ライブ固定化酵母細胞の可視化のための高速手法
Summary
ここにサイレント交配座HMLとHMRで蛍光レポーターに適用成長している固定化酵母細胞の可視化のための急速な技術、
Abstract
ここでは、落射蛍光顕微鏡による成長酵母細胞の固定化と可視化のための、シンプルで迅速な、そして非常に柔軟な手法を提示する。技術は均等に長さが10時間までの静的な酵母の集団、またはタイムコース実験の可視化に適しています。私の顕微鏡は、S. cerevisiaeのサイレント交配の遺伝子座で後成的遺伝を研究しています。それらはヘテロクロマチンにパッケージされていると正常に表現されていない2つのサイレント交配の遺伝子座、HMLとHMRは、あります。 SIR1変異体背景のサイレンシングに各遺伝子座表現または沈黙エピジェネティックな状態にすることができることなど弱体化されているので、全体として人口にHMLとHMRの両方のためのさまざまなエピジェネティックな状態の細胞の混在がある。私の顕微鏡は、個々のセル内のHMLとHMRのエピジェネティックな状態の間には関係がないことを示した。 SIR1細胞は確率的にエピジェネティックな状態は、以前に発現した遺伝子座のサイレンシングを確立したり、以前に沈黙軌跡を表現して切り替える。私の時間経過顕微鏡は、4つのエピジェネティックなスイッチのそれぞれの頻度、およびそのためSIR1細胞におけるエピジェネティックな状態のそれぞれの安定性を獲得するために、個々のSIR1細胞とその子孫を追跡した。 Xuらも参照してください。、モル。細胞2006。
Protocol
Discussion
これはまだ成長を可能にしながら酵母細胞を固定化する急速な技術です。我々は、酵母は、実験を通して、野生型の分裂速度を表示すると、最大10時間まで酵母の成長を続けている。このセットアップは、顕微鏡ステージの下に対物レンズが必要であることに注意してください。
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々はすべての彼らの助けのためにピートヒューストンとユージニア徐に感謝します。
References
- Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states. Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).
