Yüzdürme ile aktive edilen hücre sıralaması kullanılarak yüzdürme tabanlı T hücresi izolasyonu

Kaldırma kuvveti ile aktive edilen hücre sıralaması, BACS kullanarak bağışıklık sistemi için gerekli olan beyaz kan hücreleri olan T hücrelerini izole etmek için, periferik kan mononükleer hücrelerinin, PBMC'lerin bir süspansiyonunu alın. PBMC'ler, hedef T hücreleri ve B hücreleri, monositler, doğal öldürücü hücreler ve dendritik hücreler gibi hedef olmayan hücreleri içerir.

Yeterli miktarda biyotinile anti-CD3 antikoru içeren bir tampon ekleyin ve gereken süre boyunca inkübe edin. Antikor, hücre yüzeyinde multimerik bir protein kompleksi olan CD3 kompleksine bağlanır - T hücrelerinin tanımlayıcı bir özelliği.

Antikora bağlı T hücrelerinin pozitif seçimi için işlevselleştirilmiş mikro kabarcıklar - streptavidin ile kaplanmış küçük küresel parçacıklar - ekleyin. Her bir mikro kabarcığın çekirdeği içi boş bir küredir, bu da onları sulu bir çözelti içinde yüzebilen düşük yoğunluklu parçacıklar haline getirir.

Karışımı çalkalama altında inkübe edin, mikro kabarcıkların ve numunenin iyice karışmasına izin verin. İnkübasyon sırasında, mikro kabarcık üzerindeki streptavidin, T hücresine bağlı antikor üzerindeki biyotine bağlanır ve hücreleri mikro kabarcıklar üzerinde hareketsiz hale geti