JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 2:43 dk. • July 8th, 2025
Hücre zarı üzerindeki protein-fosfolipid etkileşimleri, çeşitli hücresel süreçlerin düzenlenmesi için çok önemlidir.
Kantitatif akış sitometrisi kullanarak in vitro olarak hedef protein-fosfolipid etkileşimlerini tespit etmek için, tamponda istenen konsantrasyonda hücre zarı taklidi - mikron boyutlu, lipofilik boya etiketli fosfolipid vezikülleri içeren bir tüp alın.
Çözeltiye uygun bir floresan etiketli farklı hedef protein konsantrasyonu ekleyin.
Süspansiyonu akış sitometresine enjekte edin. Protein-fosfolipid etkileşimleri için yeterli zaman tanımak için akışkan sistem parametrelerini düşük bir akış hızına ayarlayın.
Floresan etiketli proteinler ve fosfolipid veziküller akış kanalında etkileşime girdikçe, veziküllere bağlı proteinlerin konsantrasyonu artar.
Bu kompleksler, uygun dalga boylarını sağlayan belirli floresan kanallarından lazer ışınlarından geçerken uyarılırlar. Kompleks içindeki bu uyarılmış proteinler ve fosfolipid veziküller, uygun dedektörler tarafından yakalanan temel duruma gevşeme üzerine ilgili floresan sinyallerini yayar.
Proteinlerin yüksek bir ortalama floresan yoğunluğunun saptanması, proteinin fosfolipid veziküllere bağlanmasının bir göstergesidir.
Tyrod
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin