Arabidopsis Bitkilerinde İkili Bakteriyel Yapay Kromozom Vektör Tabanlı Gen Dönüşümü: Tek Kopya Yerleştirme ile Transgenik Bitkiler Oluşturma Tekniği

Olgunlaşmamış çiçek başları taşıyan Arabidopsis bitkileri ile başlayın. Çiçek başlarını, hem E. coli hem de Agrobacterium sistemlerinde çoğalan bir vektör olan ikili bakteriyel yapay kromozom veya BIBAC ile klonlanmış T-DNA taşıyan Agrobacterium hücre süspansiyonuna batırın. Bu T-DNA ikili vektörü, tohuma özgü bir promotör boyunca herbisit direnç geni ve floresan seçilebilir belirteçler gibi büyük transgenler sağlayabilir.

Çiçek başları hala suya daldırılmışken, Agrobacterium ile temaslarını artırmak için bitkileri nazikçe çalkalayın. Bitkileri enfekte etme konusundaki doğal yeteneği ile Agrobacterium, transgeni çiçek hücresine aktarır. Transgen hücreye girerken çekirdeğe doğru hareket eder ve bitki genomu ile birleşir.

Şimdi, bitkiyi streç filme sarın ve daha iyi dönüşüm için nemi korumak için karanlıkta kuluçkaya yatırın. Filmi çıkarın ve bitkileri tohum üretene kadar fizyolojik koşullar altında büyütün.

Daha sonra, tohumları hasat edin ve dönüştürücüleri seçmek için floresan mikroskobu altında gözlemleyin. Şimdi, dönüştürülmüş tohumları çimlenene kadar uygun koşullarda büyütün. Bitkilere herbisit püskürtün ve kuluçkaya yatırın.

Birden fazla transgen eklemesi olan bitkiler gen su