C i en våd kasse.
    3. Tilsæt 50 μL af lukkeopløsningen dråbe for dråbe og luk i 30 min. Derefter tilsættes 50 μL fortyndet biotinyleret antidigoxinantistof (1:100 fortynding) dråbevis og inkuberes ved 37 °C i 2 timer i en våd æske. Der tilsættes dråbevis 10 μL SABC-antistoffortyndingsmiddel (1:100 fortynding), og der inkuberes ved 37 °C i 2 timer i en våd æske.
    4. Tilsæt DAB-farveudviklingsopløsning (50 μL hver af reagenserne A, B og C i 1000 μL destilleret vand) dråbevis i 10-15 min. Farveudviklingen afsluttes, når den er brungul granulær.
    5. Plet igen med hæmatoxylin i 3 s. Efter gradientdehydrering og gennemsigtig behandling tørres ved stuetemperatur og forsegles objektglasset forsigtigt med neutralt tyggegummi. Vær opmærksom på at undgå at efterlade bobler og overfyldt lim.
  5. Immunohistokemisk analyse af IL-1β og TNF-α
    1. Afvoks diasene rutinemæssigt i xylen og hydrat dem i gradientalkohol. Inaktiver den endogene peroxidase i sektionerne med 3%H2O2. Glideholderen anbringes i 95 °C citratbuffer (pH 6,0) og inkuberes i vandbad over 95 °C i over 20 minutter. Tag inkubationsboksen ud og lad den stå ved stuetemperatur i mindst 20 minutter.
    2. Der inkuberes 5% normalt gedeserum med PBS i 10 minutter ved 37 °C og rystes overskydende væske af. Der tilsættes 150 μL antistof dråbe for dråbe og henstår ved 37 °C i 1 time og opbevares derefter natten over ved 4 °C. Næste dag, genopvarm ved 37 ° C i 45 min.
    3. Vask 3x med PBS i 5 min hver. Dæk vævet på objektglasset med 3% BSA og forsegl det ved 37 °C i 30 minutter. Tilsæt 150 μL antistof II dråbe for dråbe og lad stå ved stuetemperatur i 1 time. Vask 3x med PBS i 5 min hver og tilsæt 150 pL DAB farveudvikling væske dråbevis. Overhold graden af farvning under mikroskopet, indtil prøven bliver brungul selv med det blotte øje.
    4. Skyl straks med PBS i 10 min. Plet igen med hæmatoxylin, dehydrer i gradientalkohol, gør dias gennemsigtige i xylen og forsegl med neutralt tyggegummi.
  6. Statistisk analyse
    1. Immunohistokemisk farvede sektioner med positiv ekspression af det associerede protein er gule eller brungule. Score intensiteten af positiv ekspression af Image J-software for hver gruppe af immunhistokemiske sektioner og brug evalueringskriterierne for gennemsnitlig optisk densitet (AOD), beregnet ved IOD divideret med areal.
    2. Brug analysesoftware til statistisk analyse. Brug t-test, hvis dataene var i overensstemmelse med normalfordelingen, og chi-kvadratisk, og brug ikke-parametrisk test, hvis de ikke var i overensstemmelse med normalfordelingen. Analyser gentagne måledata ved hjælp af generaliserede estimeringsligninger.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Test af smerteadfærd
MWT-resultaterne viste, at MWT i højre bagben efter modellering var signifikant lavere end før (p<0,05). Sammenlignet med kontrolgruppen var MWT hos rotter signifikant forhøjet efter Tuina (p<0,05; Figur 5 og tabel 2).

Figure 5
Figur 5. Resultater af prøvningen af den mekaniske tilbagetrækningstærskel (Equation 1, Newton). Der var 5 rotter hver i Tuina-gruppen og kontrolgruppen. MWT af rotterne på forskellige tidspunkter er vist i figuren. Efter modelleringen faldt rotternes MWT betydeligt, hvilket tyder på, at rotternes smerte blev forværret, og KOA-modellen blev udarbejdet med succes. Derefter blev MWT gradvist forbedret, hvilket tyder på smertelindring. Den generaliserede estimeringsligning blev brugt til statistisk beregning. Forskellen i MWT mellem Tuina-gruppen og kontrolgruppen var statistisk signifikant på dag 21 sammenlignet med den efter modellering. Sammenligningen mellem de to grupper var statistisk signifikant ved D7, D14 og D21, *p<0,05. Desuden har rotter i Tuina-gruppen højere MWT end i kontrolgruppen. Klik her for at se en større version af denne figur.

Tabel 2. Mekanisk tilbagetrækningstærskel ( Equation 1, n). Sammenligning før og efter modellering, #p<0.05. Sammenligning mellem Tuina-gruppen og kontrolgruppen, *p<0,05. Klik her for at downloade denne tabel.

PWL-resultaterne viste, at PWL i højre bagben efter modellering var signifikant kortere end før (s<0,05). Sammenlignet med kontrolgruppen blev MWT af rotter signifikant forlænget efter Tuina (p<0,001; Figur 6 og tabel 3).

Figure 6
Figur 6. Resultater af poteudtagningslatenstesten (Equation 1, sekund). Der var 5 rotter hver i Tuina-gruppen og kontrolgruppen. PWL af rotterne på forskellige tidspunkter er vist i figuren. Efter modelleringen faldt rotternes PWL betydeligt, hvilket tyder på, at rotternes smerte blev forværret, og KOA-modellen blev udarbejdet med succes. Først var forbedringen af PWT i Tuina-gruppen langsommere end i kontrolgruppen. Efter D7 forbedrede rotterne i Tuina-gruppen sig hurtigt og overgik kontrolgruppen ved D21. Den generaliserede estimeringsligning blev brugt til statistisk beregning. Forskellen i MWT mellem Tuina-gruppen og kontrolgruppen var statistisk signifikant på dag 21 sammenlignet med den efter modellering. Sammenligningen mellem de to grupper var statistisk signifikant ved D7, D14 og D21, ***p<0,001. Klik her for at se en større version af denne figur.

Tabel 3. Pote tilbagetrækning latens (Equation 1, s). Sammenligning før og efter modellering, #p<0.05. Sammenligning mellem Tuina-gruppen og kontrolgruppen, ***p<0,001. Klik her for at downloade denne tabel.

Histomorfologisk analyse
Ved analyse af synovialmembranen i kontrolgruppen blev inflammatorisk celleinfiltration og fibrøs vævshyperplasi set i synovialvæv. De synoviale celler var uorganiserede, og en lille mængde kapillær hyperplasi blev set omkring synovialvævet (figur 7).

Figure 7
Figur 7. Mikroskopisk observation af synovialvævet. A) Synovialt væv i kontrolgruppen. Det uorganiserede arrangement af synoviale celler ses i figuren. De prolifererende kar er markeret med røde pile, og inflammatoriske celler er markeret med sorte pile. (B) Synovialvæv i Tuina-gruppen. Synoviale celler var mere pænt arrangeret. Inflammatoriske celler fordeles hovedsageligt i kanterne snarere end infiltrerende indad. De prolifererende kar er markeret med røde pile, og inflammatoriske celler er markeret med sorte pile. Klik her for at se en større version af denne figur.

I Tuina-gruppen blev synovialceller pænt arrangeret med en lille mængde inflammatorisk celleinfiltration, fibrøs vævshyperplasi og en lille mængde kapillær hyperplasi synlig ved vævsmargenerne.

Ved analyse af brusk blev det set, at det TUNEL-farvningspositive område i Tuina-gruppen var signifikant mindre end det i kontrolgruppen, hvilket indikerer, at der var færre apoptotiske chondrocytter i Tuina-gruppen (figur 8).

Figure 8
Figur 8. TUNEL farvning af brusk. A) Brusk i kontrolgruppen. Den røde del af figuren er det positive område af TUNEL farvning. (B) Brusk i Tuina-gruppen. Den røde del af figuren er det positive område af TUNEL farvning. Det positive område i Tuina-gruppen er signifikant mindre end i kontrolgruppen. Klik her for at se en større version af denne figur.

Immunhistokemi
For TNF-α var der en signifikant forskel i synovial TNF-α-ekspression mellem de to grupper, og ekspressionen i Tuina-gruppen var signifikant lavere end i kontrolgruppen (tabel 4).

Tabel 4. TNF-α ekspression i synovium (Equation 1, *10-2). To uafhængige stikprøve t-test blev brugt til statistisk analyse, *p<0,05. Klik her for at downloade denne tabel.

For IL-1β var der ingen signifikant forskel i mængden af synovial IL-1β-ekspression mellem de to grupper, målt ved statistikken for billede J. Middelværdien af Tuina-gruppen var imidlertid subtilt lavere, hvilket indikerer mindre ekspression (tabel 5).

Tabel 5. IL-β Ekspression i synovium (Equation 1, *10-2). To uafhængige stikprøve t-test blev anvendt til statistisk analyse. Klik her for at downloade denne tabel.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Denne undersøgelse giver en protokol for Tuina manipulation på KOA rotter. Gennem smerteadfærdstest og histomorfologiske fund antydede det, at en sådan række Tuina-manipulationer anvendt på KOA-rotter kunne reducere synovial inflammation og bruskapoptose, hvilket kunne være en reference til Tuina-manipulation på dyremodeller af KOA.

Der er flere kritiske procedurer under protokollen. For det første er det vigtigt at vælge en passende metode til at inducere KOA-modellen. Der er forskellige metoder til at inducere KOA-modellen, herunder ledhuleinjektion25, intraartikulær kirurgi 26,27, ledbremsemetode 28,29 osv. Da KOA-modeller induceret af invasive metoder ville efterlade sår nær leddene, hvilket kan forstyrre effekten af Tuina-manipulation, valgte vi den ikke-invasive metode til fælles immobilisering. Den fælles immobiliseringsmetode kan opdeles i hyper-forlængelse og hyper-flexion fiksering. Shang et al. sammenlignede virkningerne af disse to fikseringsmetoder og fandt, at der var ringe forskel i effekten af bruskapoptose23. Imidlertid var deres forsøgspersoner kaniner, som er større i størrelse og relativt lette at rette sammenlignet med rotter. Fast gips i en bøjningsposition er mere tilbøjelig til at falde af under rotter, der gnaver. Derfor valgte vi immobiliseringsmetoden til hyper-extension fiksering for at inducere KOA. Vi henviste til He et al. og brugte gipsbandagen med en tungepressor som fikseringsanordning30. Rotternes gnaveevne var imidlertid stærkere end forventet, og enheden kunne ikke tjene som fiksering. Senere fandt vi en slags protesebasismateriale, som kan danne en formbar, men hård skal på ydersiden af gipset og effektivt reducere slid på fikseringsanordningen ved rotter, der gnaver. En stram fiksering ville påvirke blodcirkulationen i underekstremiteterne, mens for løs fiksering ville være let at falde af. Derfor bør cirkulationen af rotternes underekstremiteter observeres dagligt i løbet af de 3 ugers modellering. Fikseringen skal frigives, når underbenene bliver hævede og lilla. Geninstaller fikseringen, når den er løs, og rotterne kan bøje knæene. Under denne undersøgelse blev rotterne ikke begrænset fra at socialisere under modellering, men det blev konstateret, at de ville tygge hinandens fiksering for at hjælpe hinanden med at bryde fri. Måske ville isolering af rotterne have resulteret i bedre modellering. Isolation kan dog bidrage til rotternes depression og stereotype adfærd.

Vi mener, at nøglepunktet i Tuina-manipulation er at holde konsistensen af intensiteten og frekvensen. Tidligere forskning konkluderede, at den optimale intensitet for dyr Tuina bør være 80% af dens maksimale tolerable intensitet31. På dette tidspunkt skal rotterne vise tegn på at modtage mekanisk stimulering, men uden tegn på smerte eller pote tilbagetrækning. Vi testede den maksimale tolerable intensitet af rotter, som er omkring 5-8 N. Så vi indstiller skubbeintensiteten til 3-5 N, hvilket kan føre til bedre effektivitet. Hyppigheden af manipulationen er 2 Hz, ifølge Tuinas lærebog. Tidligere undersøgelser har ikke fastsat en standardisering for Tuina-manipulation, og intensiteten og hyppigheden kan variere efter betjening af forskellige akupunkter og ændring af venstre og højre hånd under eksperimentet, hvilket kan påvirke nøjagtigheden af resultaterne. De fingertrykoptagelser, der anvendes i dette eksperiment, giver realtidsobservation af intensiteten og hyppigheden af manipulationen under eksperimentet, hvilket kan holde manipulationens konsistens. Nogle lærde bruger maskiner til at simulere Tuina-manipulation og anvende den på dyr, hvilket har fordelen ved standardisering af manipulationen32.

Til udvælgelse af akupunkter henviste vi til undersøgelsen af Wang og Liu og valgte fem akupunkter omkring knæleddet for at lette manipulation33,34. Vi valgte den gipsimmobiliserede metode til at inducere KOA, som for det meste ender med muskelatrofi og ledstivhed35. ST34 og ST35 tilhører foden Yangming mavemeridian, som er kritisk til behandling af atrofi (for det meste manifesteret som svaghed og muskelatrofi) i traditionel kinesisk medicinteori og har god tilpasningsevne til KOA induceret af gips-immobiliseret metode. EX-LE4 er et almindeligt akupunkt til klinisk behandling af KOA, mest anvendt sammen med ST35. Tan et al. fandt, at akupunktur og moxibustion på ST35, ST36 og EX-LE4 kunne reducere inflammatorisk faktorekspression i synovialmembranen36. SP10 og BL40 er de centrale akupunkter i klinisk Tuina-behandling for KOA 37,38, og SP10 bruges oftest i Tuina-recepter til KOA39.

En vanskelig del af Tuina manipulation er fiksering af rotter. Rotter kan kæmpe eller undgå manipulation, hvilket øger vanskeligheden ved at udføre eksperimentet. Selvom rottestartspærre kan immobilisere rotter og udsætte deres bagben, begrænser udviklingen af KOA bagbenbøjning og forlængelse. Derfor kan bosættelse af rotter med startspærre føre til smerte og ufuldstændig eksponering af baglederne, hvilket kan påvirke Tuina-manipulation. Vi designede en stofpose med en enkelt udgang baseret på rottens præference for mørke omgivelser og dens tendens til at grave sig ned. Luk kludposen, når rotten kommer ind, hvilket vil sige hovedet og forbenene er placeret i posen, og bagbenene udsættes udenfor. Denne metode kan effektivt reducere rotternes kamp og holde dem stille under Tuina.

Resultaterne af præeksperimentet tyder på, at Tuina-manipulation kan reducere det inflammatoriske respons af synovialvæv og mindske apoptose af chondrocytter og dermed fungere som en behandling for KOA. Der er dog behov for flere undersøgelser for at bekræfte dette.

Der er flere mangler ved denne protokol. For det første gør rotternes lille størrelse det vanskeligt at lokalisere akupunkterne præcist. Operatørens fingre er for store i forhold til akupunkterne på rotter, hvilket kan påvirke effekten af Tuina-manipulation. Vi havde overvejet at tilføje en gummipartikel på ca. 2 mm i diameter på fingerspidsen for at øge nøjagtigheden af stimulerende akupunkter. Men partiklerne kan føre til højere trykintensitet og øge vanskeligheden ved at kontrollere konsistensen. Derudover var det mere sandsynligt, at det ville beskadige fingertrykoptagelserne, så vi valgte ikke denne metode. For det andet ignorerede vores undersøgelse ændringen af inflammatoriske faktorer i synovialvæsken og chondrocytapoptose, hvilket kan svække undersøgelsens troværdighed. Vi vil intensivere forskningen på dette område i fremtiden. For det tredje er presse- og æltningsmanipulation en af Tuina-manipulationerne og kan ikke omfatte virkningerne af Tuina til behandling af KOA. Andre Tuina-manipulationer, der implementeres i dyr, skal undersøges yderligere, herunder manipulation af fælles bevægelser og gnidningsmanipulation. Desuden ville positiv kontrol bedre vise effektiviteten af manipulationen, men den blev ikke designet i denne undersøgelse, og vi vil tilføje dette i en opfølgende undersøgelse.

Samlet set giver denne undersøgelse en standardiseret protokol for Tuina-manipulation på KOA-rotter, og effektiviteten af manipulationen er blevet verificeret af smerteadfærdstest og mikroskopiske fund. Protokollen viser foreløbigt, at de terapeutiske virkninger af Tuina kan være relateret til reduktion af synovial inflammation og forsinket chondrocytapoptose. Mere forskning er nødvendig for at udforske mekanismen i Tuina for KOA.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.

Acknowledgments

Dette arbejde blev støttet af Shanghai Critical Clinical Specialties Construction Project (bevillingsnummer: Shslczdzk04001); Shanghai Science and Technology Commissions sejlprogram (bevillingsnummer: 22YF1444300); Projekter inden for budgettet for Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (bevillingsnummer: 2021LK091).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
absolute ethanol Supelco PHR1070 For making specimen
ALMEMO admeasuring apparatus ahlborn 2450-1 For Mechanical Withdrawal Threshold test
Anti-Digoxin antibody Sigma-Aldrich SAB4200669 For HE stain IHC or TUNEL
Anti-IL-1 beta abcam ab283818 For HE stain IHC or TUNEL
DAB Substrate kit Solarbio DA1010 For HE stain IHC or TUNEL
Denture base materials Shanghai New Century 20000356 For model making
eosin bioswamp  PAB180016  For HE stain IHC or TUNEL
Finger pressure recordings Suzhou Changxian Optoelectronic Technology CX1003w For Tuina manipulation
formic acid solution Sigma-Aldrich 695076 For decalcification
H2O2 Sigma-Aldrich 386790-M For HE stain IHC or TUNEL
hematoxylin bioswamp  PAB180015 For HE stain IHC or TUNEL
Isoflurane Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company S10010533 For gas anesthesia
neutral resins bioswamp  PAB180017 For HE stain IHC or TUNEL
Paraformaldehyde Fix Solution Sigma-Aldrich 100496 For histology
PBS Sigma-Aldrich P3813 For HE stain IHC or TUNEL
Plantar Test Apparatus IITC Life Science / For Paw Withdrawal Latency test
plaster of Paris bandage WANDE 20150023 For model making
Proteinase K Sigma-Aldrich 124568 For HE stain IHC or TUNEL
TNF Alpha Monoclonal antibody Proteintech 60291-1-Ig For HE stain IHC or TUNEL
TUNEL  Servicebio GDP1042 For HE stain IHC or TUNEL
Wax Sigma-Aldrich 327204 For making specimen
xylene Shanghai Sinopharm Group 100092 For making specimen

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Joint Surgery Group of Chinese Orthopaedic Association, Chinese Association of Orthopaedic Surgeons, National Clinical Research Center for Geriatric Diseases, Chinese Journal of Orthopaedics. Chinese Osteoarthritis Treatment Guidelines (2021 Edition). Chinese Journal of Orthopaedics. 41 (18), 24 (2021).
  2. David, S., et al. Epidemiology of knee osteoarthritis in general practice: a registry-based study. BMJ Open. 10 (1), 031734 (2020).
  3. Callahan, L. F., Cleveland, R. J., Allen, K. D., Golightly, Y. Racial/Ethnic, Socioeconomic, and Geographic Disparities in the Epidemiology of Knee and Hip Osteoarthritis. Rheumatic Disease Clinics of North America. 47 (1), 1-20 (2021).
  4. Wang, K., Dong, X., Lin, J. H. Investigation of Medical Costs of Disease In Patients With Osteoarthritis of the Knee Joint. National Medical Journal of China. 97 (1), 4 (2017).
  5. Perlman, A., et al. Efficacy and Safety of Massage for Osteoarthritis of the Knee: a Randomized Clinical Trial. Journal of General Internal Medicine. 34 (3), 379-386 (2019).
  6. Xing, H., et al. Therapeutic massage for knee osteoarthritis: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Journal of Acupuncture and Tuina Science. 19 (5), 354-363 (2021).
  7. Seo, B. R., et al. Skeletal muscle regeneration with robotic actuation-mediated clearance of neutrophils. Science translational medicine. 13 (614), (2021).
  8. Wu, J. H., Zhang, C., Dong, S. J., Yin, H. Effects of Massage with #34;Relaxing Tendons" Technique on the Interleukin-1B and 5-hydroxytryptamine Levels in the Joint Fluid of a Rabbit Knee Osteoarthritis Model. Chinese General Practice. 21 (6), 688-693 (2018).
  9. Luo, R. The effects of IL-1B,IL-6,IL-13,IL-26,TNF-a by patellar manipulations on rabbit knee osteoarthritis model. Guangxi University of Traditional Chinese Medicine. , (2017).
  10. Qiu, F., Li, C., Wu, X., Liu, Y., Zhang, X. Effect of Massage on the Function of Foot-Yangming Meridian-Muscle in Patients with Knee Osteoarthritis. Acta Chinese Medicine. 36 (3), 649-655 (2021).
  11. Yang, B., Li, S. Research Progress of Massage in Improving Biomechanical Indexes of Knee Osteoarthritis. Acta Chinese Medicine. 37 (12), 2571-2576 (2022).
  12. Li, C., Qiu, F., Ding, J., Hu, G., Zhang, X. Curative Observation of Retaining of Heated Needle at Trigger Points Combined with Manipulation for Muscles along Meridians in Treating Knee Osteoarthritis. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 37 (11), 2157-2162 (2020).
  13. Ding, X., Zhang, X., Hou, Y., Zhao, Z., Ye, X. Effect of massage manipulation on joint stiffness of knee osteoarthritis patients based on "spine-pelvis-knee" holistic diagnosis and treatment pattern. Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine. 55 (08), 54-57 (2021).
  14. Fu, Y., Gong, L., Li, Y. The clinical studies of Rolling combined with Pulling Manipulation on Early and Middle-term. Jilin Journal of Chinese Medicine. 40 (07), 958-962 (2020).
  15. Jiang, J., Hu, X., Tang, R., Qiu, F., Huang, L. Change of lower limb force line in treating knee osteoarthritis with manipulation. Journal of Changchun University of Chinese Medicine. 34 (01), 129-132 (2018).
  16. Liang, Y., et al. Some issues on animal experiments standardization of acupuncture and moxibustion. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 25 (09), 2299-2300 (2014).
  17. Guo, Y., Liu, Y., Liu, Q., Chen, Z., Zhao, X. Basic System of Chinese Acupuncture Standard. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 31 (6), 549-550 (2011).
  18. YAN, X., Yan, J. Study on the Standardization of Classification of Tuina Manipulation. Acta Chinese Medicine. 32 (5), 875-878 (2017).
  19. Aikebaier, G., Lu, X., Liu, J., Liu, l, Wang, S. Analysis on Manipulation and Acupoint Selection Laws of Massage for Treatment of Knee Osteoarthritis Based on Data Mining Technology. Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine. 29 (5), 23-29 (2022).
  20. Gong, L., Wuquan, S., Zhang, H., Chen, Z. Research of Yan Juntao's Academic Experiences of Differential Treatment and Manipulation for Treating of Knee Osteoarthritis. Chinese Journal of Traditional Medical Traumatology & Orthopedics. 24 (7), 16-19 (2016).
  21. Qian, J., Xing, X., Liang, J. Two Methods to Establish Rat Model of Osteoarthritis of the Knee. Research and Exploration in Laboratory. 33 (11), 23-27 (2014).
  22. Liu, J., et al. Experimental study of a modified Videman method for replicating knee osteoarthritis on rabbit. Rehabilitation Medicine. 30 (03), 212-219 (2020).
  23. Moskowitz, R. W. Osteoarthritis cartilage histopathology: grading and staging. Osteoarthritis and Cartilage. 14 (1), 1-2 (2005).
  24. Shen, M., Li, Z., Shen, J. Preliminary Exploration of Experiment Teaching on Experiment Acupuncture Science. Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 7 (02), 130-131 (2009).
  25. Jeong, J., et al. Anti-osteoarthritic effects of ChondroT in a rat model of collagenase-induced osteoarthritis. BMC complementary and alternative medicine. 18 (1), 131 (2018).
  26. Hulth, A., Lindberg, L., Telhag, H. Experimental osteoarthritis in rabbits. Preliminary report. Acta orthopaedica Scandinavica. 41 (5), 522-530 (1970).
  27. Tawonsawatruk, T., Sriwatananukulkit, O., Himakhun, W., Hemstapat, W. Comparison of pain behaviour and osteoarthritis progression between anterior cruciate ligament transection and osteochondral injury in rat models. Bone & Joint Research. 7 (3), 244-251 (2018).
  28. Zhou, Q., et al. Cartilage matrix changes in contralateral mobile knees in a rabbit model of osteoarthritis induced by immobilization. BMC musculoskeletal disorders. 16, 224 (2015).
  29. Zeng, J., et al. Establishment and identification of experimental rabbit model of knee osteoarthritis. Chinese Journal of Clinical Research. 29 (5), 679-682 (2016).
  30. Shang, P., et al. Comparison with two kind osteoarthritis animal models reduced by plaster immobilization in extend excessive position and bend excessive position respectively. Orthopaedic Biomechanics Materials and Clinical Study. (1), 11-14 (2006).
  31. He, Y., et al. Evaluation of the effect of improved cast immobilization method on rabbit knee osteoarthritis model. Chinese Imaging Journal of Integrated Traditional and Western Medicine. 18 (2), 198-219 (2020).
  32. Pengfei, S., et al. Possible mechanism underlying analgesic effect of Tuina in rats may involve piezo mechanosensitive channels within dorsal root ganglia axon. Journal of Traditional Chinese Medicine. 38 (6), 834-841 (2018).
  33. Wang, Y. Mechanisms of Massage Mediating Chondrocyte Apoptosis in Knee Osteoarthritis Through Piezo 1/JAK2 Signaling Pathway. Shandong University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).
  34. Liu, J. Effect of Massage on TLR4/MyD88 Signal Transduction Pathway in Rat Knee Osteoarthritis Model. Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).
  35. Yu, S., Zhou, J., Pang, X. Advances in induced animal models of knee osteoarthritis. Journal of Guangxi University of Chinese Medicine. 25 (5), 50-55 (2022).
  36. Tan, Q., et al. Acupuncture combined with moxibustion regulates the expression of circadian clock protein in the synovium of rats with osteoarthritis. Chinese Journal of Tissue Engineering Research. 26 (11), 1714-1719 (2022).
  37. Zhang, Z., et al. A Review of Massage Therapy for Knee Osteoarthritis. Henan Traditional Chinese Medicine. 39 (1), 146-149 (2019).
  38. Gong, L., Sun, W., Zhang, H., Chen, Z. Research of Yan Juntao's Academic Experiences of Differential Treatment and Manipulation for Treating of Knee Osteoarthritis. Chinese Journal of Traditional Medical Traumatology & Orthopedics. 24 (7), 16-19 (2016).
  39. Chen, C., Zhang, H. Research on the rules of acupoint selection for the treatment of knee osteoarthritis with massage based on data mining. Hainan Medical Journal. 29 (18), 2617-2619 (2018).

Tags

Medicin nr. 196
Tuina manipulation for at reducere betændelse og brusk tab i knæ slidgigt rotter
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Su, X., Song, P., Meng, F., Xu, W.,… More

Su, X., Song, P., Meng, F., Xu, W., Xing, H., Zhang, H. Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats. J. Vis. Exp. (196), e65451, doi:10.3791/65451 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter