Summary
Resistência de plantas a insetos herbívoros de mascar pode ser testado de várias maneiras. Aqui, demonstramos como set-up uma escolha e um experimento sem chance de escolha com a planta modelo Arabidopsis thaliana para identificar a resistência contra a praga Pieris rapae espécies.
Abstract
Larvas da borboleta de repolho branco pequeno são uma praga em ambientes agrícolas. Esta espécie de lagarta se alimenta de plantas da família do repolho, que incluem muitas culturas, tais como repolho, brócolis, couve de Bruxelas, etc Criação dos insetos ocorre em plantas de couve na estufa. Pelo menos, duas gaiolas são necessários para a criação de Pieris rapae. Um para as larvas e os outros para conter os adultos, as borboletas. A fim de investigar o papel dos hormônios vegetais e produtos químicos de plantas tóxicas na resistência a esta praga de insectos, demonstramos dois experimentos. Primeiro, a determinação do papel do ácido jasmônico (JA - um hormônio vegetal, muitas vezes indicada na resistência a insetos) na resistência à mastigação de insetos Pieris rapae. Caterpillar crescimento pode ser comparado em plantas do tipo selvagem e mutante deficiente na produção de JA. Este experimento é considerado "Escolha Não", porque as larvas são obrigados a subsistir com uma única planta que sintetiza ou é deficiente em JA. Segundo, nós demonstramos um experimento que investiga o papel de glicosinolatos, que são usados como oviposição (postura) sinais. Aqui, usamos Arabidopsis WT e mutante deficiente na produção de glucosinolatos em uma "escolha" experimento no qual borboletas fêmeas podem escolher para colocar seus ovos em plantas de qualquer genótipo. Este vídeo demonstra a configuração experimental para ambos os ensaios, bem como resultados representativos.
Protocol
Nenhum experimento Choice:
- Cuidadosamente coloque a planta Arabidopsis de interesse em um copo de plástico. Neste caso: Col-0 (WT) e um mutante deficiente na produção de JA. Certifique-se de limitar os danos às folhas. Por que eu uso no verso deste pincel.
- Use um pincel fino para tomar um larvas recém-eclodidas da colônia em repolho.
- Cuidadosamente coloque a larva nas plantas de Arabidopsis.
- Larva de peso no dia 4, 7, 10. DICA: Grow suas plantas em condições de dias curtos (8 horas de luz) para aumentar o crescimento vegetativo (1 larva possa cumprir o seu ciclo de vida completo de uma planta).
Experimento de escolha:
- Duas plantas são selecionadas, uma de cada genótipo. Melhor é fazer crescer plantas na mesma panela, para limitar a outros fatores, como efeitos de bandeja, etc
- Colocar as plantas em uma gaiola de borboletas.
- Selecione uma fêmea fértil. Eu costumo pegar uma fêmea que está ativamente ovos na colônia de criação.
- Solte a fêmea na gaiola com a escolha de duas unidades de 24 hrs.
DICA 1: Para eliminar um efeito de aprendizagem, não reutilize fêmeas para testes de escolha subsequente.
DICA 2: Só se pode comparar plantas que têm um fenótipo de crescimento similar. Alternativamente, você poderia montar uma folha de cada genótipo em cima de um Erlenmeyer e comparar o seu interesse para uma fêmea.
Visite Comentários Anual de Biologia Vegetal para obter mais informações sobre esta imunidade protocolo e planta à herbivoria de insetos.
