Efficient Chromatin Immunoprecipitation using Limiting Amounts of Biomass

Dean Tantin; Warren P. Voth; Arvind Shakya

doi:10.3791/50064

Biyokütle Limit Tutarlar kullanarak Verimli Kromatin Immunoprecipitation

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Efficient Chromatin Immunoprecipitation using Limiting Amounts of Biomass

Biyokütle Limit Tutarlar kullanarak Verimli Kromatin Immunoprecipitation

Full Text

14,765 Views

14:29 min

May 1, 2013

DOI: 10.3791/50064-v

Dean Tantin¹, Warren P. Voth¹, Arvind Shakya¹

¹Department of Pathology,University of Utah School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Biz primer T hücreleri kullanarak kromatin immunoprecipitation için bir sağlam bir yöntem tarif. Metodu standart yaklaşımlar üzerine kurulmuştur, ama hücrelerin sınırlı bir miktarda için verimliliği artırmak koşulları ve reaktifler belirli bir kümesi kullanır edilir. Önemli olarak, veriler analiz aşaması bölgesinin, bir ayrıntılı bir açıklama sunulmaktadır edilir.

Aşağıdaki deneyin genel amacı, transkripsiyon faktörleri gibi DNA bağlayıcı proteinlerin bağlanmasını veya taş modifikasyonlarını tespit etmektir. Bu, önce kromatinin ikinci bir adım olarak hazırlanmasıyla elde edilir. İlgilenilen proteine bağlı DNA parçalarını aşağı çekmek için bir kromatin immünopresipitasyon reaksiyonu kurulur.

Daha sonra, ilgilenilen proteine bağlanan DNA fragmanı PCR ile amplifiye edilir. QPCR analizine dayalı olarak, ilgilenilen proteine bağlı DNA fragmanının, bağlanmamış bir bölgeye kıyasla kat olarak zenginleştiğini gösteren sonuçlar elde edilir. Bu yöntem, farklı modifiye edilmiş veya modifiye edilmemiş proteinlerin ne zaman ve nerede mevcut olduğu gibi transkripsiyon, kromatin ve epigenetik alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos