Bloedafname van de Amerikaanse Horseshoe Crab, Limulus Polyphemus

Summary

De Amerikaanse degenkrab, Limulus polyphemus, is misschien wel de meest handige bron voor grote hoeveelheden bloed van een ongewervelde. Het bloed is eenvoudig in samenstelling, met slechts een cel-type in de algemene circulatie, de granulaire Amebocyte, en slechts drie overvloedige eiwitten in het plasma, hemocyanine, de C-reactieve proteïnen en α2-macroglobuline. Bloed wordt verzameld vanuit het hart en het bloed cellen en plasma worden gescheiden door centrifugeren.

Abstract

Het hoefijzer krab is de best gekarakteriseerd immuunsysteem van een langlevende ongewervelde. De studie van de immuniteit in degenkrabben werd vergemakkelijkt door het gemak in het verzamelen van grote hoeveelheden bloed en uit de eenvoud van het bloed. Hoefijzer krabben laten slechts een enkele cel type in de algemene circulatie, het korrelige Amebocyte. Het plasma heeft het zoutgehalte van zeewater en slechts drie overvloedige eiwitten, hemocyanine, de luchtwegen eiwit, de C-reactieve eiwitten, die functioneren in de cytolytische vernietiging van vreemde cellen, waaronder bacteriële cellen en α2-macroglobuline, die de proteasen remt van de binnendringende ziekteverwekkers. Het bloed wordt verzameld door directe cardiale lekke band, onder de voorwaarden dat de besmetting te minimaliseren door lipopolysaccharide (aka, endotoxine, LPS), een product van de Gram-negatieve bacteriën. Een groot dier kan opleveren 200 tot 400 ml bloed. Voor de studie van het plasma, zijn bloedcellen onmiddellijk verwijderd uit het plasma door centrifugeren en het plasma kan vervolgens worden gefractioneerd in de samenstellende eiwitten. De bloedcellen zijn overzichtelijk microscopisch onderzocht door het verzamelen van kleine hoeveelheden bloed in de LPS-vrij isotone zoutoplossing (0,5 M NaCl) onder omstandigheden die rechtstreeks microscopisch onderzoek mogelijk te maken door het plaatsen van een of meer LPS-vrij coverglasses op de cultuur schotel oppervlak, dan montage die coverglasses in eenvoudige observatie kamers na celhechting. Een tweede voorbereiding op de directe observatie is om 3 te verzamelen – 5 ml bloed in een LPS-vrij embryo schotel en vervolgens explanting fragmenten van geaggregeerde amebocytes naar een kamer die sandwiches het weefsel tussen een glijbaan en een dekglaasje. In deze voorbereiding, de beweeglijke amebocytes migreren naar het dekglaasje oppervlak, waar ze gemakkelijk kunnen worden waargenomen. De bloedstolling systeem omvat aggregatie van amebocytes en de vorming van een stolsel extracellulaire van een eiwit, coagulin, dat vrijkomt uit de secretoire korrels van de bloedcellen. Biochemische analyse van de gewassen bloedcellen vereist dat aggregatie en degranulatie doet zich niet voor, die kan worden bereikt door het verzamelen van bloed in 0,1 volumes van 2% Tween-20, 0,5 M LPS-vrij NaCl, gevolgd door centrifugeren van de cellen en wassen met 0,5 M NaCl.

Protocol

Anatomische eigenschappen van het hoefijzer krab die relevant zijn voor bloeden (fig. 1) Figuur 1 De drie belangrijkste divisies van het lichaam, van anterior naar posterior, zijn de prosoma (P), de opisthosoma (O), en het telson (T) 1. De voorste en laterale vrije randen van de prosoma is de flens. …

Discussion

Er zijn vier soorten hoefijzer krab, Limulus polyphemus van de oostkust van Noord-Amerika en drie soorten die variëren van Japan naar de Golf van Bengalen. Het dier wordt geïdentificeerd als een 'levend fossiel', omdat anatomisch soortgelijke vormen zijn gevonden als fossielen van 445 miljoen jaar geleden ^27. Het hoefijzer krab is een langlevende dieren, die 10 tot 13 ​​jaar om volwassen te worden en leven minstens 20 jaar ^28. Hoewel het is onderworpen aan een uitgebreide oogsten als aas voor de …