Yem ve Av Proteinleri Arasındaki Etkileşimleri Analiz Etmek için ELISA Tabanlı Yöntem

İki protein ortağı arasındaki fiziksel etkileşim, aşağı akış biyolojik mekanizmalarını modüle eder.

Enzime bağlı immünosorbent testi olan ELISA'yı kullanarak protein-protein etkileşimlerini tespit etmek için çok kuyulu bir immünoassay plakası alın. Etkileşen proteinlerden birini (yem proteini) içeren bir kaplama tamponu ekleyin ve inkübe edin. Yem proteinleri, spesifik olmayan hidrofobik etkileşimler yoluyla kuyu yüzeyine adsorbe edilir.

Harcanan çözeltiyi atın ve bağlanmamış proteinleri çıkarmak için plakayı bir tamponla yıkayın. Bir bloke edici çözelti ekleyin ve inkübe edin, çözeltinin bloke edici ajan moleküllerinin kuyu yüzeyindeki spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke etmesine izin verin.

Kolay miktar tayini için histidin kalıntıları ile etiketlenmiş etkileşen protein ortağını - av proteini - ekleyin. Kuluçkaya yatırın, av proteininin etkileşimli ortağına - yeme özel olarak bağlanmasına izin verin. Avına bağlanan ve bir yem-av-antikor kompleksi oluşturan yaban turpu peroksidaz enzimleri ile konjuge edilmiş bir anti-histidin antikor çözeltisi ekleyin.

Enzimin substratını ve hidrojen peroksiti içeren bir çözeltiyi pipetleyin ve inkübe edin.

Yaban turpu peroksidaz enzimi,