Agar Montajı: Uzun Süreli Görüntüleme için Canlı Zebra Balığı Embriyolarını Monte Etmenin Temel Bir Yöntemi

0 views • 3:34 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- E3 orta ila düşük erime noktalı agaroz ekleyerek ve agaroz tamamen eriyene kadar ısıtarak başlayın. Agarozu 37 santigrat dereceye soğutun ve tricaine solüsyonu ekleyin. Daha sonra, E3 ortamında embriyolar içeren bir Petri kabına tricaine ekleyerek embriyoları uyuşturun. Ortadaki embriyoları toplamak için Petri kabını döndürün.

Bir transfer pipeti kullanarak, minimum miktarda besiyeri olan bir embriyo çizin. Pipeti dik konumda tutun ve embriyoyu pipetin ucuna yerleştirmek için zıplatın. Şimdi embriyoyu fazla ortam eklemeden agaroz çözeltisine yerleştirin, bu da agarozu seyreltir ve jelleşmeyi önler. Embriyoyu agaroz içinde nazikçe karıştırın ve çözeltiyi pipet kullanarak bir görüntüleme plakasının kuyucuğuna aktarın.

Plakayı mikroskop altına yerleştirin ve embriyoyu istenen yönde konumlandırmak için bir pipet ucu kullanın. Agaroz katılaştıktan sonra, agarı nemli tutmak ve embriyoyu görüntülemek için üzerine Trikat içeren E3 besiyerini dökün. Örnek bir protokolde, görüntüleme ve analiz için parabiyotik zebra balığı embriyolarını monte edeceğiz.

Kaynaşmış embriyoların görüntülerini elde etmek için,% 0.8 düşük erime noktalı agaroz hazırlayın. Hala sıcakken, agarozun bir mililitresini 37 santigrat derecelik bir ısıtma bloğuna yerleştirilmiş 1,5 mililitrelik mikrofüj tüplerine alın. Embriyoları içeren 25 mililitre E3 ortamına mililitre başına 1 mililitre 4 miligram pH 7.0 trikaya ekleyerek parabiyotik embriyoları uyuşturun. Çanağı yavaşça döndürün, böylece embriyolar ortada toplanır.

Daha sonra geniş uçlu bir plastik transfer pipeti kullanarak embriyoları mümkün olduğunca az sıvı içinde çizin. Ardından, pipeti dik çevirin ve embriyoları pipetin en altına yerleşecek şekilde nazikçe zıplayın. Daha sonra embriyoları, agarozun yüzeyindeki pipet ucuna hafifçe dokunarak 1 mililitrelik düşük erime noktalı agaroz alikotuna aktarın. Pipetteki fazla sıvıyı atın ve agarozdaki embriyoları nazikçe karıştırmak için pipeti kullanın.

Daha sonra, pipet ile agarozu ve embriyoları cam tabanlı altı oyuklu bir plakanın kuyusuna aktarın. Stereo mikroskop altında, embriyoları kapak camına yakın ve görüntüleme için istenen yönde konumlandırmak için bir alay iğnesinin ucuna sabitlenmiş bir jel yükleme ucu kullanın. Agaroz sertleştikten ve kuyucuklara trikadlı ortam eklendikten sonra, görüntü elde etmek için ters çevrilmiş geniş alanlı epifloresan lazer taramalı konfokal veya dönen disk konfokal mikroskop kullanın.

Bütün bir embriyo görüş alanı için 4x subjektif kullanın. Belirli bir dokuyu görüntülemek için 20x'lik bir objektif kullanın. Görüntüleri metin protokolüne göre işleyin.

10:45

Zebra balığı Larva yılında Dissemine Kandidiyazis non-invaziv Görüntüleme

Related Videos

0 Views

10:06

Yüksek Çözünürlüklü Tüm Dağı Yerinde Hibridizasyon

Related Videos

0 Views

06:48

Yara Yanıtları Sırasında Zebra Balığı Nötrofillerdeki Kemokin Reseptörlerinin Canlı Görüntülenmesi

Related Videos

0 Views

07:11

Konfokal Mikroskop Zebra balığı Embriyonik Beyin Görüntüleme Canlı

Related Videos

0 Views

09:17

Zebra balığı Beyin Etiketleme ve Görüntüleme Hücreleri

Related Videos

0 Views

04:28

Işık Levha Mikroskobu Numune Hazırlama: Uzun Süreli Görüntüleme için Canlı Zebra Balığı Embriyolarının Montajı

Related Videos

0 Views

03:27

Katmanlı Agar Montajı: Canlı Zebra Balığı Embriyolarının Ters Mikroskop ile Uzun Süreli Görüntüleme İçin Hazırlanması

Related Videos

0 Views

05:36

Diseksiyon ve Zebra balığı Embriyolar Yanal Montaj: Omurilik Kalkınma Analizi

Related Videos

0 Views

07:28

Çok katmanlı Zebra balığı uzun vadeli Işık Sayfalık Mikroskopi için Montaj

Related Videos

0 Views

11:19

Yaşayan Zebra balığı Embriyo Hücre alt yapıları görüntüleme

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026