JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:21 dk. • July 8th, 2025
Yapışmış insan pluripotent kök hücrelerini bir transfeksiyon reaktifinde tasarlanmış lentivirüslerle tedavi edin.
Virüs, tetrasikline duyarlı ve düzenleyici elemanlar tarafından kontrol edilen antibiyotik direnci ve nörojenik transkripsiyon faktörü için genler taşır.
Pozitif yüklü transfeksiyon reaktifi, viral füzyonu ve içerik salınımını arttırır.
Viral RNA, DNA'ya ters kopyalar ve kök hücre DNA'sına entegre olur, bu da aktivatör proteinler üreten düzenleyici elementlerin ekspresyonunu sağlar.
Aktivatör proteinleri ile bir kompleks oluşturan tetrasiklin türevi ile bir bazal ortam ekleyin.
Bu kompleks, tetrasikline duyarlı elemente bağlanır, gen ekspresyonunu teşvik eder ve kök hücrenin nöronlara farklılaşmasını indükleyen nörojenik transkripsiyon faktörlerini üretir.
Transfekte edilmemiş hücreleri ortadan kaldırmak için bir antibiyotik ilacı ile bir bazal ortam ekleyin.
Hücreleri, hücre dışı matrisi veya ECM'yi bozan ve hücreleri serbest bırakan proteolitik enzimler içeren bir ayırma solüsyonu ile tedavi edin.
Enzimleri çıkarın ve hücreleri, nöronal olgunlaşmayı teşvik eden bir olgunlaşma ortamı ile ECM kaplı oyuklara yeniden plakalayın.
Farklılaşma indüksiyonundan iki gün önce, 1
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin