Name: Kompleks Örnekleri spesifik protein Glikozilasyon arasında Multiplexed Yüksek verim Profilleme için Kimyasal-bloke Antikor Mikroarray (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 21 s
Description: Keşfedin, hepatoselüler karsinom serum örneklerinde 20 farklı glikoproteinin glikozilasyon profillerini kimyasal olarak bloke edilmiş antikor mikroarray kullanarak yüksek verimli analiz yöntemini. Bu teknik, geleneksel yöntemlere göre daha hızlı ve ekonomiktir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Hepatit ve Virüs Araştırmaları Enstitüsü tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Fang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ER+UDPase+ENTPD5+promotes+protein+N-glycosylation%2C+the+Warburg+effect%2C+and+proliferation+in+the+PTEN+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The ER UDPase ENTPD5 promotes protein N-glycosylation, the Warburg effect, and proliferation in the PTEN pathway.</a> Cell. 143, 711-724 (2010).</li>
<li>Marino, K., Bones, J., Kattla, J. J., Rudd, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+approach+to+protein+glycosylation+analysis%3A+a+path+through+the+maze%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">A systematic approach to protein glycosylation analysis: a path through the maze.</a> Nat. Chem. Biol. 6, 713-723 (2010).</li>
<li>Shental-Bechor, D., Levy, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+glycosylation+on+protein+folding%3A+a+close+look+at+thermodynamic+stabilization%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Effect of glycosylation on protein folding: a close look at thermodynamic stabilization.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 8256-8261 (2008).</li>
<li>Hossler, P., Khattak, S. F., Li, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+and+consistent+protein+glycosylation+in+mammalian+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Optimal and consistent protein glycosylation in mammalian cell culture.</a> Glycobiology. 19, 936-949 (2009).</li>
<li>Nothaft, H., Szymanski, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+glycosylation+in+bacteria%3A+sweeter+than+ever%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Protein glycosylation in bacteria: sweeter than ever.</a> Nat. Rev. Microbiol. 8, 765-778 (2011).</li>
<li>Sola, R. J., Griebenow, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+glycosylation+on+the+stability+of+protein+pharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharm.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of glycosylation on the stability of protein pharmaceuticals.</a> J. Pharm. Sci. 98, 1223-1245 (2009).</li>
<li>Li, C., Lubman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+serum+protein+glycosylation+with+antibody-lectin+microarray+for+high-throughput+biomarker+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of serum protein glycosylation with antibody-lectin microarray for high-throughput biomarker screening.</a> Methods Mol. Biol. 723, 15-28 (2011).</li>
<li>Dwek, M. V., Jenks, A., Leathem, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+assay+to+measure+biomarker+glycosylation+demonstrates+increased+fucosylation+of+prostate+specific+antigen+%28PSA%29+in+patients+with+prostate+cancer+compared+with+benign+prostatic+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">A sensitive assay to measure biomarker glycosylation demonstrates increased fucosylation of prostate specific antigen (PSA) in patients with prostate cancer compared with benign prostatic hyperplasia.</a> Clin. Chim. Acta. 411, 1935-1939 (2010).</li>
<li>Drake, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sweetening+the+pot%3A+adding+glycosylation+to+the+biomarker+discovery+equation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Sweetening the pot: adding glycosylation to the biomarker discovery equation.</a> Clin. Chem. 56, 223-236 (2010).</li>
<li>Kim, Y. -P., Park, S., Oh, E., Oh, Y. -H., Kim, H. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On-chip+detection+of+protein+glycosylation+based+on+energy+transfer+between+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">On-chip detection of protein glycosylation based on energy transfer between nanoparticles.</a> Biosensors & Bioelectronics. 24, 1189-1194 (2009).</li>
<li>Boland, M., Rudd, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disease+related+glycosylation+changes+and+biomarker+discovery%3A+challenges+and+possibilities+in+an+emerging+field%5BTitle%5D)+AND+%22Editorial.+Dis.+Markers%22%5BJournal%5D)">Disease related glycosylation changes and biomarker discovery: challenges and possibilities in an emerging field.</a> Editorial. Dis. Markers. 25, 189-192 (2008).</li>
<li>Norton, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-linked+glycosylation+of+the+liver+cancer+biomarker+GP73%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">N-linked glycosylation of the liver cancer biomarker GP73.</a> J. Cell Biochem. 104, 136-149 (2008).</li>
<li>Nakagawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycomic+analysis+of+alpha-fetoprotein+L3+in+hepatoma+cell+lines+and+hepatocellular+carcinoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Glycomic analysis of alpha-fetoprotein L3 in hepatoma cell lines and hepatocellular carcinoma patients.</a> J. Proteome Res. 7, 2222-2233 (2008).</li>
<li>Durazo, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Des-gamma-carboxyprothrombin%2C+alpha-fetoprotein+and+AFP-L3+in+patients+with+chronic+hepatitis%2C+cirrhosis+and+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Des-gamma-carboxyprothrombin, alpha-fetoprotein and AFP-L3 in patients with chronic hepatitis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma.</a> J. Gastroenterol Hepatol. 23, 1541-1548 (2008).</li>
<li>Kobayashi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fucosylated+fraction+of+alpha-fetoprotein%2C+L3%2C+as+a+useful+prognostic+factor+in+patients+with+hepatocellular+carcinoma+with+special+reference+to+low+concentrations+of+serum+alpha-fetoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol.+Res%22%5BJournal%5D)">Fucosylated fraction of alpha-fetoprotein, L3, as a useful prognostic factor in patients with hepatocellular carcinoma with special reference to low concentrations of serum alpha-fetoprotein.</a> Hepatol. Res. 37, 914-922 (2007).</li>
<li>Maisey, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CA19-9+as+a+prognostic+factor+in+inoperable+pancreatic+cancer%3A+the+implication+for+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">CA19-9 as a prognostic factor in inoperable pancreatic cancer: the implication for clinical trials.</a> Br. J. Cancer. 93, 740-743 (2005).</li>
<li>Talar-Wojnarowska, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+value+of+serum+neopterin%2C+tissue+polypeptide-specific+antigen+and+CA19-9+levels+in+differential+diagnosis+between+pancreatic+cancer+and+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Clinical value of serum neopterin, tissue polypeptide-specific antigen and CA19-9 levels in differential diagnosis between pancreatic cancer and chronic pancreatitis.</a> Pancreatology. 10, 689-694 (2010).</li>
<li>Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+analysis+of+glycan+variation+on+native+proteins+captured+by+antibody+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplexed analysis of glycan variation on native proteins captured by antibody microarrays.</a> Nat. Methods. 4, 437-444 (2007).</li>
<li>Shao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+microarray+analysis+of+serum+glycans+in+esophageal+spuamous+cell+carcinoma+cases+and+controls%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics+Clinical+Applications%22%5BJournal%5D)">Antibody microarray analysis of serum glycans in esophageal spuamous cell carcinoma cases and controls.</a> Proteomics Clinical Applications. 3, 923-931 (2009).</li>
<li>Chen, S., Haab, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+glycans+on+serum+proteins+using+antibody+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of glycans on serum proteins using antibody microarrays.</a> Methods Mol. Biol. 520, 39-58 (2009).</li>
<li>Yue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Prevalence+and+Nature+of+Glycan+Alterations+on+Specific+Proteins+in+Pancreatic+Cancer+Patients+Revealed+Using+Antibody-Lectin+Sandwich+Arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">The Prevalence and Nature of Glycan Alterations on Specific Proteins in Pancreatic Cancer Patients Revealed Using Antibody-Lectin Sandwich Arrays.</a> Molecular & Cellular Proteomics. 8, 1697-1707 (2009).</li>
<li>Wolf-Yadlin, A., Sevecka, M., MacBeath, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+protein+function+and+signaling+using+protein+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Dissecting protein function and signaling using protein microarrays.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 13, 398-405 (2009).</li>
<li>Richard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomics+as+Applied+to+Inherited+Metabolic+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Proteomics as Applied to Inherited Metabolic Diseases.</a> Current Proteomics. 6, 140-153 (2009).</li>
<li>Nolen, B., Winans, M., Marrangoni, A., Lokshin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrant+tumor-associated+antigen+autoantibody+profiles+in+healthy+controls+detected+by+multiplex+bead-based+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Aberrant tumor-associated antigen autoantibody profiles in healthy controls detected by multiplex bead-based immunoassay.</a> Journal of Immunological Methods. 344, 116-120 (2009).</li>
<li>Kuno, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused+Differential+Glycan+Analysis+with+the+Platform+Antibody-assisted+Lectin+Profiling+for+Glycan-related+Biomarker+Verification%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Focused Differential Glycan Analysis with the Platform Antibody-assisted Lectin Profiling for Glycan-related Biomarker Verification.</a> Molecular & Cellular Proteomics. 8, 99-108 (2009).</li>
<li>Hsu, K. -L., Mahal, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sweet+tasting+chips%3A+microarray-based+analysis+of+glycans%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Sweet tasting chips: microarray-based analysis of glycans.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 13, 427-432 (2009).</li>
<li>Borrebaeck, C. A. K., Wingren, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+proteomics+using+antibody+microarrays%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Molecular+Diagnostics%22%5BJournal%5D)">High-throughput proteomics using antibody microarrays: an update.</a> Expert Review of Molecular Diagnostics. 7, 673-686 (2007).</li>
<li>Sanchez-Carbayo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+array-based+technologies+for+cancer+protein+profiling+and+functional+proteomic+analyses+using+serum+and+tissue+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Tumor+Biology%22%5BJournal%5D)">Antibody array-based technologies for cancer protein profiling and functional proteomic analyses using serum and tissue specimens.</a> Tumor Biology. 31, 103-112 (2010).</li>
<li>Porter, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+motif-based+analysis+of+glycan+array+data+to+determine+the+specificities+of+glycan-binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">A motif-based analysis of glycan array data to determine the specificities of glycan-binding proteins.</a> Glycobiology. 20, 369-380 (2010).</li>
<li>Maupin, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogene+Expression+Alterations+Associated+with+Pancreatic+Cancer+Epithelial-Mesenchymal+Transition+in+Complementary+Model+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Glycogene Expression Alterations Associated with Pancreatic Cancer Epithelial-Mesenchymal Transition in Complementary Model Systems.</a> Plos One. 5, (2010).</li>
<li>Sevecka, M., Wolf-Yadlin, A., MacBeath, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysate+Microarrays+Enable+High-throughput%2C+Quantitative+Investigations+of+Cellular+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Lysate Microarrays Enable High-throughput, Quantitative Investigations of Cellular Signaling.</a> Molecular & Cellular Proteomics. 10, (2011).</li>
<li>Wang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+fucosylated+biomarkers+for+the+early+detection+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol.+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Novel fucosylated biomarkers for the early detection of hepatocellular carcinoma.</a> Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 18, 1914-1921 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

1. Hedef protein ve yakalama antikor seçimi Antikor mikroarray assay önce belli bir reaktifler ve malzemeler sayılabilir için gerekli ve hazırlanır. Glukanıdır profilleme veya glukanıdır biyomarker tarama, glikoprotein adaylara spesifik antikorların bir panel için bir antikor mikroarray tasarlamak için literatüre veya önceki sonuçlarından göre tespit edilmelidir. Bu antikorlar, genellikle, R &amp; D Systems, vb IgGs gibi farklı satıcılardan satın alınmıştır önceki test bazı IgM ve IgE&#39;nin t...

<table border="1"><tbody><tr><td> Kimlik </td><td> Reaktif Adı </td><td> Kısaltma </td><td> Şirket </td><td> # Kataloğa </td></tr><tr><td> L1 </td><td> Biyotinile Concanavalin A </td><td> ConA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L2 </td><td> Tinile Sambucus Nigra Lektin </td><td> SNA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> B-1305 </td></tr><tr><td> L3 </td><td> Tinile Lens Culinaris Aglütinin </td><td> LCA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L4 </td><td> Ricinus Communis Aglütinin Ben biyotinile </td><td> RCA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L5 </td><td> Tinile Aleuria Aurantia Lektin </td><td> AAL </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> B-1395 </td></tr><tr><td> L6 </td><td> Tinile Erythrina Cristagalli Lektin </td><td> ECL </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L7 </td><td> Tinile Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia lektin II </td><td> GSL II </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L8 </td><td> Tinile buğday tohumu Aglütinin </td><td> WGA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L9 </td><td> Tinile Phaseolus vulgaris Erythroagglutinin </td><td> PHA-E </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L10 </td><td> Tinile Phaseolus vulgaris Leucoagglutinin </td><td> PHA-L </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L11 </td><td> Tinile Fıstık Aglütinin </td><td> PNA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L12 </td><td> Pisum Sativum Aglütinin biyotinile </td><td> PSA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L13 </td><td> Tinile Dolichos tohumları biflorus Aglütinin </td><td> DBA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L14 </td><td> Tinile Datura stramonium Lektin </td><td> DSL </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L15 </td><td> Tinile Sophora Japonica Aglütinin </td><td> SJA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L16 </td><td> Tinile Soya Aglütinin </td><td> SBA </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L17 </td><td> Tinile Solanum Tuberosum (Patates) Lektin </td><td> STL </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L18 </td><td> Tinile Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia lektin I </td><td> GSL I </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L19 </td><td> Tinile Vicia villosa Lektin </td><td> VVL </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L20 </td><td> Tinile Lycopersicon esculentum (Domates) Lektin </td><td> LEL </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L21 </td><td> Tinile Ulex europaeus Aglütinin I </td><td> UEA I </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L22 </td><td> Biyotinile Jacalin </td><td> JACALIN </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> A1 </td><td> Keçi F (ab &#39;) 2 Fragment anti-insan IgG, Fc5μ antikoru </td><td> IgM </td><td> Jackson Immuno Araştırma </td><td> 109-006-129 </td></tr><tr><td> A2 </td><td> Eşek F (ab &#39;) 2 Frag anti-insan IgG (H + L) birtibody </td><td> AB1 </td><td> Jackson Immuno Araştırma </td><td> 709-006-149 </td></tr><tr><td> A3 </td><td> Fare anti-insan IgG F (ab &#39;) 2 monoklonal antikor </td><td> AB3 </td><td> Jackson Immuno Araştırma </td><td> 209-005-097 </td></tr><tr><td> A4 </td><td> Keçi anti-insan alfa 2 makroglobulin poliklonal antikor </td><td> A2M </td><td> GeneTex </td><td> GTX62924 </td></tr><tr><td> A5 </td><td> Tavşan anti-insan alfa-1-antitripsin poliklonal antikor </td><td> A1AT </td><td> Lee Biosiences </td><td> CA1T-80A </td></tr><tr><td> A6 </td><td> Fare anti-insan alfa-1-antitripsin monoklonal antikor </td><td> A1AT </td><td> Sigma Aldrich </td><td> SAB4200198 </td></tr><tr><td> A7 </td><td> Tavşan anti-insan alfa-1-antitripsin poliklonal antikor </td><td> ACT </td><td> Boyandı </td><td> RB-367-A1 </td></tr><tr><td> A8 </td><td> Tavşan anti-insanalfa-1-antichymotrypsin poliklonal antikor </td><td> ACT </td><td> Fisher Scientific </td><td> RB9213R7 </td></tr><tr><td> A9 </td><td> Fare anti-insan transferin monoklonal antikor </td><td> Transferrin </td><td> GeneTex </td><td> GTX101035 </td></tr><tr><td> A10 </td><td> Tavşan anti-insan transferin poliklonal antikor </td><td> Transferrin </td><td> GeneTex </td><td> GTX77130 </td></tr><tr><td> A11 </td><td> Keçi anti-insan apolipoprotein J poliklonal antikor </td><td> APOJ </td><td> Abcam </td><td> ab7610 </td></tr><tr><td> A12 </td><td> Fare anti-insan GP73 monoklonal antikor </td><td> GP73 </td><td> Abbott </td><td> 14H4-23 </td></tr><tr><td> A13 </td><td> Fare anti-insan GP73 monoklonal antikor </td><td> GP73 </td><td> SANTA CRUZ BİYOTEKNOLOJİ A.Ş. </td><td> sc-101.275 </td></tr><tr><td> A14 </td><td> Tavşan anti-insan alfa-1 fetoprotein poliklonal antikor </td><td> AFP </td><td> GenWay </td><td> GWB-41C966 </td></tr><tr><td> A15 </td><td> Fare anti-insan alfa-1 fetoprotein monoklonal antikor </td><td> AFP </td><td> Fitzgerald </td><td> 10-A05A </td></tr><tr><td> A16 </td><td> Fare anti-insan hemopexin monoklonal antikor </td><td> Hemopexin </td><td> Assaypro </td><td> 60190-05011 </td></tr><tr><td> A17 </td><td> Fare anti-insan glypican-3 (1G12) monoklonal antikor </td><td> GPL3 </td><td> Santa Cruz Bio </td><td> sc-65.443 </td></tr><tr><td> A18 </td><td> Fare anti-insan Kininogen (LMW) monoklonal antikor </td><td> Kininogen </td><td> Assaypro </td><td> 20333-05011 </td></tr><tr><td> A19 </td><td> Tavşan anti-insan MMP-21 monoklonal antikor </td><td> MMP21 </td><td> Epitomic </td><td> 1955-1 </td></tr><tr><td> A20 </td><td> Fare anti-insan CEACAM-1 monoklonal antikorlarınıny </td><td> CEACAM </td><td> R &amp; D Systems </td><td> MAB1180 </td></tr><tr><td> A21 </td><td> Sıçan anti-insan DPPIV/CD26 monoklonal antikor </td><td> DPPIV </td><td> R &amp; D Systems </td><td> MAB22441 </td></tr><tr><td> A22 </td><td> Fare anti-insan PIVKA II monoklonal antikor </td><td> PIVICA </td><td> Kristal chem </td><td> 8040 </td></tr><tr><td> A23 </td><td> Fare anti-karsinoembriyonik antijen </td><td> CEA </td><td> ABD biyolojik </td><td> C1300 </td></tr><tr><td> A24 </td><td> Fare anti-CA125 Kanser Antijen </td><td> CA125 </td><td> ABD biyolojik </td><td> C0050-01D </td></tr><tr><td> A25 </td><td> Fare anti-CA19-9 Cancer antijeni </td><td> CA19-9 </td><td> ABD biyolojik </td><td> C0075-18 </td></tr><tr><td> A26 </td><td> Fare anti-Lewis x monoklonal antikor </td><td> Lewis X </td><td> Calbiochem </td><td> 434631 </td></tr><tr><td> bio </td><td> Tinile BSA (pozitif kontrol) </td><td> Bio </td><td> Ev yapımı </td><td> N / A </td></tr></tbody></table> Bu protokolde kullanılan lektinler ve antikorların Tablo 1. Listesi. <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif s / ekipmanları Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Temassız microarrayer </td><td> BioDot A.Ş. </td><td> sciFLEXARRAYER </td></tr><tr><td> 384 mikroplaka </td><td> Balıkçı </td><td> 14-230-243 </td></tr><tr><td> FoodSaver </td><td> FoodSaver </td><td> V3835 </td></tr><tr><td> Ultrathin nitroselüloz coate mikroarray slaytlar </td><td> Gentel </td><td> PATH </td></tr><tr><td> Slayt Damgalayıcı (isteğe bağlı) </td><td> Jel Şirket </td><td> WSP60-1 </td></tr><tr><td> Shaker </td><td> Balıkçı </td><td> 15-453-211 </td></tr><tr><td> Santrifüj </td><td> Eppendorf </td><td> 5804 000.013 </td></tr><tr><td> Çıkarılabilir Rack ile Slayt yıkama lavabo / Slayt Boyama Bulaşık </td><td> Balıkçı </td><td> 08-812 </td></tr><tr><td> Slayt inkübasyon odası / mikroskop lamı kutusu </td><td> Balıkçı </td><td> 03-448-5 </td></tr><tr><td> Brij 35, su içinde 30 w / v% çözelti </td><td> Acros Organics </td><td> AC32958-0025 </td></tr><tr><td> Tween-20 </td><td> Balıkçı </td><td> P337-100 </td></tr><tr><td> Sodyum periodat (NaIO 4) </td><td> Sigma </td><td> 311448 </td></tr><tr><td> L-glutamik asit γ-hidrazit </td><td> Sigma </td><td> G-7257 </td></tr><tr><td> Sodyum Asetat Susuz (CH 3 COONa) </td><td> Sigma </td><td> S2889 </td></tr><tr><td> Bovine Serum Albumin (BSA) </td><td> Lampire Biyolojik Labs </td> &lt;td&gt; 7500804 </td></tr><tr><td> Fosfat Tampon Salin (PBS) (10X) </td><td> Denville Bilimsel </td><td> CP4390-48 </td></tr><tr><td> Dylight 549 konjuge NeutrAvidin </td><td> Thermo </td><td> 22837 </td></tr><tr><td> Proteaz İnhibitör Kokteyl Tabletler </td><td> Roche </td><td> 4693159001 </td></tr><tr><td> ChromPure İnsan IgG, Fc parçası </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 009-000-008 </td></tr><tr><td> ChromPure İnsan IgG, tüm molekül </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 009-000-003 </td></tr><tr><td> ChromPure Fare IgG, tüm molekül </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 015-000-003 </td></tr><tr><td> ChromPure Fare IgG, Fc parçası </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 015-000-008 </td></tr><tr><td> Tavşan ChromPure IgG, tüm molekül </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 011-000-003 </td></tr><tr><td> ChromPure Donkey IgG, tüm molekül </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 017-000-003 </td></tr><tr><td> Mikroarray Tarayıcı </td><td> Tecan </td><td> LS Reloaded </td></tr></tbody></table> Bu protokolde kullanılan ekipman ve reaktiflerin Tablo 2. Listesi.

kompleks Örnekleri spesifik protein glikozilasyon arasında multiplexed yüksek verim profilleme için kimyasal-bloke antikor mikroarray

Chemically-blocked Antibody Microarray for Multiplexed High-throughput Profiling of Specific Protein Glycosylation in Complex Samples

Bu çalışmada, spesifik proteinlerin glikozilasyon profillenmesine olanak tanıyan, glikan bağlayıcı protein deteksiyonlu, multipleks yüksek kapasiteli bir antikor mikro dizisi için etkili bir protokol tanımlıyoruz. Proteinlerin glikozilasyonu, proteinlerde bulunan en yaygın translasyon sonrası modifikasyondur ve proteinlerin fiziksel, kimyasal ve biyolojik özelliklerinin çeşitlendirilmiş modifikasyonlarına yol açar. Glikozilasyon mekanizması, hastalık ilerlemesine ve malign transformasyona özellikle yatkın olduğundan, aberan glikozilasyon, kanser ve diğer hastalıklar için erken teşhis biyobelirteçleri olarak kabul edilmiştir. Ancak, protein glikozilasyonunu incelemek için kullanılan mevcut yöntemler genellikle çoğu normal laboratuvar veya klinik ortamda kullanım için çok karmaşık veya pahalıdır ve protein glikozilasyonunu incelemek için daha pratik bir yönteme ihtiyaç duyulmaktadır. Bu çalışmada tanımlanan yeni protokol, glikan bağlayıcı protein (GBP) deteksiyonlu, kimyasal olarak bloke edilmiş bir antikor mikro dizisi kullanmakta olup, protein glikozilasyonunu incelemek için gereken zamanı, maliyeti ve laboratuvar ekipmanı gereksinimlerini önemli ölçüde azaltmaktadır. Bu yöntemde, immobilize edilmiş çok sayıda glikoprotein-spesifik antikor doğrudan mikro dizi lamlarına basılır ve antikorlar üzerindeki N-glikanlar bloke edilir. Bloke edilmiş immobilize glikoprotein-spesifik antikorlar, doğrudan mikro dizi lamlarına uygulanan kompleks bir örnekten glikoproteinleri yakalayabilir ve izole edebilir. Glikan deteksiyonu daha sonra mikro dizi lamına biyotinize lektinlerin ve diğer GBP'lerin uygulanmasıyla gerçekleştirilebilirken, bağlanma seviyeleri Dylight 549-Streptavidin kullanılarak belirlenebilir. Bir antikor paneli ve çoklu biyotinize lektinlerle sondalama yoluyla bu yöntem, belirli bir insan veya hayvan örneğinde bulunan farklı proteinlerin etkili bir glikozilasyon profilinin oluşturulmasına olanak sağlar.
Giriş
Proteinlerin üzerinde en yaygın görülen translasyon sonrası modifikasyon olan glikozilasyon; proteinlerin fiziksel, kimyasal ve biyolojik özelliklerini değiştirir ve çeşitli biyolojik süreçlerde temel bir rol oynar1-6. Glikozilasyon mekanizması özellikle hastalık ilerlemesine ve malign transformasyona karşı duyarlı olduğundan, aberrant glikozilasyon, kanser ve diğer hastalıklar için erken tespit biyobelirteçleri olarak kabul edilmiştir 7-12. Nitekim, hepatosellüler karsinom için α-1 fetoprotein (AFP) L3 fraksiyonu 13-15 ve pankreas kanseri için CA199 16, 17 gibi mevcut kanser biyobelirteçlerinin çoğu, glikoproteinler üzerindeki aberrant glikan kısımlarıdır. Ancak, protein glikozilasyonunu inceleme yöntemleri karmaşıktır ve rutin laboratuvar ve klinik ortamlar için uygun değildir. Chen et al. yakın zamanda, karmaşık bir örnekteki doğal glikoproteinlerin yüksek kapasiteli ve çoklu profil glikozilasyonu için glikan bağlayıcı protein (GBP) tespit yöntemine sahip, kimyasal olarak bloke edilmiş bir antikor mikro dizisi icat etmiştir 18. Afinite tabanlı bu mikro dizi yönteminde, immobilize edilmiş birden fazla glikoprotein spesifik antikor, glikoproteinleri karmaşık karışımdan doğrudan mikro dizi lamı üzerinde yakalar ve izole eder; yakalanan her bir protein üzerindeki glikanlar ise GBP'ler tarafından ölçülür. Tüm normal antikorlar, çoğu GBP tarafından tanınabilecek N-glikanlar içerdiğinden, bu yöntemin kritik adımı, antikorlar üzerindeki glikanların GBP'ye bağlanmasını kimyasal olarak bloke etmektir. Prosedürde, antikorlar üzerindeki glikanların cis-diol grupları, önce ışık olmayan ortamda sodyum asetat tamponu içinde NaIO4 kullanılarak aldehit gruplarına okside edilmiştir. Aldehit grupları daha sonra bir çapraz bağlayıcı olan 4-(4-N-MaleimidoPhenyl)butyric acid Hydrazide HCl (MPBH) hydrazide grubuna konjuge edilmiş, ardından bir dipeptid olan Cys-Gly, MPBH'nin maleimid grubuna konjuge edilmiştir. Böylece, antikor glikanlarındaki cis-diol grupları, lektinlerin ve diğer GBP'lerin yakalama antikorlarına bağlanmasını engelleyen hantal, hidroksil içermeyen gruplara dönüştürülmüştür. Bu bloklama prosedürü, GBP'lerin ve lektinlerin yalnızca yakalanan proteinlerin glikanlarına bağlanmasını sağlar. Bu kimyasal bloklamanın ardından, serum örnekleri antikor mikro dizisi ile inkübe edilmiş, ardından farklı biyotinlenmiş lektinler ve GBP'ler kullanılarak glikan tespiti yapılmış ve Cy3-streptavidin ile görselleştirilmiştir. Bir antikor paneli ve çoklu lektin sondalamasının paralel kullanımı, belirli bir örnekteki birden fazla proteinin ayrı glikozilasyon profillerini sağlar 18-20. Bu yöntem, birçok farklı laboratuvarda başarıyla kullanılmıştır 1, 7, 13, 19-31. Ancak, MPBH ve Cys-Gly'nin stabilitesi ile bu yöntemdeki karmaşık ve uzun prosedür; yöntemin tekrarlanabilirliğini, etkinliğini ve verimliliğini etkilemektedir. Bu yeni protokolde, hem MPBH'yi hem de Cys-Gly'yi çok daha stabil olan tek bir reaktif olan glutamik asit hydrazide (Glu-hydrazide) ile değiştirdik; bu durum yöntemin tekrarlanabilirliğini önemli ölçüde artırmış, tüm prosedürü basitleştirmiş ve kısaltarak bir iş günü içinde tamamlanabilmesini sağlamıştır. Bu yeni protokolde, rutin protein glikozilasyon çalışmaları için normal laboratuvarlar tarafından kolayca benimsenebilecek detaylı prosedürü ve tekrarlanabilir ve tutarlı sonuçlar elde etmek için gerekli teknikleri açıklıyoruz.

Bu çalışmada, özel proteinlerin glikozilasyon profil kullanılabilir lektin saptama yöntemi ile çoklanır yüksek verim antikoru mikroarray için geliştirilmiş bir protokol açıklanmaktadır. Bu protokol, yeni, güvenilir reaktif özellikleri ve önemli ölçüde daha önceki prosedüre göre zaman, maliyet ve laboratuar ekipmanları gereksinimlerini azaltır.

Kompleks Örnekleri spesifik protein Glikozilasyon arasında Multiplexed Yüksek verim Profilleme için Kimyasal-bloke Antikor Mikroarray

Bu çalışmada, glikan bağlayan protein tespitine yönelik, çoklu yüksek verimli bir antikor mikro dizisi kullanımında etkili bir protokol tanımlıyoruz...

Bu video makalesi, kimyasal olarak bloke edilmiş bir antikor mikroarray'i kullanarak bir hepatosellüler karsinom hastasının serum örneğindeki 20 farklı glikoproteinin glikozilasyon profillerinin elde edilme prosedürünü açıklamaktadır. İlk olarak, glikoproteine özgü antikorlar doğrudan mikroarray lamlarına basılır ve lektin bağlanmasını önlemek için antikor glikanları bloke edilir. Hasta serum örnekleri uygulandığında, örnekteki glikoproteinler antikorlar tarafından yakalanır. Ardından, glikanları tespit etmek için biyotinize glikan bağlayıcı proteinler eklenir ve biyotinize lektinleri işaretlemek için di-konjuge neu travain eklenir.Ardından, elde edilen verilerin floresan analizini tespit etmek için mikro array lamı taranır ve bu analiz, örnek proteinlerinin glikozilasyon profillerini ortaya çıkarır. Bu tekniğin, HPLC gibi mevcut yöntemlere göre birkaç avantajı vardır. Bu yöntem, tekil glikoproteinlerin doğal durumlarında tespit edilmesine olanak tanır.Birden fazla proteindeki glikozilasyon değişikliğini eş zamanlı olarak taramak daha hızlı ve kolaydır. Hastalıkların, özellikle de en dikkatli incelediğimiz kanser ve karaciğer kanserinin biyobelirteçlerinin sıklıkla glikozile olduğu

chemically-blocked-antibody-microarray-for-multiplexed-high

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, fare serumunda dolaşımdaki anti-glikan antikorlarını analiz etmek için basılı glikan dizisi teknolojisini göstermektedir. Serumdaki antikorlar, çip üzerindeki spesifik glikanlarla etkileşime girer ve bu, immün boyama ve ardından floresan taraması ile doğrulanır.

Basılı Glikan Dizisi ile Dolaşımdaki Anti-Glikan Antikorlarının Saptanması

Bu video, histon peptitleri üzerindeki translasyon sonrası modifikasyonları (PTM'ler) tanıyan antikorların özgüllüğünü profillemek için peptit mikrodizi teknolojisini uygulayan bir tekniği göstermektedir. Bilinen PTM kombinasyonlarına sahip hareketsizleştirilmiş florofor konjuge histon peptitleri içeren bir mikrodizi slaytı, hedef PTM'ye özgü antikorlarla muamele edilir. Bu işlem, antikorun hedef için özgüllüğünü ve hedef olmayan PTM'lerle potansiyel çapraz reaktivitesini tanımlamaya yardımcı...

Antikorların Özgüllük Profili için Bir Peptit Mikroarray Teknolojisi

Neredeyse tüm S. içeren protein mikrodiziler kullanarak cerevisiae proteom paralel protein-protein etkileşimleri, binlerce hızlı tarafsız sorgulama için incelenir. Bu yöntem, protein-küçük molekül, translasyon sonrası modifikasyon ve yüksek verimlilik Diğer tahliller için kullanılabilecektir.

Yüksek yoğunluklu Fonksiyonel Protein mikrodizileri Probing Protein-protein Etkileşimleri Algılama

Bu protokol hücre sinyal çalışmalar ve biyolojik belirteç tespiti potansiyel uygulamalar ile büyük ölçekli imalat, mültipleksli iki boyutlu DNA veya antikor dizisi, özetlemektedir.

Yüksek yoğunluklu Barkod Antikor Mikroarray Akışı-desen Rehberli Fabrikasyon

N- glukanlardir bağlantı için bir alüminyum oksit kaplı cam sentezi için modüler bir yaklaşım olarak geliştirilen glycan Mikroarray ve geniş antikor nötralize bir HIV profil oluşturma için kullanımı gösterilmiştir (ACG slayt) kaydırın.

N- glukanlardir dizi geliştirme ve HIV antikor için kemoterapi enzimatik sentezi profil oluşturma

İnsan serasındaki anti-Neu5Gc antikorlarını değerlendirmek için bir siyaloglikan mikroarray testi kullanılabilir, böylece kanser ve diğer kronik enflamasyon aracılı insan hastalıkları için yüksek verimli bir tanı testi haline getirilir.

Anti-Neu5Gc IgG&#39;yi İnsan Sera&#39;sında Sialoglikan Mikroarray Testi ile Görüntüleme

Bu eser basılı glycan dizi (PGA) teknoloji küçük hayvanlarda Anti-karbonhidrat antikorlar dolaşan analiz için potansiyelini gösterir.

Basılı Glycan dizi: Anti-karbonhidrat antikorlar küçük hayvanlarda dolaşan repertuar analizi için hassas tekniği

Burada, içinde yüksek üretilen iş ekran ekstraselüler protein microarrays kimliği roman reseptör-ligand etkileşimleri için bir iletişim kuralına mevcut. Ayrıca protein-microbead kompleksleri kullanarak geçici protein-protein etkileşimlerinin algılama geliştirmek için bir yöntem açıklar.

Hücre dışı Protein Mikroarray teknoloji yüksek işlem hacmi düşük benzeşme reseptör-Ligand etkileşimleri algılanması için

Otomatik microbioreactors hasat hücre kültürü sıvı (HCCF) bir monoklonal antikor arıtma ve sonraki analizi için ayrıntılı bir protokol açıklanmıştır. Kritik kalite niteliklerini (CQAs) belirlemek ve önemli bilgileri ayıklamak için sınırlı numune hacmini maksimize etmek için analitiklerin kullanılması da sunulmaktadır.

Otomatik bir Mikrobioreactor sistemi kullanılarak Çin hamster yumurtlama hücrelerinden bir monoklonal antikor arıtma ve analitik

Mikroarray polimer profilleme (MAPP), biyolojik numunelerdeki glikanların bileşimsel analizi için yüksek verimli bir tekniktir.

Yüksek Verimli Glikan Analizi için Mikroarray Polimer Profilleme (MAPP)

Daha önce glikanların proteinler üzerinde otomatik ve hızlı analizi için bir sistem geliştirilmiştir. Bu makale, biyofarmasötikler ve diğer glikokonjugat malzemelerdeki glikan yapılarını analiz etmekle uğraşanlar gibi geniş bir kullanıcı yelpazesi için optimize edilmiş "gliko-kalitatif analiz" protokolünü sunmaktadır.

Tam Otomatik Bir Sistem Kullanılarak Rekombinant Proteinlerin Hızlı Gliko-Kalitatif Değerlendirmesi

Keşfedin, hepatoselüler karsinom serum örneklerinde 20 farklı glikoproteinin glikozilasyon profillerini kimyasal olarak bloke edilmiş antikor mikroarray kullanarak yüksek verimli analiz yöntemini. Bu teknik, geleneksel yöntemlere göre daha hızlı ve ekonomiktir.

Kompleks Örnekleri spesifik protein Glikozilasyon arasında Multiplexed Yüksek verim Profilleme için Kimyasal-bloke Antikor Mikroarray (Video) | JoVE Journal

Kompleks Örnekleri spesifik protein Glikozilasyon arasında Multiplexed Yüksek verim Profilleme için Kimyasal-bloke Antikor Mikroarray

Daha fazla video keşfet