Name: Hücre yüzey Proteinlerin CyDye Dige Fluor Minimal Boyalar kullanarak Seçici Etiketleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-26T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 43 s
Description: Öğrenin, CyDye DIGE minimal boyalarla hücre yüzeyi proteinlerinin seçici etiketlenmesi yöntemini. Bu protokol, düşük miktarlı proteinleri fraksiyonlama olmadan zenginleştirir ve 2D elektroforez ile analiz sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz onların işbirliği için, Viyana, Avusturya Üniversitesi Klinik Patoloji Enstitüsü Profesör Dontscho Kerjaschki, Corina Mayrhofer ve Sigurd Krieger teşekkür ederim.

Hücre kültürü <ol><li> Grow GlutaMAX I% 10 fetal buzağı serumu, 50 U / ml penisilin ve 50 mg / ml streptomisin sülfat (Invitrogen) içeren standart hücre kültürü yöntemleri kullanılarak, F-12 Ham orta Çin hemstırı yumurtalık hücreleri (CHO-K1). </li><li> Serum ücretsiz medya Exchange kültür ortamı. Etiket hücre yüzey proteinleri CyDye Dige Fluor Cy3 veya Cy5 minimal boyalar (bkz. aşağıdaki bölüm Hücre Yüzey Etiketleme,) ile farklı zaman noktalarında. </li><li> Her zaman noktası ve CyDye Dige Fluor Cy2 etiket hücreleri Havuzu eşit sayıda. Için bir iç standart olarak her 2-D jel kullanın. </li><li> Deneylerin çoğunluğu CHO-K1 hücreleri ile yapılabilir, ancak fare embriyo fibroblastlar (3T3 L1) ve fare asit lenfoma lymphoblasts (EL4) (veriler gösterilmemiştir) kullanılabilir. </li><li> DMEM orta son iki hücre tipleri GlutaMAX II ile büyür, ancak, aksi takdirde, CHO-K1 hücreler için kullanılan aynı koşullar kullanabilirsiniz. </li></ol> Hücre yüzey etiketleme <ol><li> Dikkatle sayma ve 5-10 x106 hücreleri hacimde bölünerek, enzimatik olmayan yapışık hücrelere ayırmak. Süspansiyon büyüyen hücreleri için, koparma adım atın. </li><li> Hücre süspansiyonları yaklaşık 5 dakika boyunca 800 xg&#39;de santrifüjleyin. Orta içeren süpernatantlar çıkarın. </li><li> 1 ml buz Hank Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) pH 8.5 resuspendion pelet yıkayın. 4 800 xg ° C &#39;de 2 dakika süreyle santrifüj. </li><li> Süpernatantı ve 200 ul buz etiketleme tampon hücre pelet (HBSS pH 8.5, 1 M üre) tekrar süspansiyon haline getirin. </li><li> 600 pmol CyDye Dige Fluor karanlıkta 20 dakika boyunca buz üzerinde minimal boyalar ile sağlam hücreler etiketleyin. </li><li> Lisin 20 ul 10 mM ekleyerek reaksiyon Quench. 10 dakika inkübe edin. </li><li> 500 4 800 xg&#39;de santrifüj ° C &#39;de 2 dakika süreyle takip ul HBSS pH 7.4, tabanda tarafından yüzey etiketli hücreler iki kez yıkayın. </li></ol> Hücre parçalama ve ayrıştırma <ol><li> 150 ul soğuk lizis tamponu (7 M üre, 2 M tiyoüre,% 4 ahbap, 30 mM Tris, 5 mM magnezyum asetat pH 8.5) yüzey etiketli hücreleri Lyse. Buz üzerinde zaman zaman vorteks ile en az 1 saat bekletin. </li><li> 4 10 000 xg&#39;de lizatları Santrifüj ° C 5 dakika. Yeni bir tüp süpernatantı aktarın. Bu örnek, tüm hücresel proteinleri içeren fraksiyone olmayan bir örnek. </li><li> Buna paralel olarak, membran ve sitozolik fraksiyonları önce 2-B jel elektroforezi (membran fraksiyonasyon kiti kullanılarak, Pierce), yukarıdaki gibi, daha sonra parçalara ayırmak Hücre pelletleri yıkayın. Membran fraksiyonu iç ve hücre yüzey membran proteinleri içerir. </li><li> Karşılaştırma için, standart Ettan Dige prosedürü 3 izleyin ve lyse, etiket, ve hücreler sonunda, damıtmak. D Quant Kiti (GE Healthcare) - 2 kullanarak örneklerinde protein konsantrasyonu belirleyin. </li></ol> 2-D elektroforez <ol><li> Rehidrate Immobiline DryStrip jeller, pH 3-11NL Immobiline DryStrip Reswelling tepsisi, bir gecede 450 ul DeStreak rehidratasyon sıvısı (% 0.5 IPG Tampon) 24 cm (24 cm). </li><li> Manifoldu anodik fincan yükleme DryStrip jeller Immobiline ve talimatlara göre II. Ettan IPGphor IEF Sistemi kullanılarak izoelektrik odaklama (IEF) gerçekleştirmek için CyDye etiketli örnekleri (50 mg total protein karşılık gelen) uygulayın. </li><li> IEF sonra, büyük (26 x 20 cm)% 12.5 poliakrilamid jeller (SDS-PAGE) üst üste iki adım yer ve şeritler dengelenmesi. % 0.5 &#39;lik agaroz ile Yerleşimi (Bromophenol Mavi içeren tampon çalışan). 5 W / jel 30 dk Ettan DALTtwelve Büyük Dikey Sistemi kullanarak 2-D elektroforez çalıştırın ve sonra boya ön kadar 15 W / jel, jel alt ulaşır. </li></ol> Görüntüleme ve veri analizi <ol><li> 2-D elektroforez tamamladıktan sonra, bir Typhoon 9410 Değişken Modu Imager kullanarak Cy2, Cy3 veya Cy5 jeller taramak. </li><li> DeCyder 2-D Diferansiyel Analiz Yazılımı 4 kullanılarak membran kesirler, sitozolik kesirler ve fraksiyone olmayan örnekleri spot haritalar karşılaştırın. </li></ol> Post-boyama <ol><li> Görüntüleme sonra, gümüş, standart prosedür 5 göre jeller leke . </li></ol> Protein tanımlama <ol><li> , Hasat büyümeye, fraksiyone olmayan bir örnek için yukarıda açıklandığı gibi hazırlayıcı miktarda (yaklaşık 1 mg toplam 10 x106 CHO hücreler protein) hücreler, yıkama ve lyse. Cy5, bir başak gibi bir hücre yüzeyinde etiketli örnek (bkz. yukarıda) kullanın ve etiketsiz preparatif miktarda protein birlikte uygulanır. </li><li> Yukarıda açıklandığı gibi 2-D elektroforez yürütmek, ancak bu kez, 600 mikrogram Astrum firması etiketsiz hücre anodik bardak uygulaması başak etiketli 50 mikrogram hücre yüzeyi ile birlikte lizat. Doğru noktaya toplama izin vermek için referans işaretleyicileri kullanın ve yereöneriler 3 göre jel döküm önce cam plakalar arasında. </li><li> Derin mor total protein leke 3 total protein boyama takip Cy5, hücre yüzeyinde nokta harita elde etmek için kanal Cy5 jel tarayın. </li><li> DeCyder kullanarak iki nokta haritaları 2-Ge yazılım araya Maç ve Cy 5 etiketli hücre yüzey proteinleri ile ilgili tüm noktalar için bir seçim listesi oluşturmak. Ettan spot taşıma istasyonu kullanılarak hücre yüzey proteinleri Pick jel fişler ayıklamak ve Ettan digester kullanarak trypsinate. MALDI-TOF kütle spektrometresi kullanarak belirleyin. </li></ol> Tablo 1: Bir Ettan Dige deney Şekil 1&#39;de hücre yüzey proteini etiketleme protokolü göre etiketli serum tükenmiş hücreleri örnekler kullanılarak yapıldı. <table style="width: 517px; height: 139px;" border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td style="text-align:center; font-weight:bold"> Örnek </td><td style="text-align:center; font-weight:bold"> Time serum tükenmesi </td><td style="text-align:center; font-weight:bold"> CyDye ile Etiketli </td><td style="text-align:center; font-weight:bold"> Jel sayısı </td></tr><tr><td style="text-align:center;"> 1 </td><td style="text-align:center;"> - </td><td style="text-align:center;"> Cy 3, Cy 2 </td><td style="text-align:center;"> 1 </td></tr><tr><td style="text-align:center;"> 2 </td><td style="text-align:center;"> 30 dakika </td><td style="text-align:center;"> Cy 5, Cy 2 </td><td style="text-align:center;"> 1 </td></tr><tr><td style="text-align:center;"> 3 </td><td style="text-align:center;"> 2 saat </td><td style="text-align:center;"> Cy 3, Cy 2 </td><td style="text-align:center;"> 2 </td></tr><tr><td style="text-align:center;"> 4 </td><td style="text-align:center;"> 4 saat </td><td style="text-align:center;"> Cy 5, Cy 2 </td><td style="text-align:center;"> 2 </td></tr><tr><td style="text-align:center;"> 5 </td><td style="text-align:center;"> 16 saat </td><td style="text-align:center;"> Cy 5, Cy 2 </td><td style="text-align:center;"> 3 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Jang, J. H., Hanash, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+of+the+cell+surface+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Profiling of the cell surface proteome.</a> Proteomics. 3, 1947-1954 (2003).</li>
<li>Shin, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+profiling+of+the+cell+surface+proteome+of+cancer+cells+uncovers+an+abundance+of+proteins+with+chaperone+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Global profiling of the cell surface proteome of cancer cells uncovers an abundance of proteins with chaperone function.</a> J Biol Chem. 9, 7607-7616 (2003).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ettan+DIGE+System+User+Manual%5BTitle%5D)+AND+%22GE+Healthcare+user+manual+18-1164-40%22%5BJournal%5D)">Ettan DIGE System User Manual.</a> GE Healthcare user manual 18-1164-40. , (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DeCyder+2-D+Differential+Analysis+Software+v+6.0.+GE+Healthcare+data+file+11-0011-98+Edition+AA%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">DeCyder 2-D Differential Analysis Software v 6.0. GE Healthcare data file 11-0011-98 Edition AA.</a> , (2004).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2-D+Electrophoresis+using+immobilized+pH+gradients%2C+principles+and+methods%5BTitle%5D)+AND+%22GE+Healthcare+handbook+80-6429-60+Edition+AB%22%5BJournal%5D)">2-D Electrophoresis using immobilized pH gradients, principles and methods.</a> GE Healthcare handbook 80-6429-60 Edition AB. , (2002).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CyDye+DIGE+fluors+and+labeling+kits.+GE+Healthcare+data+file+18-1164-84+Edition+AB%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">CyDye DIGE fluors and labeling kits. GE Healthcare data file 18-1164-84 Edition AB.</a> , (2003).</li>
<li>Mayrhofer, C., Krieger, S., Allmaier, G., Kerjaschki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DIGE+compatible+labeling+of+surface+proteins+on+vital+cells+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">DIGE compatible labeling of surface proteins on vital cells in vitro and in vivo.</a> Proteomics. 2, 579-5785 (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+labeling+of+cell-surface+proteins+using+CyDye+DIGE+Fluor+minimal+dyes.+GE+Healthcare+Application+Note+11-0033-92+Edition+AB%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Selective labeling of cell-surface proteins using CyDye DIGE Fluor minimal dyes. GE Healthcare Application Note 11-0033-92 Edition AB.</a> , (2005).</li>
</ol>

Protein konsantrasyonu Iki etiketleme iş akışlarının bir bakış Şekil 1&#39;de gösterilmiştir. Hücre yüzey proteini etiketleme protokole göre etiketli hücreleri hala bozulmamış olduğundan, sadece hücre yüzey proteinleri boya maruz kalmaktadır. , Etiketleme ve proteinlerin hücre içinde yanı sıra dış (Şekil 1) etiketli önce standart Ettan Dige protokolde, hücreler parçalanmış. Hücre yüzey proteinleri özellikle quantitated olamaz bu yana boya hücre yüzey proteini etiketleme protokol protein görece...

<table><tbody><tr><td>CyDye DIGE Kiti, 2 nmol</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>28-9345-30</td><td></td></tr><tr><td>2-D Quant Kiti</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>80-6484-51</td><td></td></tr><tr><td>IPG Tamponu pH 3-11NL</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-6004-40</td><td></td></tr><tr><td>Immobiline DryStrip pH 3-11NL, 24 cm</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-6003-77</td><td></td></tr><tr><td>IPGbox</td><td>Araç</td><td>GE Healthcare</td><td>28-9334-65</td><td></td></tr><tr><td>IPGbox kiti</td><td>Araç</td><td>GE Healthcare</td><td>28-9334-92</td><td></td></tr><tr><td>DeStreak rehidrasyon solüsyonu</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-6003-19</td><td></td></tr><tr><td>Immobiline DryStrip Örtü Sıvısı</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1335-01</td><td></td></tr><tr><td>Ettan IPGphor 3 IEF Ünitesi</td><td>Enstrüman</td><td>GE Healthcare</td><td>11-0033-64</td><td></td></tr><tr><td>Ettan IPGphor Manifold</td><td>Enstrüman bileşeni</td><td>GE Healthcare</td><td>80-6498-38</td><td></td></tr><tr><td>Ettan DALTtwelve Jel Döküm Sistemi</td><td>Araç</td><td>GE Healthcare</td><td>80-6467-22</td><td></td></tr><tr><td>Ettan DALTtwelve Ayırma Ünitesi ve Güç Kaynağı/Kontrol Ünitesi</td><td>Enstrüman</td><td>GE Healthcare</td><td>80-6466-46</td><td>230 V ünitesi: 80-6466-27</td></tr><tr><td>Typhoon 9410 Değişken Mod Görüntüleyici</td><td>Enstrüman</td><td>GE Healthcare</td><td>63-0055-81</td><td></td></tr><tr><td>Ettan Spot Picker</td><td>Enstrüman</td><td>GE Healthcare</td><td>18-1145-28</td><td></td></tr><tr><td>Ettan Digester</td><td>Enstrüman</td><td>GE Healthcare</td><td>18-1142-68</td><td></td></tr><tr><td>Ettan Spotter</td><td>Enstrüman</td><td>GE Healthcare</td><td>18-1142-67</td><td></td></tr><tr><td>Ettan MALDI-TOF</td><td>Enstrüman</td><td>GE Healthcare</td><td>18-1142-33</td><td></td></tr><tr><td>DeCyder 2-D Diferansiyel Analiz Yazılımı</td><td>Diğer</td><td>GE Healthcare</td><td>28-4012-01</td><td></td></tr><tr><td>ImageQuant Analiz Yazılımı</td><td>Diğer</td><td>GE Healthcare</td><td>28-9236-62</td><td></td></tr><tr><td>Üre</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1319-01</td><td></td></tr><tr><td>CHAPS</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1314-01</td><td></td></tr><tr><td>PlusOne Ditiyotreitol (DTT)</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1318-01</td><td></td></tr><tr><td>Bromofenol Mavisi</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1329-01</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1321-01</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Dodesil Sülfat (SDS)</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1313-01</td><td></td></tr><tr><td>PlusOne Gliserol %87</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1325-01</td><td></td></tr><tr><td>PlusOne ReadySol IEF %40 T, %3 C</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1310-01</td><td></td></tr><tr><td>PlusOne TEMED</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1312-01</td><td></td></tr><tr><td>PlusOne Amonyum Persülfat</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1311-01</td><td></td></tr><tr><td>PlusOne Glisin</td><td>Reaktif</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1323-01</td><td></td></tr><tr><td>Membran proteinleri için 2-D Örnek Hazırlama Seti</td><td>Reaktif</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>89864</td><td></td></tr><tr><td>Streptomisin sülfat</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr></tbody></table>

hücre yüzey proteinlerin cydye dige fluor minimal boyalar kullanarak seçici etiketleme

Selective Labelling of Cell-surface Proteins using CyDye DIGE Fluor Minimal Dyes

Yüzey proteinleri hücre yeteneğini çevresine tepki ve komşu hücrelerle etkileşim merkezi. Onlar hemen hemen tüm hücre içi sinyal indükleyicileri olduğu bilinmektedir. Ayrıca, çevreye uyum ve ilaç tedavisi önemli bir rol oynar ve genellikle hastalık patogenezi ve patolojisi (1) katılan. Protein-protein etkileşimleri sinyal yolları içsel, ve bu karmaşık biyolojik süreçleri hakkında daha fazla bilgi elde etmek için, duyarlı ve güvenilir yöntemler, hücre yüzey proteinleri çalışmak için ihtiyaç vardır. İki boyutlu (2-D) elektroforez diferansiyel değişiklikleri incelemek için, karmaşık protein örneklerinin biyobelirteçleri ve diğer hedeflere tespiti için yaygın olarak kullanılır. Düşük bolluk (hücresel proteinlerin 1% 2) kısmen Hücre yüzey proteinleri, fraksiyonasyon ya da diğer tip zenginleştirme olmadan 2-D jel tespit etmek zordur. Onlar da sık sık kötü hidrofobik doğa ve yüksek molekül ağırlıklı (2) nedeniyle 2-B jeller temsil edilmektedir. Bu çalışmada, özel etiketleme ve proteinlerin bu önemli grup tespiti için CyDye Dige Fluor minimal boyalar kullanarak sağlam hücreler için yeni bir protokol mevcut. Hücre yüzey proteinleri hücre içi proteinler en az etiketleme ile çok sayıda özel etiketleme gösterdi. Bu protokol, hızlı, basit, kullanımı ve her üç CyDye Dige Fluor minimal boyalar (2, Cy Cy 3 ve Cy 5), hücre yüzey proteinleri etiket için kullanılabilir. Bu özellikler DeCyder 2-D Diferansiyel Analiz Yazılımı kullanarak protein ekspresyonu değişiklikleri Ettan Dige teknolojisi ve analizi ile 2-B Floresan Fark Jel Elektroforez (2-D Dige) kullanarak çoklama için izin verir. Hücre yüzey proteinleri zaman çeşitli uzunluklarda CHO hücreler (bkz. Tablo 1) serum açlık sırasında izledi. Yüksek doğruluk ile bolluk içinde küçük değişiklikler tespit edildi ve sonuçları tanımlanan istatistiksel yöntemler ile desteklenmektedir.

Basit ve spesifik bir yöntem, bir fraksiyonasyonu adım olmadan floresan etiketleme ve hücre yüzey proteinleri gelişmiş algılama gösterilmiştir. Hücre yüzey proteinleri Diferansiyel bereket, iki-boyutlu (2-D) elektroforez ve Ettan ™ Dige teknolojisi kullanılarak analiz edildi.

Hücre yüzey Proteinlerin CyDye Dige Fluor Minimal Boyalar kullanarak Seçici Etiketleme

Yüzey proteinleri, hücrenin çevresine tepki verme ve komşu hücrelerle etkileşime girme yeteneği açısından merkezi bir öneme sahiptir. Bunların ... indükleyicileri olduğu bilinmektedir.

Benim adım Maria ve İsveç'teki NOS'ta bulunan Y Healthcare'de çalışıyorum. Hücre yüzey proteinleri genellikle hücreler ile çevreleri arasındaki iletişime katılırlar ve bu nedenle, hücre ortamındaki değişikliklerin yol açtığı biyolojik varyasyonların yanı sıra hastalıklara dair daha fazla bilgi edinmeyi amaçlayan araştırmalarda özel bir ilgi odağıdırlar. Bu videoda size basit bir yan bakışlı kaçınma hücre yüzeyi etiketleme protokolü göstereceğim; böylece fiziksel güçlendirme olmaksızın, düşük bolluktaki bu proteinleri görsel olarak zenginleştirebilecek ve bu teknoloji ile hücre yüzey proteinleri arasındaki farklılıkları inceleyebileceksiniz.Bu teknolojiyi ilgi çekici bulduysanız, 2D el kitabında daha fazla bilgi bulabilirsiniz. Ayrıca, bu özel konuyla ilgili olarak job adresinden indirebileceğiniz bir uygulama notumuz mevcuttur. Yukarıda görülen hücre yüzeyi işaretleme protokolünde, hücreleri henüz bozulmamış haldeyken işaretlersiniz. İşaretleme işlemi sırasında, boya yalnızca hücre yüzeyi proteinlerine erişebilecektir.Etiketleme adımının ardından, hücre yüzeyine özgü etiketlemeyi doğrulamak için hücreler analiz edilir. Etiketli örnek, membran ve sitozolik proteinler şeklinde fraksi

selective-labelling-cell-surface-proteins-using-cydye-dige-fluor

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

KAKE kovalent, floresan boya, carboxyfluorescein uzun ömürlü hücre içi moleküller etiketler. Gibi KAKE etiketli hücre böler, döl ve böylece hücre bölünmesini değerlendirmek için kullanılan floresan yarısı miktarı, var. Bu makalede, tipik olarak KAKE fare lenfositler etiketlenmesi için kullanılan prosedürler açıklanmaktadır.

Lenfosit Silahların Yayılmasının Önlenmesi Monitör Carboxyfluorescein diasetat Succinimidyl Ester (KAKE) Kullanımı

Immün hücre fonksiyonu ve proliferasyonu izlemek için hücre izleme boyalar başarıyla kullanımı pek çok kritik adımlar içerir. Biz yöntemleri açıklanmaktadır: 1) membran boyalarla parlak, homojen, tekrarlanabilir etiket-ing almak; 2) florokromlar ve veri toplama şartlarının belirlenmesi ve 3) boya seyreltme esas hücre çoğalması ölçmek için bir model seçerek.

Cep Takip Boyalar kullanarak Hücre Bölünmesi İzleme için optimize Boyama ve Çoğalma Modelleme Yöntemleri

Bir özel poliklonal antikor, hücre dışı epitopuna kullanarak canlı nöronlar yüzeyinde proteini etiket için bir yöntem tarif eder. Hücre yüzeyi üzerinde antikor tarafından bağlanan ve daha sonra endositoz üzerinden içsel protein Protein kalan ayırt veya inkübasyon sırasında yüzeye, kaçırılan edilebilir.

Canlı Kültür Nöronlar Antikor Besleme sonra Hücre-yüzey ve İçselleştirilmiş Proteinlerin Diferansiyel Etiketleme

Burada, fotoafinite etiketlemesi kullanarak küçük molekül bağlayıcı proteinlerin tanımlanması için bir yöntem açıklıyoruz. Bu tekniğin avantajı, hedef proteinlerin bağlanma ve kovalent etiketlemesinin canlı hücresel ortamda gerçekleşmesi ve hücre lizizi üzerine doğal protein yapısını ve bağlanma koşullarını bozma riskini ortadan kaldırmasıdır.

Canlı hücre fotoafinite Etiketleme tarafından Yerli Hücresel Ortamında Küçük Molekül bağlayıcı proteinlerin belirlenmesi

Lenfositler, adaptif immün yanıtlarda ana oyunculardır. Burada, in vitro ve in vivo lenfosit aktivasyonunda istenen moleküllerin fizyolojik fonksiyonlarını belirlemek için bir lenfosit saflaştırma protokolü sunuyoruz. Açıklanan deneysel prosedürler, kontrol ve genetik olarak değiştirilmiş lenfositler arasındaki fonksiyonel kapasiteleri karşılaştırmak için uygundur.

İzolasyon ve murin lenfositlerin aktivasyonu

Göz dolaşımındaki etiketli kan hücrelerinin canlı hücre görüntülemesi, diyabetik retinopati ve yaşla ilişkili maküler dejenerasyonda inflamasyon ve iskemi hakkında bilgi sağlayabilir. Kan hücrelerini etiketlemek ve retinal dolaşımda etiketli hücreleri imal etmek için bir protokol tarif edilmiştir.

Fare Retinal Sirkülasyonunda Akış Dinamikleri Çalışmak İçin Eritrositler ve Lökositlerin Floresan Boya Etiketlenmesi

Burada, içinde canlı hücre organelleri tek zar proteinleri çok renkli yerelleştirme için bir iletişim kuralı mevcut. Fluorophores eklemek için kendi kendine etiketleme protein kullanılır. Aynı organel farklı membranlar bölmeleri içinde bulunan proteinler, ~ 18 hassasiyetle lokalize nm.

Çok renkli yerelleştirme mikroskobu canlı memeli hücre organelleri tek membran proteinlerin

Burada, karmaşık protein örnek tek molekül düzeyinde her protein türler için etiketleme homojenliği değerlendirmek için bir protokol mevcut.

Proteom çapında Quantification maddelerinin homojenliği tek molekül düzeyinde etiketlenmesi

Protokol, mitokondriyal nükleoidlerin ticari olarak kullanılabilen DNA jeli lekesi ile özel etiketlemesini, süper çözünürlüklü yapılandırılmış aydınlatma mikroskobu (SR-SIM) ile zaman atlamalı canlı etiketli hücrelerin zaman atlamalı serilerinin edinimini ve nükleoid hareketinin otomatik olarak izlenmesini açıklar.

Hızlandırılmış Yapılandırılmış Aydınlatma Mikroskomu için Mitokondriyal Nükleoidlerin Özel Etiketlemesi

Hayati floresan boyalar modern mantar hücre biyolojisinde canlı hücre görüntüleme analizleri için gerekli araçlardır. Bu yazıda, filamentöz mantarlarda plazma membran dinamiği, endo-/eksositoz ve hücre duvarı morfogenezinin izlenmesi için kurulmuş ve daha az bilinen floresan boyaların uygulanması ayrıntılı olarak anlatılır.

Filamentöz Mantarların Canlı Hücre Görüntülemesi İçin Membran ve Hücre Duvarı Seçici Floresan Boyaların Uygulanması

Modern floresan etiketleme tekniklerini kullanarak canlı hücrelerdeki membran reseptör dinamiklerini incelemek için Förster Rezonans Enerji transferi (FRET) ile birlikte canlı hücre çift renkli floresan çapraz korelasyon spektroskopisi (FCCS) gerçekleştirmek için deneysel bir protokol ve veri analizi iş akışı sunuyoruz.

Canlı Hücrelerde Protein-Protein Etkileşimi ve Protein Dinamiklerini incelemek için Çift Renkli Floresan Çapraz Korelasyon Spektroskopisi

Öğrenin, CyDye DIGE minimal boyalarla hücre yüzeyi proteinlerinin seçici etiketlenmesi yöntemini. Bu protokol, düşük miktarlı proteinleri fraksiyonlama olmadan zenginleştirir ve 2D elektroforez ile analiz sağlar.

Hücre yüzey Proteinlerin CyDye Dige Fluor Minimal Boyalar kullanarak Seçici Etiketleme

Daha fazla video keşfet