Summary
Pflanzenstärkungsmittel zu kauen pflanzenfressenden Insekten kann auf verschiedene Weise getestet werden. Hier zeigen wir, wie Set-up eine Wahl und ein no-Wahl Experiment mit der Modellpflanze Arabidopsis thaliana, um Widerstand gegen die Schädlinge Pieris rapae identifizieren.
Abstract
Die Larven der kleinen weißen Kohlkopfschmetterling sind ein Schädling in der Landwirtschaft Einstellungen. Diese Raupe Arten Feeds von Pflanzen in der Kohl-Familie, die viele Kulturen wie Kohl gehören, nimmt Brokkoli, Rosenkohl etc. Aufzucht der Insekten am Kohlpflanzen im Gewächshaus. Mindestens zwei Käfige sind für die Aufzucht von Pieris rapae benötigt. Einer für die Larven und die andere für die Erwachsenen, die Schmetterlinge enthalten. Um die Rolle von pflanzlichen Hormonen und giftige Pflanzen Chemikalien in Widerstand gegen diese Schadinsekten zu untersuchen, zeigen wir zwei Experimente. Zunächst Bestimmung der Rolle der Jasmonsäure (JA - ein Pflanzenhormon oft in Resistenz gegen Insekten angegeben) im Widerstand gegen das Kauen Insekten Pieris rapae. Caterpillar Wachstum kann auf Wildtyp-und mutierten Pflanzen in der Produktion von JA beeinträchtigt verglichen werden. Dieses Experiment wird als "No Choice", weil Larven gezwungen sind, auf einer einzigen Pflanze, die oder synthetisiert ist mangelhaft in JA bestehen. Zweitens zeigen wir ein Experiment, das die Rolle der Glucosinolate, die als Eiablage (Eiablage) Signale verwendet werden untersucht. Hier verwenden wir WT und Mutante Arabidopsis in Glucosinolat Produktion in einer "Choice" Experiment, bei dem weiblichen Schmetterlinge erlaubt zu wählen, um ihre Eier auf Pflanzen entweder Genotyp lag beeinträchtigt werden. Dieses Video zeigt den Versuchsaufbau für beide Assays sowie repräsentative Ergebnisse.
Protocol
No Choice Experiment:
- Vorsichtig umschließen das Arabidopsis-Pflanze von Interesse in einen Plastikbecher. In diesem Fall: Col-0 (WT) und eine Mutante in der Produktion von JA beeinträchtigt. Achten Sie darauf, den Schaden begrenzen, um die Blätter. Dafür verwende ich die Rückseite dieses Pinsels.
- Verwenden Sie einen feinen Pinsel auf einem frisch geschlüpften Larven aus der Kolonie auf Kohl nehmen.
- Vorsichtig die Larve auf der Arabidopsis-Pflanzen.
- Gewicht Larve am Tag 4, 7, 10. TIP: Erweitern Sie Ihre Pflanzen unter Kurztagbedingungen (8 Stunden Licht), um das vegetative Wachstum (1 Larve kann seinen gesamten Lebenszyklus auf 1 Pflanze erfüllen) zu erhöhen.
Wahl Experiment:
- Zwei Pflanzen ausgewählt sind, eins von jedem Genotyp. Am besten ist es für die Pflanzen in den gleichen Topf wachsen, auf andere Faktoren, wie zum Beispiel Fach-Effekte, etc. einschränken
- Setzen Sie die Pflanzen in einen Schmetterling Käfig.
- Wählen Sie ein fruchtbares Weibchen. Ich in der Regel fangen einen weiblichen, die aktiv die Verlegung Eier in die Aufzucht Kolonie.
- Lassen Sie die Frau in den Käfig mit der Wahl von zwei Anlagen für 24 Stunden.
TIPP 1: Um einen Einfluss des Lernens zu beseitigen, nicht wiederverwenden Frauen für nachfolgende Choice-Tests.
TIPP 2: Man kann nur vergleichen, Pflanzen, die ein ähnliches Wachstum Phänotyp haben. Alternativ können Sie ein Blatt von jedem Genotyp Montage auf einem Erlenmeyerkolben und vergleichen ihre Attraktivität für ein Weibchen.
Bitte besuchen Sie Annual Reviews of Plant Biology , um weitere Informationen über dieses Protokoll und pflanzliche Immunität zu Raupenfraß.
