Beyin Dokusundaki Anormal Prion Proteinlerinin İmmünohistokimya Kullanılarak Saptanması

Yanlış katlanmış prion protein agregatları sergileyen sabit bir memeli beyin bölümü ile bir slayt yapın.

Prion agregatlarının enfektivitesini azaltmak için bölümü formik asit ile muamele edin.

Hidratlı bir basınç odası içinde asidik bir tampon ile muamele edin. Yüksek ısı ve asidik pH kırma fiksasyonunun neden olduğu protein çapraz bağları, antijenik epitopları maskeler.

İstenmeyen arka plan lekelenmesini önlemek için endojen peroksidazı etkisiz hale getirmek için hidrojen peroksite daldırın.

Slaytı bir kapak plakasına yerleştirin ve doku hidrasyonunu korumak için bir tampon ekleyin.

Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önleyen bir bloke edici çözelti tanıtın.

Prion agregatlarına özgü bir primer antikor ekleyin.

Bağlanmamış antikor moleküllerini çıkarın. Birincil antikora bağlanan biyotinile edilmiş bir ikincil antikor tanıtın.

Bağlanmamış antikor moleküllerini çıkarın. İkincil antikor üzerindeki biyotine bağlanan avidin ile komplekslenmiş bir biyotinile peroksidaz enzimi ekleyin.

Peroksidazın renkli bir ürüne oksitlediği kromojenik bir substrat ekleyin.

Bir mikroskop kullanarak lekeli agregaları gözlemleyin.

Doku bölümlerini oda sıcaklığında 30 dakika boyunca% 98 formik aside dik