JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 5:03 dk. • July 8th, 2025
Poliakrilamid jellerdeki proteinlerin floresan gümüş boyaması, proteinleri tespit etmek ve miktarını belirlemek için florojenik problar kullanır.
Elektroforez yoluyla bantlara ayrılmış, proteinli bir poliakrilamid jel ile başlayın. Proteinleri denatüre ederek bantların yayılmasını önleyen fiksatif bir etanol ve asetik asit karışımına batırın.
Artık asetik asit ve etanolü çıkarmak için jeli yıkayın. Jeli gümüş nitrat lekesine batırın. Gümüş iyonları, proteinlerdeki negatif yüklü gruplara güçlü bir şekilde bağlanır.
Karanlıkta kuluçkaya yatın. Bağlanmamış gümüş iyon komplekslerini çıkarmak için jeli ultra saf suda durulayın.
Jeli, çok bileşenli bir florojenik prob - TPE-4TA içeren gelişmekte olan bir çözeltiye batırın. Bu anyonik prob, proteine bağlı gümüş iyonlarını hedef alır, probun florojenik özelliklerini aktive eden çözünmeyen agregalar oluşturur ve böylece floresan verir.
Floresan aktivasyonu agregasyona bağlı olduğundan, bağlanmamış problar herhangi bir sinyal yaymaz, bu da azaltılmış arka plan emisyonu ile toplam protein boyamasını mümkün kılar.
Jeli karanlıkta hafif çalkalama ile inkübe edin ve tam florojenik gelişme sağlayın. Bağlanmamış probları çıkarmak için jeli bir lek
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin