JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:21 dk. • July 8th, 2025
Hedef ve hedef olmayan translasyon sonrası modifikasyonlar veya PTM'ler ile histon peptitleri içeren bir mikrodizi slaytı alın.
Peptitler, streptavidin ile işlevselleştirilmiş cam slayt üzerindeki belirli noktalarda konjuge biyotin yoluyla hareketsiz hale getirilir.
Lekeler ayrıca, lekelerin tanımlanmasını kolaylaştıran hareketsizleştirilmiş bir biyotin konjuge yeşil florofor içerir.
Spesifik olmayan antikor etkileşimini önleyen bir bloke edici tampon yerleştirin.
Slaytı kurutmak için tamponu çıkarın ve santrifüjleyin.
Bir balmumu yazıcısının içinde, diziyi balmumu ile sınırlayın.
Diziyi bir hibridizasyon arabelleği ile dengeleyin.
Bir hedef PTM için spesifik primer antikorlarla inkübe edin.
Primer antikorlara bağlanan kırmızı florofor konjuge sekonder antikorları tanıtın.
Bağlanmamış antikorları çıkarın ve slaytı kurutmak için santrifüjleyin.
Bir mikrodizi tarayıcı kullanarak slaydı görüntüleyin. Yeşil floresan lekeleri tanımlamaya yardımcı olurken, kırmızı floresan PTM-antikor etkileşimini göstererek antikor özgüllüğünü gösterir.
Hedef PTM'nin tanınması antikor özgüllüğünü gösterirken, hedef olmayan PTM'lerin tanınması antikor çapraz reaktivitesini gösterir.
Kaynak plaka haritası
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin