Name: Mikrovasküler Endotel Fizyolojik E-selektin aracılığı ile Lökosit Rolling Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-02-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 16 s
Description: Öğrenin, paralel plaka akış odası kullanarak E-selektin aracılığıyla lökosit rolling olaylarını mikrovasküler endotel hücrelerinde nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem, iltihaplanma ve immün yanıt mekanizmalarını incelemek için güvenilir bir protokol sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Sağlık / Ulusal Kanser Enstitüsü hibe (Charles J. Dimitroff RO1CA118124) Ulusal Sağlık Enstitüleri; bir Amerikan Kanser Derneği Araştırmacı Ödülü, (Charles J. Dimitroff 06-024-01-CSM) tarafından bu proje için finansman sağlanmıştır ve Sağlık / National Institute Artrit ve Kas-iskelet ve Cilt Hastalıkları hibe Ulusal Sağlık Enstitüleri (P30 AR042689 Dr. Thomas S. Kupper, Brigham ve Kadın Hastanesi, Boston, MA).

1. Akış Odası Petriler hBMEC Hazırlama (HBMEC-60 Hücreli) Monolayer <ol><li> Kat 35 37 4 geceleme 20μg/ml fibronektin 2ml (PBS) ° C veya 3 saat x 10mm doku kültürü yemekleri ° C. </li><li> Yemeklerinden fibronektin çözüm aspire edin ve [1,5 x10 5 HBMEC-60 hücre eklemek Hepes &amp; Glutamin, Orta 199% 10 FBS,% 10 İnsan Serum, 5 adet / ml heparin, 1ng/ml rekombinant insan fibroblast büyüme faktörü,% 1 penisilin Streptomisin] çanağı ve onları&gt;% 90 izdiham büyümeye izin. (2 gün sürer) </li><li> Büyüme ortamı aspire ve E-selektin ekspresyonu up-regüle, 4-6 saat için 50ng/mL IL-1β ile taze orta ekleyin. Hücre mono tabakaları artık tahlil haddeleme için hazır. E-selektin fonksiyonunu engellemek için anti-insan E-selektin Moab (klon BBIG-E4 (5D11)) 37 ~ 1hr 20μg/ml eklenebilir ° C. nötralize </li></ol> 2. Akış Odası İnsan Hematopoetik Progenitör KG1a Hücreler hazırlanması <ol><li> İnsan hematopoetik progenitör KG1a hücreleri glutamin RPMI-1640 (1x10 6 hücre / ml) confluency büyüdü ve% 10 FBS /% 1 penisilin-streptomisin ve akış odasına tayininde kullanılmak üzere şişesi doğrudan pipetlenir. </li><li> Hücre sayısı hemasitometre ve sonra da hücre 1 x 10 6 hücre / ml 10mM Hepes (H / H Tampon) ve 2mm CaCl 2 HBSS yeniden askıya alınır kullanılarak hesaplanır. </li><li> Hücreler tayininde kullanımı kadar buz üzerinde saklanır. </li></ol> 3. Mikroskop, Paralel Plakalı Akış Odası ve Şırınga Pompa (Şekil 1) hazırlanması <img src="/files/ftp_upload/old/1009_2009_1_26_7/1009_figure1.png" alt="Şekil 1" width="600" height="409" /> Şekil 1. Paralel Plakalı Akış Odası Analizi İllüstrasyon. Etkin ve tekrarlanabilir hücre analizi için en uygun düzenleme, inverted mikroskop, Harvard Şırınga Pompa, bilgisayar / kamera ve plaka paralel akış odasına yerleştirilir. <ol><li> Şırınga Pompa inverted mikroskop ve güç, güç ve ışık kaynağı açma ve mikroskop 10X Amaç seçin. </li><li> 50ml konik tüp tutucuya yerleştirin ve H / H ve 2mm CaCl 2 ile doldurun. </li><li> 50ml konik tüp altında test tüpü sahibi Yeri 5ml plastik test tüpleri </li><li> (Şırınganın pistonu ve vücut hem de güvenli olduğundan emin olun) Şırınga Pompa şırınga 60ml yerleştirin. </li><li> Stop-horoz 60ml şırınga sonu ve 3-way stop-horoz 5 ml&#39;lik şırınga takmak için 3-yollu takın. </li><li> Giriş tüp, sağ arka sol ve vakum tüpü çıkış tüpü ile mikroskop sahnede Yeri Paralel Akış Odası cihazları (GlycoTech, Inc.) </li><li> Paralel plakalı cihazları sahneye uygun izin vakum tüp vakum ve açık hava valfi takın. Hava valfi (testine akışını odasının vakum etek hava geçirmez ise) kapatın. </li><li> Çıkış boru hattı (soldaki mikroskop), 3-way stop-horoz takın. Aparat HBMEC-60 tek tabaka plaka yerleştirmek için hazırlanmıştır. </li><li> Mikroskop merkezi yerleştirin HBMEC-60 tek tabaka levha ve yeri. </li><li> Vakum ve pozisyonu tek tabaka levha merkezinde olduğu gibi plaka üzerinde akış odasına aparatı açın. </li><li> HBMEC-60 tek tabaka levha üzerine hafifçe akışını odası aparatı alt ve akış odasına aparat aşağı emme izin. (Hava kaçan hiçbir sesler ve bu noktada kauçuk conta sıkıştırmak için odasına basınç uygulamak gerekebilir.) </li><li> Vakum yeri giriş tüp 2mm CaCl 2 ile H / H içeren 50ml konik tüp içine (sağda) kurulmuş oldu. </li><li> Açık 3-way stop-horoz 60ml yer enjektör ve pompa akmasına izin verecek şekilde &quot;pompa modu.&quot; </li><li> Giriş / çıkış hatlarını hava plaka üzerinde hücrelerin kaldırmadan kaldırmak için, sıvı aparatı ulaşmadan hemen önce mL / dakika sonra hızlı bir şekilde 0.5 &#39;e ayarlanmış, Şırınga Pompa emme tüpü doldurmak için 2mL/minute kullanabilirsiniz. Bu özenle kurmak ve plaka tek tabaka kaldırma hava kabarcıkları önlemek başbakan zorunludur. </li><li> 60ml şırınga, akış odası ve Şırınga Pompa içine sıvı hareket görülür sonra astar ve Akış odasının kullanıma hazırdır. Bu set, her hücre giriş çalıştırmak için gereken her yeni plaka için tekrarlanır. </li></ol> 4. Lökosit Rolling Olaylar NIS Elements kullanarak yakalama <ol><li> Masaüstünde açık NIS elemanları. </li><li> Basın canlı görüntü simgesi &quot;oyun&quot;. Otomatik pozlama şimdi plaka daha kolay görmek için izin verir ve odaklama için önemlidir. </li><li> Mikroskop hücre tek tabaka düzgün odaklı olduğunu emin olun. </li><li> 1 kare / saniye ve ayarlamak ışık mikroskop odaklı sonra, yeniden ayarlamak maruz kalma. Görüntü bilgisayarda görünür ve artık görülebilir düşük ışık seviyesi nedeniyle mikroskop vizör gerekir. Işık histogram sonra reklam olabilirarka plan maruz kaldırmak veya hücre netliğini artırmak için justed. </li><li> Film çekimi için ideal bir görüntü elde etmek 2X2 bin veya Canlı Bin tıklayın </li><li> Menü çubuğunda &quot;Makro&quot; tıklayın ve &quot;Limana yazmak&quot; seçeneğini seçin port &quot;COM3&quot; ve &quot;açık&quot;. (Bu liman Şırınga Pompa ile koordine etmek için açılır. </li><li> Pipet KG1a hücre süspansiyonu giriş boru hattı yakınında 5ml test tüpüne 1 ml ve daha sonra giriş boru hattı test tüpünün dibine yerleştirin. </li><li> Menü çubuğu, &quot;Yakala&quot;, &quot;time-lapse edinimi.&quot; </li><li> Yeni bir menü açılır. Protokol süren 210 saniye seçin, bu HBMEC-60 Hücreler üzerinde yuvarlanan programın uzunluğu. (Her bir aşama, pompa protokol süresi boyunca her saniye bir resim çekmek için programlanmıştır. Ayrıca, pompa başlatmak için COM3 bağlantı noktası üzerinden bir komut göndermek için ayarlanır.) Zaman atlamalı kesintiye uğrarsa, pompa durmayacak kendi başına ve sıfırlanması gerekir. Canlı görüntü dönmek için İptal tuşuna basın. </li><li> Kılavuzuna göre &quot;Program Modu&quot; Şırınga Pompa Seti. (Program modu, özel akış oranları (yani kayma stres düzeyleri) odanın içinde aktarılırdı ve HBMEC-60 hücre tek tabaka üzerinde KG1a hücre etkileşimleri dikte manuel programlama için sağlar.) HBMEC Hücreler üzerinde yuvarlanan KG1a hücre ayarları 4.2 dynes 45 s / cm 2, 0.3 dynes 60 sn / cm 2 ve kademeli artışlar her 15 sn maksimum 4.2 dynes / cm 2 </li><li> Odasında duvar kayma gerilmesi (W st) aşağıdaki denkleme göre hesaplanır: G st / ml hacimsel debisi Q μ medyanın tahmini viskozite (0,0076 P) = 6μQ / 2 b, s, kanal cm yüksekliği (conta kalınlığı) (0,03 cm), ve b cm (0.5 cm) kanal genişliği. Akış hızları, Şırınga Pompa program modunu kullanarak düzenlenmiştir. </li><li> Mikroskop ve bilgisayar artık zaman atlamalı fotoğraf çekmek için hazır. Basın bilgisayarda veri elde başlamak için &quot;run start&quot;. Program çalışırken, KG1a hücreleri içeren test tüpü (hiç hava kabarcığı olmadığından emin olun) giriş / çıkış boru tam orta tutmak için ortam eklemek için emin olun. </li></ol> 5. Terminal Sialylation ve E-selektin aracılığı ile KG1a Hücre 5 için Yüzey Glikoprotein Bağımlılığı. (5,1-5,5, Video Klipler Şekil 2) Rolling <ol><li> KG1a hücre üzerinde yuvarlanan bir Assaying olmayan uyarılmış HBMEC-60 hücreleri (Negatif kontrol) KG1a hücreleri hazırlanan ve üzerinde akış odasına infüze edildi canlı olmayan IL-1β-uyarılmış HBMEC-60, yukarıda açıklandığı gibi . </li><li> HBMEC-60 hücreleri IL-1β ile önceden tedavi üzerinde yuvarlanan KG1a hücre Assaying KG1a hücreleri (E-selektin bağımlılık kontrolü) akış odasına üzerine hazırlanan ve infüze edildi canlı IL-1β uyarılmış yukarıda açıklandığı gibi HBMEC-60. </li><li> IL-1β ve sonra nötralizan anti-insan E-selektin Moab (E-selektin bağımlılık kontrolü) KG1a hücreleri canlı üzerinden akış odasına hazırlanan ve infüze edildi IL-ön-tedavi HBMEC-60 hücreleri üzerinde yuvarlanan KG1a hücre Assaying Yukarıda açıklandığı gibi, anti-insan E-selektin Moab nötralize 1β-uyarılmış HBMEC-60 ön işlem. </li><li> IL-1β-uyarılmış HBMEC-60 haddeleme sialidase sindirilir KG1a hücre Assaying. 37 1hr için nöraminidaz 0.1U/ml Vibrio Cholerae ° C ile ön tedavi KG1a hücreleri akış odasına üzerine hazırlanan ve infüze edildi canlı IL-1β-uyarılmış yukarıda açıklandığı gibi HBMEC-60. </li><li> IL-1β-uyarılmış HBMEC-60 haddeleme proteaz sindirilir KG1a hücre Assaying. Proteaz ön işlem KG1a hücreleri, 37 1hr için 0.2U/ml Bromelain ° C, akış odasına üzerine hazırlanan ve infüze edildi canlı IL-1β ile uyarılmış, yukarıda açıklandığı gibi HBMEC-60. </li></ol> 6. NIS-Elemanları-Yakalanan KG1a KG1a Hücre Hücreler ve Grafikleme Rolling Veri Analizi <ol><li> Zaman dizisi elde edildikten sonra, verileri kaydetmek. </li><li> Menü çubuğunda &quot;ölçü&quot; sekmesine gidin ve &quot;eşik değerini tanımlamalıyız.&quot; Böylece istenilen hücrelerin kırmızı renkli barlar taşıyın. &quot;Tüm görüntüleri&quot; sonra &quot;Tamam&quot; seçeneğini seçin. Tüm zaman atlamalı sırası görünür kırmızı haddeleme hücreleri ile modifiye edilmelidir. </li><li> &quot;Tedbir&quot; ve seçmek için git &quot;kısıtlamalar.&quot; (Kullanıcı haddeleme hücreleri temsil etmemektedir eşiklenir nesneler dışlamak için izin Kısıtlamalar Bu öncelikle HBMEC-60 monolayer tarafından oluşturulan arka plan) &quot;alan&quot; ve haddeleme hücreleri için alan için giriş minimum ve maksimum değerler seçin. &quot;Dairesellik&quot; uzama &quot;için bu adımı yineleyin.&quot; </li><li> &quot;Tedbir&quot; i seçin ve &quot;kısıtlamalar kullanarak ikili oluşturmak&quot; seçeneğini seçin ve haddeleme hücreleri NIS-Elements yazılımı tanıma HBMEC-60 hücreleri, tek tabaka optimize etmek için kısıtlama değerleri ayarlamak. </li><li> &quot;Ölçmek&quot;, &quot;Alan veri&quot; seçin ve ardından, &quot;reset veri&quot; seçmek için geri dönün. Bu menüyü kapatın. </li><li> &quot;Ölçü&quot; ve se dön&quot;tarama alanı&quot; bilirsiniz. </li><li> Aç &quot;Ölçü&quot;, &quot;Alan data&quot;, &quot;sayı veya Nesneler&quot; seçin ve daha sonra &quot;tüm alanlarda&quot; seçin ve Microsoft Excel&#39;e veri ihracat. </li><li> Sonraki veri toplama için NIS-Elements cep satın hazırlamak için &quot;açık veri&quot; seçin. </li></ol> Sonuçlar: <img src="/files/ftp_upload/old/1009_2009_1_26_8/1009_figure3.png" alt="Şekil 3" width="600" height="382" /> Şekil 3. Paralel Plakalı KG1a Hücreler E-selektin-Cilt Faaliyet Akış Odası Analizi. Sialidase veya proteaz ile tedavi KG1a hücreleri HBMEC-60 hücreleri IL-1β ile önceden tedavi mono tabakaları verimliliği haddeleme için analiz edildi. Negatif kontrolü haddeleme deneyler de KG1a hücreli olmayan IL-1β-uyarılmış HBMEC -60 hücreleri veya haddeleme analiz ederek yapılmıştır IL-1β uyarılan anti-insan E-selektin Moab (5D11) nötralize ile tedavi HBMEC-60 hücre. Hücre haddeleme frekansları üç nüsha olarak yapılan ve NIS-Elements yazılımı ile analiz edildi. (* İstatistiksel anlamlılık p &lt;0,001) Kayma fizyolojik stres koşulları altında endotel hücre etkileşimleri - video tabanlı olan bu raporda, lökosit analiz etmek için nasıl bir görsel tasviri. E-selektin, lökosit tethering aracılık ve haddeleme, integrinler ve hyaluronan reseptörleri gibi reseptörleri aracılığıyla ikincil daha istikrarlı bağlayıcı faaliyetlerinin taahhüt yapışkan bir davranış için gerekli ligandlar - Özellikle, E-selektin rolünü analiz. Ters bir mikroskop, Harvard Şırınga Pompa, video kamera ve bilgisayar / hücre satın alma donanım ile kullanmak için adapte paralel-plaka akış odasına kullanarak deneyler E-selektin ligand neyin yürütülen + KG1a hücreleri bizim lökosit modeli ve hBMEC hücreleri olarak olarak (HBMEC- 60), pro-inflamatuar sitokin IL-1β ile uyarılan E-selektin + insan endotel hücre modeli (1-6) olarak kullanılmıştır. Daha önce de bildirildiği gibi, biz sağlam KG1a hücre haddeleme gözlenen IL-1β-uyarılmış HBMEC-60, E-selektin-bağımlı bir şekilde (Şekil 3) (KG1a hücre haddeleme ile karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı fark kayma stres seviyeleri aralığında hücreleri IL-1β uyarılmış HBMEC-60 hücreleri). IL-1β-HBMEC-60 hücreleri uyarılır veya haddeleme KG1a hücre oluşan negatif kontrol, IL-1β uyarılan anti-insan E-selektin mAb ile HBEMC-60 hücreleri tedavi öncesi bağımlılığını göstermek için paralel olarak yapılmıştır yuvarlanma aktivite için sitokin uyarımı ve E-selektin ekspresyonu (Şekil 3). Vibrio cholerae ön işlem KG1a hücrelerinin Ayrıca, haddeleme analiz nöraminidaz (sialidase) veya bromelain, yüzey E-selektin glikoprotein ligand sindirerek bilinen bir non-spesifik proteaz, E-selektin ligand için terminal sialik asit artıkları ve yüzey glikoprotein önemini vurguladı aktivitesi (2,3).

<ol><li>Dimitroff, C. J., Kupper, T. S., Sackstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+leukocytic+migration+to+inflamed+skin+with+a+novel+fluorosugar+modifier+of+cutaneous+lymphocyte-associated+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Prevention of leukocytic migration to inflamed skin with a novel fluorosugar modifier of cutaneous lymphocyte-associated antigen.</a> J. Clin. Invest. 112, 1008-1018 Forthcoming.</li>
<li>Dimitroff, C. J., Lechpammer, M., Long-Woodward, D., Kutok, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rolling+of+human+bone-metastatic+prostate+tumor+cells+on+human+bone+marrow+endothelium+under+shear+flow+is+mediated+by+E-selectin%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Rolling of human bone-metastatic prostate tumor cells on human bone marrow endothelium under shear flow is mediated by E-selectin.</a> Cancer Res. 64, 5261-5269 (2004).</li>
<li>Dimitroff, C. J., Descheny, L., Trujillo, N., Kim, R., Nguyen, V., Huang, W., Pienta, K. J., Kutok, J. L., Rubin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+leukocyte+E-selectin+ligands%2C+P-selectin+glycoprotein+ligand-1+and+E-selectin+ligand-1%2C+on+human+metastatic+prostate+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Identification of leukocyte E-selectin ligands, P-selectin glycoprotein ligand-1 and E-selectin ligand-1, on human metastatic prostate tumor cells.</a> Cancer Res. 65, 5750-5760 (2005).</li>
<li>Descheny, L., Gainers, M. E., Walcheck, B., Dimitroff, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ameliorating+Skin-Homing+Receptors+on+Malignant+T+cells+with+a+Fluorosugar+Analog+of+N-acetylglucosamine%3A+P-selectin+Ligand+is+a+More+Sensitive+Target+than+E-selectin+Ligand%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Ameliorating Skin-Homing Receptors on Malignant T cells with a Fluorosugar Analog of N-acetylglucosamine: P-selectin Ligand is a More Sensitive Target than E-selectin Ligand.</a> J Invest Dermatol. 126 (9), 2065-2073 (2006).</li>
<li>Gainers, M. E., Descheny, L., Barthel, S. B., Liu, L., Wurbel, M., Dimitroff, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin-homing+receptors+on+effector+leukocytes+are+differentially+sensitive+to+glyco-metabolic+antagonism+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunology%22%5BJournal%5D)">Skin-homing receptors on effector leukocytes are differentially sensitive to glyco-metabolic antagonism in allergic contact dermatitis.</a> J. Immunology. 179 (12), 8509-8518 (2007).</li>
<li>Rood, P. M., Calafat, J., von dem Borne, A. E., Gerritsen, W. R., van der Schoot, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immortalization+of+human+bone+marrow+endothelial+cells%3A+characterisation+of+new+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Immortalization of human bone marrow endothelial cells: characterisation of new cell lines.</a> Eur J Clin Invest. 30 (7), 618-629 (2000).</li>
</ol>

Yazarlar, faiz veya açıklamalar herhangi bir çakışma var.

Paralel plakalı akış segment analizi lökosit eğitim için kullanılan in vitro test sisteminde özel bir benzer kayma gerilmesi koşulları altında endotel yapışkanlı etkileşimleri bir post-kapiller venule yüzeyinde aktarılmamaktadır. E-selektin, lökosit tethering aracılık ve aktif mikrovasküler endotel yüzey üzerinde yuvarlanan ligandlar - burada bizim görsel sunum tasvir, E-selektin rolünü araştırmak için bu sistemin değerini göstermek. Ayrıca, proteaz, glycosidase ve bu sistem içinde E-selektin ve ligandlar rol nedenlerine açıklık için engelleme antikor tedavileri uygulamanın ortaya koymaktadır. Bu analizler son derece tekrarlanabilir ve E-selektin eğitim için deneysel bir temelini oluşturan yardımcı in vivo olarak E-selektin ligand fonksiyonu. Sitokin aktive mikrovasküler endotel hücreleri (hBMEC veya insan umbilikal ven veya dermal mikrovasküler endotel hücreleri) mono tabakaları ile hücre adezyon okuyan yanı sıra, yazı bir substrat olarak rekombinant E-selektin, insan ya da arıtılmış E-selektin-Ig kimerik molekülleri kullanılarak yapılabilir hücre adezyon. Diğer yapıştırıcı etkileşimleri aracılığıyla lökosit (P) (L)-selektin ve trombosit-selektin de paralel plakalı akış odasına teknolojisi kullanılarak test edilmelidir. Tip hücre tek tabaka / protein substrat değiştirerek ya da giriş lökosit / selektin transfectant hücre modelleri, araştırmacılar, fizyolojik kayma gerilmesi koşullar altında bu etkileşimlerin rolü eğitim görebilirsiniz.

<table><tbody><tr><td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6178-500ML</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Life Technologies bünyesindeki GIBCO</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>0,5 M EDTA</td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>15575-038</td><td></td></tr><tr><td>1M HEPES</td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>15630</td><td></td></tr><tr><td>Paralel Plakalı Akış Odası Kiti</td><td>GlycoTech</td><td>31-001</td><td></td></tr><tr><td>PHD2000 Programlanabilir Şırınga Pompası</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PHD 2000</td><td></td></tr><tr><td>35x10mm Doku Kültür Kabı</td><td>BD Biosciences</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>İnsan plazmasından elde edilen fibronectin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>86088-83-7 F2006-2MG</td><td></td></tr><tr><td>İnterlökin-1, İnsan; Rekombinant</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9401-5UG</td><td></td></tr><tr><td>HBSS (Hank Dengeli Tuz Çözeltisi)</td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>14170</td><td></td></tr><tr><td>HEPES içeren Medium 199 &amp;amp; Glutamin</td><td>Invitrogen</td><td>12320-039</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Serumu</td><td>Innovative Research, Inc.</td><td>IPLA-SER1</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Abraxis BioScience</td><td>504011</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan fibroblast büyüme faktörü</td><td>R&amp;R&D Systems</td><td>233-FB</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin</td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Plastik Deney Tüpleri</td><td>BD Biosciences</td><td>352008</td><td></td></tr><tr><td>Anti-human E-selectin klonu BBIG-E4(5D11)</td><td>R&amp;R&D Systems</td><td>BBA16</td><td></td></tr><tr><td>Bromelain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-4882</td><td></td></tr></tbody></table>

mikrovasküler endotel fizyolojik e-selektin aracılığı ile lökosit rolling analizi

Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium

E-selektin, lökosit kutanöz, kemik ve iltihaplı dokulara dolaşan işe başlatmak yardımcı mikrovasküler endotel hücreleri üzerinde bir tip-1 membran protein. E-selektin ekspresyonu, deri ve kemik mikrodamarlar kurucu ve iltihaplı dokularda / IL-1α ve TNF-α, mikrodamarlar gibi pro-inflamatuar sitokinler, indüklenebilir. Bu lektin reseptör aracılık, karakteristik bir haddeleme davranış sonucu dolaşan lökositlerin, karbonhidrat karşı reseptör ligandlar ile zayıf bağlayıcı etkileşimleri. Çünkü bu etkileşimlerin daha istikrarlı bir yapışkan olaylar ve diapedesis aktivite, lökosit yuvarlanma faaliyet karakterizasyonu ve E-selektin, lökosit ligand belirlenmesi öncesinde, lökosit kaçakçılığı ve inflamasyon çalışmaları ve anti-inflamatuar terapötikler geliştirme (1-5) büyük hedefler var . Bu raporun amacı, E-selektin, E-selektin ligand etkileşimleri fizyolojik kan akışını koşullar altında çalışmak için en yaygın olarak kullanılan teknoloji görsel, kapsamlı bir tanım vermektir. Harvard Cilt Hastalıkları Araştırma Merkezi ile birlikte laboratuar dijital görselleştirme ve yeni kayıt yazılımı, NIS-Elements eşliğinde bir devlet-the-art paralel plaka akış odasına aparat kullanır. Bu teknoloji gerçek zamanlı olarak ekranda görselleştirme yanı sıra bir video formatında kayıt haddeleme aktivite için yapışma olayları analiz etmek için izin verir. Frekans, kayma direnci haddeleme ve bağlayıcı / tethering verimliliği gibi hücre adezyon parametreleri, bir Excel elektronik tablo ihraç ve istatistiksel analize tabi, NIS-Elements yazılımı ile hesaplanır. Burada sunulan gösteri, paralel plaka akış odası, canlı, insan kemik iliği endotel hücreleri (hBMEC) bağımlı E-selektin, lökosit yuvarlanma faaliyet araştırmak için kullandı. Ölümsüzleştirdi hBMEC hücre hattı HBMEC-60 hücreleri, endotel hücre modeli (6) olarak kullanılır iken, E-selektin ligand yüksek düzeyde bir ifade hematopoetik progenitör İnsan KG1a hücreler, bizim lökosit model olarak kullanılmıştır. Akış odasında, doğal E-selektin ekspresyonu neden ve simüle HBMEC-60 hücrelerinde IL-1 ile aktive edildi. Bizim video sunumu paralel plaka akış analizi proteaz veya glycosidase uygulamak suretiyle tespit edilebilir akış odasında fizyolojik E-selektin aracılı lökosit yuvarlanma faaliyetleri ve lökosit E-selektin ligand (lar) bu fonksiyonel karakterizasyonu eğitimi için uygun bir yöntem gösterdi sindirimler.

Bu rapor, görsel bir tasviri lökosit leşimlerini kayma fizyolojik stres altında çalışmak için paralel plaka akış segment analizi sağlar. Bu yöntem, tetik lökosit endotel hücre yüzeyleri üzerinde yuvarlanan E-selektin, endotel (E)-selektin ve lökosit ligandlar rolünü araştırmak için özellikle yararlıdır.

Mikrovasküler Endotel Fizyolojik E-selektin aracılığı ile Lökosit Rolling Analizi

E-selektin, dolaşımdaki lökositlerin deri, kemik ... bölgelerine çekilmesinin başlatılmasına yardımcı olan, mikrovasküler endotel hücreleri üzerinde bulunan tip-1 bir membran proteinidir.

Bu video, endotelyal hücre yüzeylerinde lökosit yuvarlanmasını tetikleyen faktörlerin incelenmesi için paralel plak akış odası analizini göstermektedir. Endotelyal hücre monokatmanları, S selektin ekspresyonunu artırmak için proinflamatuar sitokin IL one beta ile stimüle edilir. Ardından paralel plak akış odası endotelyal hücrelerin üzerine yerleştirilir ve S selektin pozitif lökositler monokatman üzerinden infüze edilir.Haznedeki hücresel etkileşimler, böylece postkapiller lökosit adezyonundakine benzer bir kayma stresine maruz bırakılır. Yuvarlanma olayları, NIS elementleri kullanılarak yakalanır, sayılır ve E-selektin bağımsızlığı için analiz edilir. Merhaba, ben George Weis; Brigham and Women's Hospital, Harvard Tıp Fakültesi, Dermatoloji Bölümü'nde Dr. Charles de Nitro'nun laboratuvarındayım.Bugün sizlere, fizyolojik kan akış koşulları altında insan lökositlerinin insan kemik iliği endotel hücrelerine yapışmasında E selektin ve E selektin ligandlarının rolünü analiz eden bir prosedürü göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürü, kan damarlarının iç yüzeyini döşeyen endotel hücrelerine beyaz kan hücrelerinin veya metastatik kanser hücrelerinin yapışmasını başlatan hücre yüzey moleküllerinin rolünü incelemek için kullanıyoruz. Bu adezyon olayı, bir bowling topunun pistte yuvarlanmasına benzer bir yuvarlanma davranışı ile karakterize edilir.Hadi başlayalım. Bu prosedürdeki ilk adım, akış hücresini kaplayacak olan endotel hücrelerini hazırlamaktır. Bu protokolde, insan kemik iliğinden türetilmiş H-B-M-E-C 60 hücreleri kullanılmaktadır.Mikrovaskülatür kültür kapları, hazırlık amacıyla önceden fibronectin ile kaplanmalıdır; bunun için 35 ml doku kültürü kaplarını, ml başına 20 µg fibronectin içeren PBS ile inkübe edin. Bunlar, 4 °C'de gece boyunca veya 37 °C'de üç saat boyunca inkübe edilebilir. H-B-M-E-C 60 hücrelerini medium 1 99 içerisinde süspanse edin ve her kapta 10⁵ hücre olacak şekilde ekim yaparak kültürleri %90'ın üzerinde konfluense ulaşana kadar büyütün.E-selectin ve ekspresyonunu yukarıye düzenlemek yaklaşık iki gün sürecektir; büyüme ortamını aspire edin ve 50 ng/mL IL-1β içeren taze ortam ekleyip dört ila altı saat inkübe edin. Hücre tek tabakaları artık akış odası analizi için hazırdır. Ek HBMEC-60 hücre plakaları, IL-1β ile stimüle edilebilir ve 37 °C'de bir saat boyunca 20 µg/mL nötralize edici anti-human e-selectin antikoru ile muamele edilebilir.Bu, e selektinin fonksiyonel ekspresyonu için kontrol sağlayacaktır. Ardından, e selektin pozitif lökositleri hazırlayın. Bunlar, insan hematopoetik progenitör hücreleri olan KG-1a hücreleridir.Bunlar, RPMI 1640 içerisinde konfluense ulaşana kadar veya mililitrede 10⁶ hücre yoğunluğuna gelene kadar süspansiyon kültüründe büyütülür. KG-1A hücreleri doğrudan kültürden pipetlenip hemositometre ile sayılabilir. Hücreleri, 10 mM HEP veya 2 mM kalsiyum klorür içeren HH tamponu eklenmiş HBSS içerisinde mililitrede 10⁶ hücre olacak şekilde yeniden süspanse edin.Hücreleri analiz edilene kadar buz üzerinde saklayın. Sonraki adımlar mikroskobun, paralel plakalı akış odasının ve şırınga pompasının hazırlanmasını içerir. Analiz için mikroskobu ve şırınga pompasını açın.Mikroskoptan 10x objektifi seçin. Tutucuya 50 mililitrelik konik tüp yerleştirin ve içini iki milimolar kalsiyum klorür içeren HH tamponu ile doldurun. Ardından, alt taraftaki tutucuya beş mililitrelik plastik test tüpleri yerleştirin.Ardından, şırınga pompasına 60 mL'lik bir şırınga yerleştirin. Hem pistonun hem de şırınga gövdesinin sabitlendiğinden emin olun. 60 mL'lik şırınganın ucuna üç yollu bir musluk ve ardından bu musluğa 5 mL'lik bir şırınga takın.Paralel akış odası düzeneğini; giriş tüpü sağda, çıkış tüpü solda ve vakum tüpü arkada olacak şekilde mikroskop tablasına yerleştirin. Borular vakuma bağlandıktan sonra, paralel plaka düzeneğinin tablaya yapışmasını sağlamak için hava valfini açın. Bu işlem, akış odasındaki vakum eteğinin hava sızdırmaz olup olmadığını test edecektir.Sızdırmazlık onaylandığında, hava valfini kapatın. Şimdi çıkış tüp hattını, şırıngaya önceden bağlanmış olan üç yollu musluğa takın. Düzenek, H-B-M-E-C 60 hücrelerinin üzerine yerleştirilmeye hazır hale gelmiştir.Vakumu açın, akış odası düzeneğini yavaşça plakanın üzerine indirin ve düzeneğin vakumla yapışmasını sağlayın. Hava kaçağına dair herhangi bir ses gelmemelidir; bu aşamada, kauçuk contayı sıkıştırmak için odaya basınç uygulamanız gerekebilir. Vakum kurulduktan sonra, giriş tüpünü 50 mililitre konik tüpün içine yerleştirin.Üç yollu musluğu 60 mil şırınga konumuna getirin ve plakadaki hücreleri yerinden kaldırmadan hatlardaki havayı tahliye etmek için pompayı pompa moduna alın. Giriş tüpünü doldurmak için dakika başına iki mil olarak ayarlanan şırınga pompasını kullanın. Ardından hızla dakika başına 0,5 mil değerine ayarlayın.Sıvı düzeneğe ulaşmadan hemen önce, tek tabakayı plakadan kaldırabilecek hava kabarcıklarını önlemek için kurulumun dikkatle hazırlanması kritiktir. Sıvı 60 mil şırıngaya girdiğinde, akış odası ve şırınga pompası hazır hale gelmiş olur. Şimdi, giriş, çıkış ve vakum hatlarının her birinin üzerine bir parça bant yapıştırarak akış odasını sahneye sabitleyin.Bu, veriler görselleştirilirken ve toplanırken görüş alanının sabit kalmasını sağlar. Akış odası artık kullanıma hazırdır. Bu adımlar, her hücre girişi çalışması ve her yeni plaka için tekrarlanmalıdır.Lucas bölgesi yuvarlanma olaylarını yakalamak için masaüstündeki NIS elements programını açın ve canlı görüntü için oynat simgesine basın. Otomatik pozlama, plakayı görmenizi ve görüntüyü odaklamanızı sağlayacaktır. Mikroskobun odak ayarını manuel olarak yaparak, hücre monotabakasının düzgün şekilde odaklandığından emin olun.Görüntü netlendiğinde, pozlamayı saniyede bir kareye sıfırlayın ve mikroskoptaki ışığı ayarlayın. Görüntü bilgisayarda görünmeli ve artık mikroskopta görünmemelidir. Ardından, arka plan pozlamasını gidermek veya hücre netliğini artırmak için ışık histogramı ayarlanabilir; video kaydı için ideal bir görüntü elde etmek amacıyla "two by two bin" veya "live bin" seçeneğine tıklayın.Menü çubuğundaki macro seçeneğine tıklayın ve sağ taraftan port seçimine giderek com 3 portunu seçip açın. Bu işlem, şırınga pompasıyla koordinasyon sağlamak için portu açar. Akış odası artık KG1-A hücreleri ile infüze edilmeye hazırdır; giriş boru hattının yanındaki 5 ml'lik test tüpüne 1 ml KG1-A hücresi süspansiyonu pipetleyin.Ardından giriş hattını deney tüpünün tabanına yerleştirin. Menü çubuğuna gidin ve capture (yakalama) ile time lapse acquisition (zaman ayarlı görüntüleme) seçeneklerine tıklayın. 210 saniye süren protokolü seçin.Bu, H-B-M-E-C 60 hücreleri üzerinde yuvarlanma deneyi için programın uzunluğudur. Her faz, pompa protokolü süresince her saniyede bir fotoğraf çekecek şekilde programlanmıştır. Ayrıca, pompayı başlatmak için comm three portu üzerinden bir komut gönderecek şekilde ayarlanmıştır.Şırınga pompasını, belirli akış hızlarının manuel olarak programlanmasına olanak tanıyan program moduna ayarlayın. Bu işlem, hazne içindeki kayma gerilimi seviyelerini belirleyecek ve H-B-M-E-C 60 hücreleri üzerindeki KG one A hücre etkileşimlerini düzenleyecektir. Bu etkileşimler için ayarlar, 45 saniye boyunca santimetrekare başına 4,2 dine olarak belirlenmiştir.Santimetrekare başına 0,3 dyne değeri 60 saniye boyunca uygulanır ve ardından her 15 saniyede bir, maksimum santimetrekare başına 4,2 dyne değerine kadar kademeli olarak artırılır. Mikroskop ve bilgisayar artık zaman ayarlı fotoğraf çekimi yapmaya hazırdır. Programı çalıştırırken veri toplamaya başlamak için bilgisayar üzerinden başlat düğmesine basın.Giriş çıkış borularının besiyeri ile dolu kalmasını sağlamak ve sisteme hava kabarcıklarının girmesini önlemek için KG one A hücrelerini içeren tüpe besiyeri eklediğinizden emin olun. Zaman ayarlı çekim (time lapse) kesintiye uğrarsa, pompa kendiliğinden durmaz ve sıfırlanması gerekir. Canlı görüntüye dönmek için iptal seçeneğine basın.Uyarılmamış bir endotel hücre monokatmanı, bu deney için negatif kontrol olarak kullanılır. Bunu gerçekleştirmek için, E-selektin bağımsızlığını kontrol etmek amacıyla, işlem görmemiş H-B-M-E-C 60 hücrelerinin üzerindeki akış odasına KG-1A lökositleri infüze edin; ardından etkiden bağımsızlığı daha fazla kontrol etmek için endotel hücre monokatmanını IL-1β ile uyarın ve lökositleri bu hücrelerin üzerine infüze edin. H-B-M-E-C 60 hücrelerini önce IL-1β ile, ardından anti-insan S-selektin antikoru ile tedavi edin.Ardından, bu hücreler üzerindeki lökosit yuvarlanma olaylarını analiz edin. Hücre yuvarlanması sadece S selektin tarafından değil, aynı zamanda lökosit hücre yüzeyindeki sialik asit kalıntıları tarafından da belirlenir. Bunu göstermek için, KG one A hücrelerini 37 °C'de bir saat boyunca 0,1 units/ml nöraminidaz ile sindirin.Ardından, stimüle edilmiş H-B-M-E-C 60 hücreleri üzerindeki yuvarlanma olaylarını analiz edin. Lökosit yüzeyindeki glikoproteinler de hücre yuvarlanması için önemlidir. Bu durum, KG one A hücrelerinin 37 °C'de bir saat boyunca mil başına 0,2 ünite bromelan ile işlenmesi ve ardından akış odasına infüze edilmesiyle gösterilebilir.Zaman serisi elde edildikten sonra, veriler analiz için hazır hale gelir. Verileri kaydedin, menü çubuğundaki measure sekmesine gidin ve defined threshold seçeneğini seçin. İstenilen hücreler kırmızıya boyanana kadar çubukları kaydırın, tüm görüntüleri seçin ve ardından okay düğmesine tıklayın; artık tüm zaman atlamalı dizi, görünür kırmızı yuvarlanan hücrelerle modifiye edilmiş olmalıdır.Ölçüm (measure) kısmına gidin ve kısıtlamaları (restrictions) seçin. Bu, kullanıcının yuvarlanan hücreleri temsil etmeyen eşik nesnelerini hariç tutmasını sağlar. Bunlar temel olarak H-B-M-E-C 60 monokatmanı tarafından oluşturulan arka plandır; seçili alan için yuvarlanan lökositler için ideal olan minimum ve maksimum değerleri girin.Bu adımı uzama ve dairesellik için tekrarlayın. Ölçüm seçeneğini belirleyin ve ardından kısıtlamaları kullanarak ikili oluştur seçeneğini belirleyin. Önceki adımda ayarlanan aynı kısıtlama değerleri, şimdi endotelyal hücre monokatmanındaki yuvarlanan lökositleri tanımak için NIS elements yazılımını optimize etmek amacıyla kullanılacaktır. Ölçüm kısmına geri dönün, alan verilerini seçin ve ardından verileri sıfırla seçeneğini belirleyin.Menüyü kapatın, ölçüme geri dönün ve tarama alanını seçin, ölçüm alanı verilerini açın ve nesne sayısını seçin. Ardından tüm alanları seçin ve verileri Microsoft Excel'e aktarın. Son olarak, verileri temizle seçeneğini belirleyin.NIS elementleri artık daha fazla veri toplama için hazırdır. Bu temsili veriler, lökosit endotel hücre etkileşimlerinin fizyolojik kayma stresine nasıl tepki verdiğini, özellikle adeziv ligand E selektinin rolünü test ederek göstermektedir.Endotel hücreleri IL-1β ile önceden stimüle edildiğinde güçlü lökosit yuvarlanması gerçekleşir. Bu sonucun stimüle edilmemiş kontrol grubu ile karşılaştırılması, hücre yuvarlanmasının sitokin stimülasyonuna bağlı olduğunu açıkça göstermektedir. HBMEC-60 hücrelerinin IL-1β ve ardından anti-insan E-selektin antikoru ile işlenmesi, hücre yuvarlanmasının spesifik olarak E-selektine bağlı olduğunu ortaya koymaktadır.Bu analiz, diğer parametreleri test etmek için de kullanılabilir. Örneğin, stimüle edilmiş hücreler bir sase veya brolin ile ön işlemden geçirildiğinde, sonuçlar daha az belirgin hale gelmektedir. Bu veriler, terminal sialik asit kalıntılarının yanı sıra hücre yüzey glikoproteinlerinin önemini vurgulamaktadır.S selektin ligand aktivitesi için; lökositler ile endotel hücreleri arasındaki E selektin tabanlı adeziv etkileşimlerin, lökositlerin kandan ayrılıp dokulara girdiği dolaşım sistemi bölgesi olan postkapiller venül ile benzer kuvvet koşulları altında nasıl analiz edileceğini gösterdik. Bu prosedürü uygularken, ilgili selektinin ve ligandının bu analiz sistemindeki gerekliliğini doğrulamak için uygun bloklama antikoru veya enzimatik işlem kontrolünün kullanılmasını hatırlatmak önemlidir. Hepsi bu kadar.İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

analysis-physiologic-e-selectin-mediated-leukocyte-rolling-on

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz asimetrik reseptör-desenli yüzeyler üzerinde hücre haddeleme yörüngelerini gözlemlemek ve analiz etmek için bir protokol açıklar. Ortaya çıkan veriler etiket ücretsiz cep ayırma ve analiz için reseptör-desenli yüzeylerin mühendisliği için yararlıdır.

Asimetrik Reseptör Desenler Hücre Rolling Yörüngeler incelenmesi

Bu makale ilk umblikal damarlar, insan endotel hücreleri izole etmek için bir yordam açıklanır ve sonra akış koşullarında nötrofil göçü incelemek için bu hücreleri nasıl kullanılacağını gösterir. Camın optik karakteristikler ile bir polimer elde edilen bir düşük hacimli akış odası kullanılarak, nadir hücre popülasyonlarının canlı-hücre flüoresan görüntüleme da mümkündür.

Akış Koşullarında İnsan umbilikal ven endotel hücreleri ve nötrofil Transmigration Çalışmaları Kullanılması İzolasyonu

Bu çalışma, önemli fizyolojik olarak ilgili kesme akımı altında, hücre haddeleme çalışmalar artırıp, çok oyuklu bir plaka mikroakışkan sistemi kullanılır. Silsilesini ve hastalarda hücre ekzojen popülasyonlarının sistemik olarak uygulanmasını takiben hücre hedeflemesi önemini homing çok adımlı, hücre haddeleme önemi göz önüne alındığında, bu sistem, hücre bazlı tedaviyi geliştirmek için bir tarama platform olarak potansiyel sunmaktadır.

Sistematik Analizi In Vitro Hücre Rolling

Yapışma deneylerinde kullanılan akış odaları tipik olarak doğrusal akış yollarından oluşur ve bir kesme yapışma haritası oluşturmak için farklı akış hızlarında birden fazla deney gerektirir.  SynVivo-SMN, mikrolitre hacimleri kullanan tek bir deney kullanarak kesme yapışma haritasının oluşturulmasını sağlar ve bu da zamandan ve sarf malzemelerinden önemli ölçüde tasarruf sağlar.

SynVivo Sentetik Mikrovasküler Ağları kullanma Kesme Yapışma Haritası Üretimi

Bizim rapor fizyolojik akış koşulları altında prostat kanserinde CTC / EC etkileşimleri görselleştirmek ve analiz etmek için eşsiz bir yöntem açıklanır.

Hastalar ve İnsan endotel hücrelerinden türetildiği Prostat dolaşımdaki tümör hücrelerinin arasında E-selektin aracılı Etkileşimleri gözlemleyin vitro Yöntemi

akışından lökositleri için iltihaplı endotel kabiliyeti mezenkimal stromal hücreler tarafından düzenlenir. Biz akışından nötrofil işe değerlendirmek ve mezenkimal stromal hücreler bu süreci düzenleyen oynadığı rolü incelemek için kullanılabilir birincil insan hücreleri içeren iki in vitro model tarif.

Akış adlı lökositlerin üzerine Stromal hücreler Etkilerinin İncelenmesi

Farelerde mezenter damarlarının intravital mikroskopisinin bu basitleştirilmiş uygulaması, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini gözlemlemek için farklı inflamasyon modellerinde kullanılabilir.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Vasküler endotel sıkıca lökosit işe alım denetler. Yetersiz lökosit ekstravazasyonu insan inflamatuar hastalıklar için katkıda bulunur. Bu nedenle, roman yasal unsurları endotel harekete geçirmek için arama enflamatuar bozuklukları için geliştirilmiş terapiler tasarlamak gereklidir. Burada, lökosit enflamasyon sırasında kaçakçılığı değiştirebilirsiniz roman endotel düzenleyiciler ayırdetmek için kapsamlı bir metodoloji açıklayın.

Deneyleri roman endotel düzenleyiciler inflamatuvar yanıtta yer alan karakterize etmek için eleme

Lökosit heyecanla damar hücreleri ve trombositlerin damar duvar yaralanma sonra veya enflamasyon sırasında etkileşim. Burada, lökosit ve hücresel eşleri arasındaki etkileşimler altında yatan moleküler mekanizmaları karakterize etmek için basit bir laminar akış tabanlı tahlil açıklayın.

Lökosit işe kültürlü damar hücreleri ve yapışık trombositler üzerinde araştırmak için Laminar akış tabanlı deneyleri

Bu protokol, hızlı hücre yuvarlaması yapışması sırasında yapışma olaylarını görüntüleyene kadar yapışma ayak izi testini gerçekleştirmek için deneysel prosedürleri sunar.

Yapışma Ayak İzi Tahlili ile Hücre Yuvarlanmasında Görüntüleme Moleküler Yapışması

Bu protokolde, fizyolojik olarak ilgili bir mikrovasküler ortamı yeniden üretebilen ve tüm lökosit adezyon / migrasyon kaskadını yeniden üretebilen bir biyomimetik mikroakışkan testi, inflamatuar hastalıkta lökosit-endotel hücre etkileşimlerini incelemek için kullanılmaktadır.

Enflamasyon Sırasında Lökosit-Endotelyal Hücre Etkileşimini İnceleyen Mikrofizyolojik Bir Sistem

Öğrenin, paralel plaka akış odası kullanarak E-selektin aracılığıyla lökosit rolling olaylarını mikrovasküler endotel hücrelerinde nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem, iltihaplanma ve immün yanıt mekanizmalarını incelemek için güvenilir bir protokol sunar.

Mikrovasküler Endotel Fizyolojik E-selektin aracılığı ile Lökosit Rolling Analizi

Daha fazla video keşfet