Summary
产后缺氧缺血性脑损伤大鼠模型，是一个人类新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的行之有效的模式。在这篇文章中，我们描述了在产后幼鼠缺氧缺血性脑病的模型。
Abstract
缺氧缺血性脑病（HIE）是全身出生时发生窒息的后果。二十五％的新生儿缺氧缺血性脑病的发展严重和永久性的神经心理的后遗症，包括精神发育迟滞，脑瘫，癫痫。缺氧缺血性脑病的结果是灾难性的，永久的，使得它的关键识别和制定治疗策略，以减少新生儿缺氧缺血性脑病的脑损伤。为此，新生儿缺氧缺血性脑损伤大鼠模型已开发模型这个人的条件。 Vannucci等1缺氧缺血性脑病模型首次验证，并一直广泛用于识别从围产期缺氧缺血导致的脑损伤的机制，来测试潜在的治疗干预3,4。缺氧缺血性脑病模型是一个两步的过程，涉及暴露在缺氧的环境，左颈总动脉结扎。半球同侧颈动脉结扎脑血流（CBF）的不减少，因为通过Willis环侧支血流;然而，随着氧张力降低，CBF在同侧半球显着降低和单方面缺血性损伤的结果。使用2,3,5 -三苯基氯化四氮唑（TTC）染色，并确定脑组织缺血，最初是成年啮齿动物脑缺血5模型，用于评估在早期的时间点脑infarctin的程度高达72小时后缺血事件6。在这段视频中，我们展示了在产后大鼠脑缺氧缺血损伤模型和使用TTC染色梗死大小的评价。
Protocol
批准该协议是在斯坦福大学和遵守机构的动物护理和使用委员会由国家机构使用实验动物的健康指引。
新生大鼠缺氧缺血性脑病模型
- 产后一天（PND）7只Sprague - Dawley幼鼠（查尔斯河实验室，公司，威尔明顿，马）完全麻醉与异氟醚（Aerrane，巴克斯特，迪尔菲尔德，IL诱导的3-4％和1-2％维护）。
- 小切口在颈部（超薄虹膜剪刀＃14088-10，精细的科学工具公司，福斯特城，加利福尼亚州）暴露左颈总动脉（CCA）。
- CCA是结扎用5-0丝线缝合（5-0丝线，爱惜康，森玛，新泽西州）。
- 氰基丙烯酸酯胶粘剂（Elmers产品公司，俄亥俄州哥伦布）切口关闭。切口用胶带覆盖，并停止麻醉。幼仔返回他们的大坝，并允许以休养生息为1-2小时。
- 小狗，然后放置在缺氧室，其中包含8％的氧气与100分钟的92％，氮平衡，在37 ° C。 8％oxygen/92％的氮气（公司Airgas，萨克拉门托，加利福尼亚州）通过管到配备有一个塑料盖鼠笼流。封面是适合的笼子里，并有两个直径2厘米的洞，允许其中一个接收管连接到8％的氧气罐和其他气体flowout。会议厅内置于水浴中，是使用前热身和温度计内缺氧开始前必须注册37℃。
- 在100分钟缺氧结束时，幼崽再次返回他们为恢复大坝。
- 缺氧结束24小时后，幼崽安乐死深麻醉与异氟醚。脑组织灌注冷生理盐水，其次是解决一个寒冷的1％TTC磷酸盐缓冲生理盐水，pH值7.4（西格玛化工有限公司，圣路易斯，密苏里州）。 TTC必须保持避光。
- 的大脑将被删除，并为1-2分钟，冰，和4个3毫米（1-4级）冠状切片冷却被切断，开始在opticchiasm和漏斗的水平，相应的前囟1.8 rostrally〜2.0毫米的水平成年小鼠的大脑。
- 都沉浸在大脑切片TTC溶液，37℃孵育8分钟，随后在4％多聚甲醛/ PBS过夜固定。 TTC是因为光敏感，保持光片，在此期间，。
- TTC染色切片扫描和数字化。使用图像J（美国国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达），以下是测量每个级别：梗死面积（未染色面积），同侧半球的区域，面积和对侧半球。 ％心肌梗死每片面积计算公式为：（/同侧半球梗塞面积的区域） 或1，A 2，A 3， 和 4 。 ％梗塞体积计算的总和（1 + 2 + 3 +一个4）*3毫米。皮质或纹状体损伤的地区也可以分别以类似的方式量化。
代表性的成果
图1。代表缺氧缺血性脑病冠状水平1-4与TTC染色。
TTC染色冠状切片显示梗死区（白）。
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Discussion
产后缺氧缺血性脑病的啮齿类动物模型建立的模型，概括脑缺氧，在新生儿围产后期间发生。广泛的组织学和免疫特性的研究表明，7天的老灭鼠有类似的大脑成熟模型孕晚期胎儿7。鼠缺氧缺血性脑病模型已经非常丰富，了解脑损伤的围产后缺氧，低温干预措施，如已证实 3机制。这个模型最初是完善在大鼠和小鼠8最近改编。
值得一提的有具体的技术细节：
- 的CCA结扎之前，一定要去除结缔组织和迷走神经可能套住文建会。有了成功的CCA结扎，结扎部位以上的船只的颜色变成白色。另外，它也建议，双重结扎和切断在中间两个结扎部位。盖其大坝之前，小狗回来的结扎CCA切口标签磁带。
- 一个的最长期限不超过10分钟的麻醉每个小狗是最适合CCA结扎并取得圆满成功。
- 文建会结扎后休养期间应90-120分钟。如果较短，幼崽不太容易生存，如果不再会有梗死的变异，对规模较小梗死的趋向。
- 温度是至关重要的。始终放置在会议厅内的温度计的温度保持在37 ° C。缺氧的长度从90到120分钟，取决于你想要达到的情况和损伤的严重程度可能会有所不同。
- TTC染色梗死体积达72小时后缺氧缺血性脑病的分析是适用的。更长的生存时间点应评估切片和甲酚紫染色，以确定梗死面积。
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Acknowledgments
由美国心脏协会和March of Dimes的。
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Sprague-Dawley Rat Pups | Animal | Charles River Laboratories | ||
| Isoflurane | Surgery | Baxter Internationl Inc. | ||
| 8% Oxygen/ 92% Nitrogen Gas | Surgery | Airgas | ||
| 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride | Reagent | Sigma-Aldrich | T8877 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) pH 7.4 | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | ||
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma-Aldrich | P6148 |
References
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