Name: Mikroakışkan Akış Chambers Hemostaz ve Trombosit Transfüzyon Model Sulandırılarak Kan kullanma İn Vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 25 s
Description: Öğrenin mikroakışkan akış odaları kullanarak trombosit transfüzyonunu in vitro taklit etme ve hemostaz fonksiyonunu değerlendirme yöntemini. Bu teknik, depolanmış trombosit konsantrelerinin kalitesini ve işlevselliğini analiz eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarların teşekkür hakkı yok.

Bu protokol, insan numuneler üzerinde araştırmalar için kurumsal etik kuralları takip ve bilgilendirilmiş onam ilgili tüm vericilerden elde edildi. Burada tarif edilen deneyler için onay Antwerp Üniversitesi Hastanesi kurumsal inceleme kurulu elde edilmiştir. Not: belirtilmediği sürece Sıcaklık göstergeleri, her zaman oda sıcaklığı vardır. 1. Hazırlık Akış Odası Kurulumu <ol><li> Hazırlama Lanes, Boru ve iğneler <ol><li> Vorteks kuvvetli bir şekilde kollajen süspansiyonu ve 50 ug / ml&#39;lik bir nihai konsantrasyona kadar sağlayıcı tarafından sağlanan izotonik glikoz çözeltisinde 1/20 seyreltin. Not: Biz esas olarak tip I fibriller oluşur, at tendon kollajen kullanın. At kollajen tip I sık sık &quot;Horm&quot; kolajen olarak adlandırılır ve tarihsel yanı sıra biyolojik nedenlerle hem tahlil 9 bu tür altın standardı mesafesindedir. İnsan tip III kollajen de kullanılabilir, ancak inci edilebilire daha az kat fibrillerinde ve trombosit cevabı kadar güçlü değildir. Diğer kaplama yüzeyleri de, örneğin von Willebrand Faktörü (vWF), fibrinojen, fibronektin, laminin, vitronektin, trombospondin-1 ya da bu 16 kombinasyonları için, kullanılabilir. </li><li> sağlayıcının kaptan yeni bir atılabilir Bioçip alın. Burada kullanılan bioçipler boyutları mm 3 0.4 W x 0.1 H x 20L vardır. </li><li> Pipetleyin çıkış olarak çip ve işaretinin bir ucunda mikroakışkan Biochip kulvar (lar) 0.8 ul. şerit 1.1.1 hazırlanan kaplama çözeltisi içeren kollajen ile 5 / 6th dolu olduğundan emin olun. hiç hava kabarcığı olmadığından emin olun. Not: Kanallar kısmen (tartışma) kanalı girişinde kollajen liflerinin birikmesini önlemek için kaplanır. </li><li> nemlendirilmiş ve kapalı bir kap içinde 4 saat veya gece boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> / H) inek serumu albumin (w bloke edici tampon (% 1.0 pipetleme kaplanmış kanallarını blokediğer ucu ile gösterirken, d,% 0.1 (a / h) glukoz, 10 mM 4- (2-hidroksietil) -1-piperazinetansülfonik asit (HEPES) tamponlu tuzlu su (hacim / hacim) NaCl, pH 7.4% 0.9 (HBA) &#39;de giriş olarak. şerit tamamen hava kabarcıkları kaçınarak engelleme tamponu ile dolu olduğundan emin olun. </li><li> eşit uzunlukta (12 cm) hortumu kesilir. kulvar başına birini kullanın ve bir iğne ile her tüp bağlayın. Örneğin, iki nüsha halinde çalışan iki koşulları karşılaştıran bir deney, dört boru uzanıyor ve dört pim hazırlanacak gerektirecektir. </li><li> bir şırınga ve bir 26 G iğne ya da eşlik eden bağlayıcıları kullanılarak saf su ile boru durulayın. </li><li> bloklama tamponu ile boru doyurabilecek. 1 saat arasında, en az bir kapalı ve nemli bir kap içinde depolayın. </li></ol></li><li> Pompa ve Manifold hazırlama <ol><li> hava kabarcıklarını çıkarmak, pompayı durulayın ve damıtılmış su ile manifoldu. </li><li> çıkışında sabit 10 ul ucunu kullanarak biyoçip şeritli (ler) engelleme tampon aspire. yüzeyini temizleyinhassas silip toz ve denatüre alkol ile Biochip baskılar ve tozunu alın. </li><li> otomatik mikroskop sahnede Bioçip sabitleyin. Birden fazla şeritli bir seferde aynı anda kullanılırsa, biyoçip çıkışına sekiz şerit manifoldu ayırıcı bağlanır. Not: Sekiz şeritli manifoldu ayırıcı donanım parçasıdır (Şekil S1) pompa ve Biochip bağlı. Bu Bioçip veya operatör tanımlı eden yazılım olabilir şerit kombinasyonuna tüm (sekiz) şerit çalışmasını sağlar. </li><li> biochipin girişinde bunları düzeltmek için tüp işaretçilerine kullanın. HBS ile doldurulmuş 1.5 ml konik biçiminde bir test tüpü içinde (PIN olmadan) hortumun diğer ucu yerleştirin. kalan tampon engelleme ve kötü kolajen yapışmış kaldırmak amacıyla, tüm boru ve 1 ml HBS pompa kullanılarak onların bağlı şerit durulayın. </li></ol></li></ol> Kan Örneklerinin 2. Hazırlık <ol><li> Toplama ve ayırmaSağlıklı bir gönüllüden taze tam kan. 17 <ol><li> Bir pıhtılaşma önleyici olarak etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ihtiva eden bir tahliye borusu kan ilk mililitre toplamak ve özel olarak otomatik bir hematoloji analiz cihazı ile tam kan sayımı (CBC), bu örnek kullanın. </li><li> tahliye tüpler kullanılarak uygun bir antikoagülan kan hacmi toplayın. oluşumunu fibrin çalışma protokolüne ve sodyum sitrat parçası değilken akış odası deneyleri için standart antikoagülan heparin ya da hirudindir vardır. Not: Heparin açıklanan tüm deneyler için bir antikoagulan olarak kullanılmıştır. Not: kan miktarı yapılacak deneyler sayısına bağlıdır. Yaklaşık 3 şerit 1 borusu (7 mi). </li><li> Bir rotator bekleyen kan sulandırma üzerinde tüpler yerleştirin. Not: Tahlil Flebotomi 3 saat içinde tamamlanmalıdır. </li><li> Trombosit bakımından zengin plazma 250 g&#39;da 15 dakika boyunca santrifüj (PRP). gevşekçe paketlenmiş pelet olumsuz yönde etkilenmemesi için santrifüj mola kullanmayın. <ol><li> Birden fazla tüp toplandı zaman, tek bir konik santrifüj tüpü içinde kan havuzu. Not: Santrifüj PRP verim ve ayırıcı hücre &quot;kontaminasyon&quot; bağlı, daha yavaş ya da daha az uzun yapılabilir tercih. </li></ol></li><li> Çıkarın ve birkaç trombositler ile dolu kırmızı kan hücrelerinin veren PRP ve buffy coat atın. Bizim elimizde ortalama ul başına 13 ± 5 x 10 3 paketlenmiş kırmızı hücre fraksiyonunda trombosit sayısı ise (ortalama ± SD, n = 12): Not. </li></ol></li><li> kan Sulandırma <ol><li> 5 dakika ve 4 ml başına 20 saniye süreyle, 37 ° C&#39;de çözülme kan grubu AB (Rhesus D negatif), plazma. </li><li> otomatik bir hematoloji analiz cihazı kullanılarak 2.1.5 hazırlanan paketlenmiş kırmızı kan hücrelerinin hematokriti belirler. </li><li> Kan bankasında trombosit konsantrasyonunu belirlemek trombosit konsantresi tha hazırlanmışT, yukarıda kırmızı hücre fraksiyonu tekrar oluşturmak için kullanılır. </li><li> 1 ml&#39;lik bir örnek% 40 hematokrit ve 250 x 10³ trombosit / ul verecektir eritrosit, trombosit konsantresi hacmini hesaplar. Not: Hücrelerin Diğer hedef titreleri çalışma protokolüne bağlı olarak, keyfi olarak ayarlanabilir. </li><li> Transfer kırpılmış bir pipet ucu kullanılarak ve 1 ml lik bir numune hacmi elde edilene kadar trombosit konsantresi ilave taze tüpe kırmızı kan hücreleri ve plazma paketlendi. Not: Plazma trombüs oluşumu oranı üzerinde önemli bir etkiye sahip olduğu değişkenler okudu bağlı olarak, plazma fraksiyonu tüm sulandırılmış örneklerde eşit olmalıdır. Örneğin, sonuç etkileyebilir farklı donörden veya farklı antikoagülan alınan donma-çözülme ya da plazma tekrarladı. </li><li> yavaşça ters çevirerek yeniden kan karıştırın ve bir CBC gerçekleştirin. </li><li> trombosit fraksiyonun hacmi ikame edildiği bir &quot;boş&quot; kontrol numunesi hazırlanması% 0.9 su (kütle / hacim) sodyum klorür, aynı hacimde bir CBC kullanılarak yeniden kan endojen trombosit konsantrasyonu (yani, kan bankası trombositler) belirlemek gerekmektedir. </li></ol></li><li> etiketleme <ol><li> Pipet 1 mi 1 ul 5 mM Calcein AM (5 uM nihai konsantrasyon) ihtiva eden bir test tüpüne kan yeniden. Not: Diğer hücre boyalar 14 kullanılabilir. </li><li> ters çevirerek yavaşça karıştırın. </li><li> kullanımdan önce, 37 ° C&#39;de 5 dakika süreyle inkübe edilir. </li></ol></li></ol> 3. Perfüzyon Testi <ol><li> şerit dibinde yapıştırılır kollajen lifleri üzerinde nesnel odaklanın. İdeal olarak, bu odaklanma stratejisi için faz-kontrast veya diferansiyel girişim kontrast (DIC) ayarlarını kullanın. dijital seçilen Z-pozisyonları düzeltmek için deneme yazılımı &#39;seçilen çini bölgeler için ayarlayın akım Z&#39; seçeneğini seçin. </li><li> m deney yazılımı şeritli (xy) ilgi (ROI) bir bölge seçinDeney sırasında kaydedilir icroscope. Not: ROI keyfi bir perfüzyon şeritte içinde seçilen herhangi bir yüzey alanı olabilir. Nedenle bu göreceli olarak küçük olsa da, bu bölgede değişken akış profilinin yan etkilerden kaçınmak için yakın bir şeritli giriş ve çıkışına trombüs oluşumunu analiz için tavsiye edilir. YG yüzey alanı trombositlerin önemli sayıda içeren ya da sinyal tesviye izin trombüs gerekir. Bu protokolde YG 2 cm uzunluğundaki Lane ortasında 0.62 mm 2&#39;de elde edilen üç eşit yan tarafında bir görüntü dijital olarak dikilmiş toplamıdır. </li><li> yavaşça tersini örnekleri karıştırın ve otomatik sahnede Biochip bu sonraki yerleştirin. </li><li> sulandırılmış kan örnekleri içeren test tüplerinde Biochip girişi ile bağlantılı olan boru yerleştirin. </li><li> Test tüplerine bağlı olan kanallar için (istediğiniz gibi ya da diğer kesme stresleri) 50 din / cm2 pompayı başlatınpompa yazılımı kullanılarak yeniden kan örnekleri ihtiva etmektedir. Not: Diğer kayma gerilmeleri kullanılabilir. </li><li> Tutanak görüntüleri mikroskop edinimi ve deney yazılımı kullanarak gerçek zamanlı olarak 5 dakika boyunca her 15 sn. Not: Diğer zaman serisi deneysel set-up bağlı kullanılabilir. Not: Genellikle 100X büyütme (10X objektif ve 10X lens) kullanır, ancak daha yüksek (veya daha düşük) büyütme kolayca bir alternatif olarak kullanılabilir. </li></ol> 4. Yıkama Out <ol><li> sodyum hipoklorit (çamaşır suyu)% 0.5, ardından her tüp çıkışına bağlı ve damıtılmış su kullanılarak çok kanallı manifoldu veya pompaya bağlı yıkayın (h / h) ve su son olarak 0.1 M NaOH. tehlikeli atık olarak biyoçip girişine tutturulmuş boru atın. </li></ol> 5. Veri Analizi <ol><li> görüntü analiz yazılımı ile trombüs büyüme kinetikleri belirleyin. aşağıdaki komutlar ZEN2012 özgüdür. <ol&gt; <li> Trombositlerin yüzey kapsama belirlemek için eklenti Görüntü Analizi açın. </li><li> Olumlu bir sinyal ile ilişkilidir piksel yoğunluğunu belirlemek için İnteraktif sekmesini Analiz, yani bir yapışık trombosit ya da yapışan trombositler floresan eşiğini ayarlayın. </li><li> Otomatik olarak seçilen eşik arasında bir sinyal ile pikselleri ihtiva eden &quot;nesnelerin&quot; nin (mikron 2) ayrı yüzey alanlarını içerecek bir elektronik tablo oluşturmak için Tablolar oluşturma kullanın. Bu, her bir zaman noktası için gerçekleştirilir. Not: floresan eşikleri seçti edildikten sonra, analiz yazılımı otomatik olarak kriterleri yerine görünüm alanına &#39;nesneleri&#39; olarak algılar. Bu nesneler trombüsler, küçük trombosit agrega veya tek trombositler ve piksel sayısını kapsamaktadır. Her nesne ayrı ayrı e-tabloda listelenir. </li><li> xml formatında bu elektronik tabloları kaydedin ve bir elektronik tablo programı bunları açıksonraki hesaplamalar için. </li><li> Toplamı ile seçilen nesnelerin toplam yüzey alanları ve ölçüm alanına (mikron 2) toplam alanın tarafından sonucu bölün. Bu göreceli yüzey kaplama (%) verecektir. Her zaman noktası için bunu. </li><li> Perfüzyon, zamanın bir fonksiyonu olarak, bu yüzey Kapsamlı Konu ve söz konusu durumun trombüs büyümesi kinetiğini sonuçta, doğrusal regresyon ile eğimi hesaplanır. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Broos, K., Feys, H. B., De Meyer, S. F., Vanhoorelbeke, K., Deckmyn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+at+work+in+primary+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Rev%22%5BJournal%5D)">Platelets at work in primary hemostasis.</a> Blood Rev. 25, 155-167 (2011).</li>
<li>Stalker, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+organization+in+the+hemostatic+response+and+its+relationship+to+the+platelet-signaling+network%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hierarchical organization in the hemostatic response and its relationship to the platelet-signaling network.</a> Blood. 121, 1875-1885 (2013).</li>
<li>Sakariassen, K. S., Bolhuis, P. A., Sixma, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+blood+platelet+adhesion+to+artery+subendothelium+is+mediated+by+factor+VIII-Von+Willebrand+factor+bound+to+the+subendothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Human blood platelet adhesion to artery subendothelium is mediated by factor VIII-Von Willebrand factor bound to the subendothelium.</a> Nature. 279, 636-638 (1979).</li>
<li>Savage, B., Saldivar, E., Ruggeri, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+of+platelet+adhesion+by+arrest+onto+fibrinogen+or+translocation+on+von+Willebrand+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Initiation of platelet adhesion by arrest onto fibrinogen or translocation on von Willebrand factor.</a> Cell. 84, 289-297 (1996).</li>
<li>Westein, E., de Witt, S., Lamers, M., Cosemans, J. M., Heemskerk, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+in+vitro+thrombus+formation+with+novel+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Monitoring in vitro thrombus formation with novel microfluidic devices.</a> Platelets. 23, 501-509 (2012).</li>
<li>Varga-Szabo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+calcium+sensor+STIM1+is+an+essential+mediator+of+arterial+thrombosis+and+ischemic+brain+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">The calcium sensor STIM1 is an essential mediator of arterial thrombosis and ischemic brain infarction.</a> J Exp Med. 205, 1583-1591 (2008).</li>
<li>Westein, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerotic+geometries+exacerbate+pathological+thrombus+formation+poststenosis+in+a+von+Willebrand+factor-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Atherosclerotic geometries exacerbate pathological thrombus formation poststenosis in a von Willebrand factor-dependent manner.</a> Proc Natl Acad Sci USA. , (2013).</li>
<li>Grabowski, E. F., Yam, K., Gerace, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+hemostasis+in+flowing+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of hemostasis in flowing blood.</a> Am J Hematol. 87 (Suppl 1), S51-S55 (2012).</li>
<li>Roest, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+chamber-based+assays+to+measure+thrombus+formation+in+vitro%3A+requirements+for+standardization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Flow chamber-based assays to measure thrombus formation in vitro: requirements for standardization.</a> J Thromb Haemost. 9, 2322-2324 (2011).</li>
<li>Heemskerk, J. W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+surfaces+to+measure+thrombus+formation+under+flow%3A+possibilities+for+standardization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Collagen surfaces to measure thrombus formation under flow: possibilities for standardization.</a> J Thromb Haemost. 9, 856-858 (2011).</li>
<li>Shrivastava, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+platelet+storage+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus+Apher+Sci%22%5BJournal%5D)">The platelet storage lesion.</a> Transfus Apher Sci. 41, 105-113 (2009).</li>
<li>Miyaji, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+platelet+aggregation+of+platelet+concentrate+during+storage+recovers+in+the+body+after+transfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Decreased platelet aggregation of platelet concentrate during storage recovers in the body after transfusion.</a> Transfusion. 44, 891-899 (2004).</li>
<li>Goodrich, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+in+vitro+platelet+quality+measurements+with+in+vivo+platelet+viability+in+human+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Correlation of in vitro platelet quality measurements with in vivo platelet viability in human subjects.</a> Vox Sang. 90, 279-285 (2006).</li>
<li>Van Aelst, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Riboflavin+and+amotosalen+photochemical+treatments+of+platelet+concentrates+reduce+thrombus+formation+kinetics+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Riboflavin and amotosalen photochemical treatments of platelet concentrates reduce thrombus formation kinetics in vitro.</a> Vox Sang. 108, 328-339 (2015).</li>
<li>Van Aelst, B., Devloo, R., Vandekerckhove, P., Compernolle, V., Feys, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultraviolet+c+light+pathogen+inactivation+treatment+of+platelet+concentrates+preserves+integrin+activation+but+affects+thrombus+formation+kinetics+on+collagen+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Ultraviolet c light pathogen inactivation treatment of platelet concentrates preserves integrin activation but affects thrombus formation kinetics on collagen in vitro.</a> Transfusion. , (2015).</li>
<li>de Witt, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+platelet+function+defects+by+multi-parameter+assessment+of+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Identification of platelet function defects by multi-parameter assessment of thrombus formation.</a> Nat Commun. 5, 4257(2014).</li>
<li>Cazenave, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+washed+platelet+suspensions+from+human+and+rodent+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Preparation of washed platelet suspensions from human and rodent blood.</a> Methods Mol Biol. 272, 13-28 (2004).</li>
<li>Jackson, S. P., Nesbitt, W. S., Westein, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+platelet+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Dynamics of platelet thrombus formation.</a> J Thromb Haemost. 7 (Suppl 1), 17-20 (2009).</li>
<li>Diedrich, B., Remberger, M., Shanwell, A., Svahn, B. M., Ringden, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+randomized+trial+of+a+prophylactic+platelet+transfusion+trigger+of+10+x+10%289%29+per+L+versus+30+x+10%289%29+per+L+in+allogeneic+hematopoietic+progenitor+cell+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">A prospective randomized trial of a prophylactic platelet transfusion trigger of 10 x 10(9) per L versus 30 x 10(9) per L in allogeneic hematopoietic progenitor cell transplant recipients.</a> Transfusion. 45, 1064-1072 (2005).</li>
<li>Neeves, K. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sources+of+variability+in+platelet+accumulation+on+type+1+fibrillar+collagen+in+microfluidic+flow+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one+%22%5BJournal%5D)">Sources of variability in platelet accumulation on type 1 fibrillar collagen in microfluidic flow assays.</a> PloS one . 8, e54680(2013).</li>
<li>Born, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregation+of+blood+platelets+by+adenosine+diphosphate+and+its+reversal%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal.</a> Nature. 194, 927-929 (1962).</li>
<li>Cattaneo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+the+Standardization+of+Light+Transmission+Aggregometry%3A+A+Consensus+of+the+Working+Party+from+the+Platelet+Physiology+Subcommittee+of+SSC%2FISTH%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Recommendations for the Standardization of Light Transmission Aggregometry: A Consensus of the Working Party from the Platelet Physiology Subcommittee of SSC/ISTH.</a> J Thromb Haemost. 11, 1183-1189 (2013).</li>
<li>Deckmyn, H., Feys, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assays+for+quality+control+of+platelets+for+transfusion%5BTitle%5D)+AND+%22ISBT+Sci+Series%22%5BJournal%5D)">Assays for quality control of platelets for transfusion.</a> ISBT Sci Series. 8, 221-224 (2013).</li>
<li>Andre, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticoagulants+%28thrombin+inhibitors%29+and+aspirin+synergize+with+P2Y12+receptor+antagonism+in+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Anticoagulants (thrombin inhibitors) and aspirin synergize with P2Y12 receptor antagonism in thrombosis.</a> Circulation. 108, 2697-2703 (2003).</li>
<li>Casari, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((von+Willebrand+factor+mutation+promotes+thrombocytopathy+by+inhibiting+integrin+alphaIIbbeta3%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">von Willebrand factor mutation promotes thrombocytopathy by inhibiting integrin alphaIIbbeta3.</a> J Clin Invest. 123, 5071-5081 (2013).</li>
<li>Gitz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+platelet+survival+after+cold+storage+by+prevention+of+Glycoprotein+Ib%CE%B1+clustering+in+lipid+rafts%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Improved platelet survival after cold storage by prevention of Glycoprotein Ibα clustering in lipid rafts.</a> Haematologica. , (2012).</li>
<li>Maurer-Spurej, E., Labrie, A., Brown, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Routine+Quality+Testing+of+Blood+Platelet+Transfusions+with+Dynamic+Light+Scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Part+Part+Syst+Char%22%5BJournal%5D)">Routine Quality Testing of Blood Platelet Transfusions with Dynamic Light Scattering.</a> Part Part Syst Char. 25, 99-104 (2008).</li>
<li>Van Kruchten, R., Cosemans, J. M., Heemskerk, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+whole+blood+thrombus+formation+using+parallel-plate+flow+chambers+-+a+practical+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Measurement of whole blood thrombus formation using parallel-plate flow chambers - a practical guide.</a> Platelets. 23, 229-242 (2012).</li>
<li>Zwaginga, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-based+assays+for+global+assessment+of+hemostasis.+Part+2%3A+current+methods+and+considerations+for+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Flow-based assays for global assessment of hemostasis. Part 2: current methods and considerations for the future.</a> J Thromb Haemost. 4, 2716-2717 (2006).</li>
<li>Zwaginga, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-based+assays+for+global+assessment+of+hemostasis.+Part+1%3A+Biorheologic+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Flow-based assays for global assessment of hemostasis. Part 1: Biorheologic considerations.</a> J Thromb Haemost. 4, 2486-2487 (2006).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Mikroakışkan akış odası deneyleri kan akan trombosit fonksiyonlarını araştırmak için mükemmel bir araçtır ve deneysel bağlamlarda farklı in vitro hemostaz değerlendirmek için kullanılır. Fakir laboratuvarlar arası standardizasyonun 9 rağmen bizim laboratuvar içinde deneysel varyasyon kabul edilebilir olduğunu göstermektedir. Bu güvenilir, belirli bir çalışma içinde (eşli) örnekleri karşılaştırmak için izin verir. Bu kan bankası koşullarında 11 trombosit depolama zararlı sonucudur trombosit...

Hemostaz kısıtlı zamanmekansal bağlamda 1 hücreleri, proteinler, iyonlar ve dokuların kombine ve düzenlenmiş aktivite gerektirir. Kontrolsüz etkinliği kan pıhtılaşması ile ilgili bozuklukların bir spektrum içinde kanama ve tromboz ve morbidite ve mortaliteye neden olabilir. Bir mikroakışkan akış odası deneyi in vitro hemostazisi taklit zorlu bir tekniktir. Bu yaklaşım, kan trombositlerin için öncü bir role sahip hemostaz katılan süreçlerin karmaşık etkileşimin soruşturma sağlar. vasküler hasar ardından, trombositler, kan kaybını önlemek için maruz subendotelyal matris (gliko) proteinlere yapışır. Yapışma ardından, trombositler aktive ve yanıt olarak agrega matik ve nihayet bir trombosit ağının oluşumu, fibrin tarafından stabilize ve bir firmaya neden neden parakrin sinyal için, trombüs 2 sızdırmazlık yara. Diğer çoğu trombosit fonksiyon testleri, deney aksineAkış odaları ile ments dikkate kan akımının fiziksel parametre ve bu nedenle katılımcı hücreler ve biyomoleküllerin 3,4 tarihinde reolojinin etkisini alır. Akış odası deneyleri yapışkan matrisi, reoloji ve akış profilleri, hücresel kompozisyon, toksinler veya ilaç, iyonik kuvvet ve daha birçok varlığı da dahil olmak üzere süreçler hemostatik (alt) etkileyen önemli parametreler değiştirilerek hemostaz ve tromboz dönüm noktası anlayışlar yarattı. Son yirmi yılda, büyük örneklem hacimleri (10-100 ml) gerektiren düşük verim akım odası deneyleri mikroakışkan odaları genellikle küçük paralel plaka odadan oluşan ve kontrollü duvar kesme koşullarında 5 de tam kan perfüze için modern teknolojiyi dahil etmek gelişmiştir. donanım kurulum basitleştirilmiş ve daha az (kan) hacmi gereklidir çoğunlukla nedeniyle Microscaling önemli ölçüde deneme daha erişilebilir ve Versati render tahlil verimi arttıle. Örneğin, küçük laboratuar hayvanlarından kan Böylece hayvanlar kurban gerek kalmadan kullanılabilir. Genetiği değiştirilmiş farelerin kan örnekleri böylece hemostaz teşvik veya inhibe anahtar moleküller belirlenmesinde ve yeni temel anlayışlar 6 yardımcı olmaktadır. Özel araştırma laboratuarları çoğu hala yazılım tarafından blueprinted edilebilir Baskılı kalıplara polimerize polidimetilsiloksan (PDMS) 7 den, örneğin özel yapılmış akış odaları kullanın. Ortaya çıkan odası, ucuz tek kullanımlık ve kolayca post hoc analizi için demonte edilebilir. Ayrıca, temelde gemiler de dahil olmak üzere bifurkasyonlarında veya keskin dönüşler herhangi bir tasarım komutu üzerine inşa edilebilir. Bu avantaj da standardizasyon zaten akış odası deneyleri ile birincil sorun bu yana olumsuz ve PDMS özel odalar bu destekli değil yaptı. Bu belirli bir sorunun üstüne kaplama (şartlar), floresan probları, antikoagülan, geçici üzerindenumune alma ve analiz arasındaki kısa süreli olarak ve zaman tüm kötü 8 standardize edilmiştir. Bu değişkenlerin Standardizasyon zorlu ama yine de laboratuarlar arasında sonuçların karşılaştırılmasına olanak gerekmektedir. Bu konu Biorheology 9,10 Bilimsel ve Standardizasyon alt komite Tromboz ve hemostaz üzerine International Society önemli bir konudur. Trombosit konsantreleri (PC) trombositopeni ve / veya kanamaya neden çeşitli hastalıklardan mustarip hastalarda transfüzyon. Ama PC trombositler özellikle depolama süresinin 11 işlevinde, duyarsız bilinen bir bozulma süreci yaşlanma ve yaygın olarak trombosit saklama lezyon olarak anılacaktır bağlantılı. Bazen bu tür plateletler kez 12 transfüzyon dolaşımda geri iddia edilmektedir, ancak bunun için kanıt azdır. Ayrıca, bir PC oluşturan trombosit işlevselliği rutin test değil çünkü bu tür tahliller arasındaki ilişkiterapötik ya da profilaktik etkisi açık 13&#39;tür. Mikroakışkan akış odaları toplama ve ihracı arasındaki manipülasyonlar zincirini optimize etmek için PC trombosit fonksiyonlarını araştırmak için bir araç sunuyoruz. Biz daha önce 14,15 yayınlanmış ve burada tarif edildiği gibi PC doğrudan (eşli) karşılaştırmalar için güçlü bir araştırma aracıdır.

<table><tbody><tr><td>EDTA&nbsp; ile BD vakum tüpü;</td><td>Becton, Dickinson ve Şirketi</td><td>368856</td><td></td></tr><tr><td>Heparinli BD vakum tüpü</td><td>Becton, Dickinson ve Şirketi</td><td>368480</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Sitrat ile BD vakum tüpü</td><td>Becton, Dickinson ve Şirketi</td><td>366575</td><td></td></tr><tr><td>Hirudin Kan tüpü</td><td>Roche</td><td>6675751 001</td><td></td></tr><tr><td>BD elektrikli süpürge Eclipse</td><td>Becton, Dickinson ve Şirketi</td><td>368650</td><td>Önceden takılmış tutuculu kan alma iğnesi</td></tr><tr><td>Pipet uçları 100-1.000</td><td>Greiner bio-one</td><td>740290</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları 2-200</td><td>Greiner bio-one</td><td>739280</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları 1-10</td><td>Eppendorf</td><td>A08928</td><td></td></tr><tr><td>Tüp 5 ml</td><td>Simport</td><td>11691380</td><td></td></tr><tr><td>Konik tüp 15 ml</td><td>Greiner bio-one</td><td>1888271</td><td></td></tr><tr><td>Konik tüp 50 ml</td><td>Greiner bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Şırınga</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Hassas mendiller</td><td>Kimtech</td><td>5511</td><td></td></tr><tr><td>Vena8 Fluoro+ Biochips</td><td>Cellix</td><td>188V8CF-400-100-02P10</td><td>Figure S1 A'da 'Biochip' olarak adlandırılmıştırVena8</td></tr> <tr><td>Boru Cellix</td><td></td><td>TUBING-TYGON-B1IC-B1OC-ROLL 100F</td><td>Figure S1 B'de 'Tek kullanımlık boru' olarak</td></tr> adlandırılmıştırVena8 <tr><td>İğneleri</td><td>Cellix</td><td>SS-P-B1IC-B1OC-PACK200</td><td><güçlü> Şekil S1</güçlü> olarak adlandırılmıştır B 'Pin' olarak adlandırılmıştırBiyoçiplerin</td></tr> <tr><td>tek giriş kabloları için konektörler</td><td>Cellix</td><td>CONNECTORS-B1IC-PACK100</td><td></td></tr><tr><td>Multiflow8 connect</td><td>Cellix</td><td>MF8-CONNECT-BIC3-N-THROMBOSIS</td><td>Figure S1 B'de 'Yeniden kullanılabilir boru' ve 'Splitter' olarak</td></tr> <tr><td>adlandırılmıştır Nemlendirilmiş kutu</td><td>Cellix</td><td>HUMID-BOX</td><td></td></tr><tr><td>Yazılımı mikroakışkan pompa</td><td>Cellix</td><td>N/A</td><td>Venaflux Testi</td></tr><tr><td>Horm Kollajen</td><td>Takeda/Nycomed</td><td>1130630</td><td>Doğal at tendonu kollajeni (tip I) Kollajeni seyreltmek için izotonik glikoz çözeltisi takviye edilir</td></tr><tr><td>Ev hazırlığında HEPES tamponlu salin (HBS)</td> ev <td>hazırlığında</td><td></td><td>10 mM 4- (2-hidroksietil) -1-piperazineetansülfonik asit (HEPES) tamponlu salin (% 0.9 (a / h) NaCl, pH 7.4)</td></tr> <tr>Ev <td>hazırlığında</td> <td>bloke edici tampon</td><td>ev hazırlığında</td> HBS Calcein <td>'de %1.0 (a/h) sığır serum albümini ve% 0.1 (a / h) glikoz</td></tr><tr><td></td><td>Moleküler problar</td><td>C1430</td><td></td></tr><tr><td>Çamaşır suyu 10</td><td>% evde evde hazırlık</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.1 M NaOH</td><td>evde hazırlık</td> evde <td>hazırlık</td><td></td></tr><tr><td>Denatüre alkol</td><td>Fiers</td><td>T0011.5</td><td></td></tr><tr><td>Mirus Evo Nanopump</td><td>Cellix</td><td>188-MIRUS-PUMP-EVO</td><td>Multiflow8 ile. Figure S1 A'da 'Pompa' ve 'Manifold' olarak adlandırılan</td></tr> <tr><td>Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Axio Observer Z1</td>, <td>colibri-LED ve yüksek çözünürlüklü CCD kamera</td></tr><tr><td>Yazılım mikroskobu</td> ile donatılmıştır;<td>Zeiss</td><td>N/A</td><td>ZEN 2012</td></tr><tr><td>Hematoloji analizörü</td><td>Sysmex</td><td>N/A</td> Masa Üstü <td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>521-0095</td><td></td></tr><tr><td>Trombosit inkübatörü</td><td>Helmer</td><td>PF-48i</td><td></td></tr><tr><td>İnkübasyon su banyosu</td><td>GFL</td><td>1013</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Markası</td><td></td><td>A03429</td><td></td></tr><tr><td>Tüp Rulo</td><td>Ratek</td><td>BTR5-12V</td><td></td></tr><tr><td>Steril yerleştirme cihazı</td><td>Terumo BCT</td><td>TSCD</td><td></td></tr><tr><td>Boru Mühürleyen</td><td>Terumo BCT</td><td>AC-155</td><td></td></tr><tr><td>Vorteks</td><td>VWR</td><td>58816-121</td><td></td></tr></tbody></table>

mikroakışkan akış chambers hemostaz ve trombosit transfüzyon model sulandırılarak kan kullanma<em&gt; İn vitro</em

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Transfüzyon için hazırlanan kan trombositleri, depolama sırasında yavaş yavaş hemostatik fonksiyonlarını kaybeder. Trombosit fonksiyonu, çeşitli (dolaylı) in vitro deneyler kullanılarak araştırılabilir, ancak bunların hiçbiri mikroakışkan akış odaları kadar kapsamlı değildir. Bu protokolde, trombosit transfüzyonunu simüle etmek için trombositopenik taze kanın depolanmış kan bankası trombositleri ile sulandırılması kullanılır. Daha sonra, sulandırılmış numune, açıkta kalan subendotelyal matriks proteinleri üzerindeki hemostazı taklit eden mikroakışkan akış odalarına perfüze edilir. Kan bağışı, taşınması, bileşen ayrımı, depolama ve patojen inaktivasyonunun etkileri eşleştirilmiş deneysel tasarımlarda ölçülebilir. Bu, kan bileşeni hazırlamadaki her manipülasyonun hemostaz üzerindeki etkisinin güvenilir bir şekilde karşılaştırılmasını sağlar. Sonuçlarımız, sıcaklık döngüsünün, kayma hızlarının, trombosit konsantrasyonunun ve saklama süresinin trombosit fonksiyonu üzerindeki etkisini göstermektedir. Sonuç olarak, bu protokol kan bankası trombositlerinin işlevini analiz eder ve bu sonuçta flebotomi, taşıma, bileşen hazırlama, depolama ve transfüzyon dahil olmak üzere işleme zincirinin optimizasyonuna yardımcı olur.

Analiz içi varyasyon göstermek için, üç aynı yeniden tam kan numuneleri kollajen kaplı yüzeylerin (Şekil 1) üzerinde eşzamanlı olarak perfüze edildi. Bu% 8.7 bir farklılaşma katsayısı ile sonuçlanmıştır. Bu istatistik ile ilgili örnekler arasında kıyas izin kabul edilebilir içi tahlil ve laboratuvarda varyasyon göstermektedir. Burada tarif ticari akış odasının giriş ölçüm gözüne dik olan ve bu da o noktada lam...

Trombosit transfüzyonu ve hemostazı, kan bankacılığı trombositlerinin işlevini araştırmak için kan sulandırma ve mikroakışkan akış odaları kullanılarak modellendi. Veriler, trombosit depolama lezyonunun in vitro olarak hemostaz üzerindeki sonuçlarını göstermektedir.

Mikroakışkan Akış Chambers Hemostaz ve Trombosit Transfüzyon Model Sulandırılarak Kan kullanma<em&gt; İn Vitro</em

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of ...

Bu deneyin genel amacı, trombosit transfüzyonunu in vitro ortamda taklit etmek ve bunu hidrodinamik akış ve gerçek zamanlı mikroskopi kullanarak kolajen üzerindeki hemostaz aracılığıyla test etmektir. Trombositopenisi olan hastalar, saklanmış trombosit konsantreleri ile tedavi edilirler. Yöntemimiz, özellikle bu tür saklanmış trombosit konsantrelerinin kalitesine ve işlevine odaklanarak, tromboz ve hemostaz alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olmayı amaçlamaktadır.Bu tekniğin sunduğu ek değer, kan akışını taklit etmesi ve böylece katılan hücreler ve biyomoleküller üzerindeki reoloji etkilerini hesaba katmasıdır. Mevcut yöntem, trombositlerin kollajene bağlanmasını değerlendirmektedir. Bununla birlikte, yöntem aterosklerotik plak, endotelyal hücreler veya Von Willebrand faktörü ve fibrinojen gibi spesifik matriks proteinleri dahil olmak üzere diğer adezyonlu dokulara da uygulanabilir.Biyochipin hazırlanmasıyla başlayın. Bir kolajen stok çözeltisini, üreticinin izotonik glikoz çözeltisi ile 1:20 oranında seyrelterek vortexleyin ve 50 µg/mL nihai konsantrasyona getirin. Ardından, yeni bir tek kullanımlık biyochipin kanallarına 0,8 µL pipetleyin.Çipin bir ucundaki tüm kanalları doldurun ve burayı çıkış ucu olarak işaretleyin. Ardından, her bir kanalın 5/6'sının solüsyonla dolu olduğundan ve hava kabarcığı bulunmadığından emin olmak için çipi kontrol edin. Sonrasında, çipi nemlendirilmiş ve kapalı bir kap içerisinde dört saat boyunca veya gece boyunca 4 °C'de inkübe edin.Daha sonra, kanalların diğer ucuna bloklama tamponu pipetleyerek kodlanmış kanalları bloke edin. Ardından her bir kanal için 12 cm uzunluğunda boru parçaları kesin ve bu boruların biyochipe bağlanabilmesi için her birine bir pin takın. Boru parçalarını bir şırınga ve konnektör yardımıyla distile su ile durulayın.Ardından, bunları bloklama tamponu ile doyurun ve en az bir saat boyunca nemlendirilmiş bir kapta mühürleyin. Sonrasında, pompayı ve manifoldu hazırlayın. İlk olarak, hava kabarcıklarını gidermek için pompayı ve manifoldu distile su ile durulayın.Ardından, biyochipi otomatik mikroskop tablasına sabitleyin. Hortumların bir ucunu HBS ile doldurulmuş 1,5 mililitrelik bir tüpe yerleştirin, ardından diğer uçlarını biyochip girişlerine bağlayın. Manifold pinlerini biyochip çıkışlarına yerleştirin.Ardından, pompayı kullanarak sistemi HBS ile durulayın. Böylece geri kalan bloklama tamponu veya zayıf yapışmış kolajen uzaklaştırılacaktır. Bu işlemle akış odası hazırlıkları tamamlanmış olur.Sağlıklı gönüllülerden alınan güncel kan koleksiyonlarını konik bir santrifüj tüpünde birleştirerek başlayın. Örneklemi yaklaşık 15 dakika boyunca 250 G'de santrifüjleyin. Gevşek paketlenmiş alt fazı bozacağı için freni kullanmayın. Trombosit bakımından zengin plazmayı ve buffy coat tabakasını uzaklaştırıp atın.Yeniden yapılandırılmış kanı hazırlamak için, mümkün olduğunca az trombosit içeren paketlenmiş eritrositleri saklayın. Şimdi, dört mililitre AB tipi plazmayı 37 °C'de beş dakika 20 saniye boyunca çözdürmeye başlayın. Bu sırada, otomatik bir hematoloji analizörü kullanarak hazırlanan paketlenmiş eritrositlerin hematokrit değerini belirleyin.Ardından, tam kanın yeniden konstitüsyonu için kullanılacak, kan bankası tarafından hazırlanmış bir trombosit konsantresinin trombosit konsantrasyonunu belirleyin. %40 hematokrit ve mikrolitre başına 250.000 trombosit içeren bir mililitre yeniden konstitüe edilmiş kan için gerekli hacimleri hesaplayın. Şimdi, ucu kesilmiş bir pipet ucu kullanarak, gerekli miktarda eritrosit, plazma ve istenen konsantrasyona sahip trombosit konsantresini bir mililitrelik nihai hacme ulaşacak şekilde aktarın.Yeniden konfigüre edilen kanı nazikçe altüst ederek karıştırın ve tam kan sayımı gerçekleştirin. Ardından, Calcein AM içeren hazırlanmış bir mikrosantrifüj tüpü alın ve içine bir mililitre yeniden konfigüre edilmiş kan ekleyin. Kanı, boya ile nazikçe altüst ederek karıştırın.Ardından, yeniden oluşturulmuş kanı 37 °C'de beş dakika boyunca inkübe edin. Yazılımda, perfüzyon kanalındaki ilgi alanını seçin. 100x büyütmede, kanalların tabanına yapışmış kolajen liflere odaklanın.İdeal olarak, faz kontrastı veya diferansiyel girişim kontrastı kullanın. Seçilen Z konumlarını dijital olarak sabitlemek için "set current Z for selected tile regions" (seçili karo bölgeleri için mevcut Z'yi ayarla) seçeneğini seçin. Perfüzyon öncesindeki optik odaklama ameloblast kolajeni üzerinde olmalıdır, ancak bu işlem zorlayıcı olabilir.Alternatif bir yöntem, mikroskop odağını başlangıçta yapışan trombositlere ayarlamaktır. Şimdi, örnekleri nazikçe karıştırın ve biyochip'in yanına yerleştirin. Ardından, gözlemlenen kanala bağlı olan tüpü yeniden konfigüre edilmiş kana yerleştirin.Ardından, pompayı kontrol eden yazılımı kullanarak, kan örneğini kanala taşımak için santimetrekare başına 50 dyne basınç uygulayın ve deneye başlayın. Deney sırasında, beş dakika boyunca her 15 saniyede bir görüntü kaydedin. Görüntü analiz yazılımını kullanarak trombüs büyüme kinetiğini belirleyin.Bu vakada Zen 2012 kullanılmaktadır. Trombositlerin yüzey kapsamını belirlemek için görüntü analizi eklentisini açarak başlayın. Yapışan trombositlerden kaynaklanacak pozitif sinyalle ilişkili piksel yoğunluğunu tanımlamak için "analyze interactive" sekmesindeki floresan eşiğini ayarlayın.Ardından, her bir zaman noktası için pozitif sinyallerin yüzey alanlarının bir listesini içeren bir hesap çizelgesini otomatik olarak oluşturmak için tablo oluşturma özelliğini kullanın. Bu hesap çizelgelerini XML formatında kaydedin ve daha ileri hesaplamalar için bir hesap çizelgesi programında açın. Her zaman noktasında, seçili nesnelerin toplam yüzey alanlarını hesaplayın ve bu değeri kaplanan yüzdenin yüzdesi olarak ifade edin.Ardından, verileri perfüzyon süresinin bir fonksiyonu olarak grafiğe dökün ve doğrusal regresyonla eğimi hesaplayın. Bu, söz konusu özel deneysel koşulun trombüs büyüme kinetiğini modeller. Üç adet özdeş yeniden konstitüe edilmiş tam kan örneği, kolajen kaplı yüzeyler üzerinden eş zamanlı olarak perfüze edilmiştir.Bu durum, test karşılaştırması için kabul edilebilir assay içi ve laboratuvar içi varyasyonu gösteren %8,7'lik bir varyasyon katsayısı ile sonuçlanmıştır. Transfüzyon, kanın eksik olan bileşenle yeniden yapılandırılmasıyla simüle edilmiştir. Azalan trombosit konsantrasyonları ile birkaç yeniden yapılandırma işlemi gerçekleştirilmiştir.Beklendiği üzere, düşük trombosit sayıları, perfüzyon süresinin bir fonksiyonu olarak daha az adezyonla sonuçlanmıştır. Ardından, kan toplama sonrası ve perfüzyon sırasındaki düşük sıcaklıkların etkisi incelenmiştir. Kan oda sıcaklığına soğutulduğunda, trombüslerin daha yavaş oluştuğu görülmüştür.Çalışma boyunca 37 °C'de tutulan bir örnekle karşılaştırıldığında. Dolaşım halindeyken trombositler, yüksek duvar kayma gerilimi koşullarında damar yaralanma bölgelerine bağlanırlar. Beklendiği üzere, mikroakışkan akış odalarındaki kayma hızının değiştirilmesi toplam trombosit adezyonunu değiştirmiştir.Bu koşullar ayrıca trombüs büyüme kinetiğini de değiştirir. Bu videoyu izledikten sonra, saklanan trombosit konsantrelerinin kalitesini ve işlevini test etmek için rekonstitüe kan kullanılarak mikroakışkan akış odası deneylerinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmanız gerekir. Bu teknik yaklaşık yedi saat içinde tamamlanabilir.Mikroakışkan akış odası deneyleri, trombosit transfüzyonu alanındaki araştırmacıların bağış, hazırlama ve saklama değişkenlerinin etkilerini keşfetmelerine olanak sağlamıştır. Buna uygun bir örnek patojen inaktivasyonudur. Sadece bir deneysel konuya örnek verdik.Buna karşın, kalsiyum konsantrasyonundaki varyasyonlar, kayma gerilmesi ve yüzey kaplamaları farklı araştırma sorularını yanıtlamak için kullanılabilir. Bu prosedüre benzer şekilde, ek soruları yanıtlamak için mikroakışkan akış odalarında diğer ölçümler de gerçekleştirilebilir. Örneğin, saklanmış trombositlerin akış sırasındaki koagülasyon performansı incelenebilir.

microfluidic-flow-chambers-using-reconstituted-blood-to-model

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Steril bir sürekli akış devresi, laminer akış kayma gerilmesi tabi yapışık hücrelere için bir yöntem tarif. Hücrelerin yapışma, morfoloji, şeffaf oda ile devre metaboliti analizi ve gelecek deneyler ya da kültür için kayma maruz kaldıktan sonra hasat hücreleri için alınan numuneler incelenmiştir olabilir.

Laminer Akış Kesme Stres altında endotel progenitör hücrelerin değerlendirin Paralel plakalı Akış Odası ve Sürekli Akış Devre

Mikrovasküler ölçekli kanallar (&lt;30 um) ile bir mikroakışkan cihazın bütün iç yüzeyi boyunca kültürün 3B, endotel hücre mono tabakasında için bir yöntem tarif edilmiştir.

Hematolojik Hastalıklarında Mikrovasküler Etkileşimleri Öğrenmenin Endothelialized Mikroakiskan

Bu protokol, hastalık patolojilerinde hücre yanıtını belirlenmesinde yardımcı olmak için, in vitro olarak fizyolojik veya patolojik kan akışını çoğaltır. Kan pompası alt bölmeyi sönümleme bir basınç katılmasıyla, damar boyunca kan akımı değinmeyecek edilebilir ve vasküler endotelyum, ya da taklit eden ko-kültür, bir tek tabaka üzerine koydu.

Vasküler Hücre Remodeling Soruşturma Fizyolojik in vitro Modeli ve Uygulaması ile Patolojik Kan Akış

Bu makale aynı zamanda trombosit fonksiyonu ve pıhtılaşmayı ölçen hemostaz deneysel model tanımlamaktadır. Trombosit ve fibrin floresans gerçek zamanlı olarak ölçülür ve platelet yapışma oranı, bir pıhtılaşma hızının, pıhtılaşma başlangıcı belirlenir. Model transfüzyonu için konsantreleri akışı altında trombosit prokoagülan özelliklerini belirlemek için kullanılır.

Trombosit Transfüzyon ve Hemostaz için bir mikroakışkan Akış Odası Modeli Gerçek zamanlı Trombosit Birikimi ve Fibrin oluşumu Tedbirleri

Hasta kaynaklı endotel ile tam kan etkileşimini araştırmak için in vitro vasküler hastalık modeli salıyoruz. Bu sistem çeşitli koşullar altında primer endotel hücrelerinin trombojenik özelliklerinin incelenmesini sağlar. Bu yöntem özellikle pıhtılaşmanın farklı aşamalarında situ trombojenite ve antikoagülasyon tedavisinin değerlendirilmesi için uygundur.

In Vitro Mikroakışkan Hastalık Modeli Gerçek Zamanlı Olarak Tam Kan-Endotel Etkileşimleri ve Kan Pıhtısı Dinamikleri Çalışma

Burada sunulan bir standart in vitro hemodinamik döngü modeli için bir protokoldür. Bu model perfüzyon tüpleri veya vasküler stentlerin hemouyumluluğunun ISO (International Organization for Standardization) standardı 10993-4'e uygun olarak test edilmesine olanak sağlar.

Vasküler Tıbbi Cihazların Hemositokomisyonla uyumluluğunu ve Konak Hücre Aktivasyonunu Araştırmak için Bir In Vitro Hemodinamik Döngü Modeli

Akış altındaki trombosit fonksiyonu değerlendirilebilir ve simüle edilmiş hemostatik resüsitasyon, travma ve transfüzyon tıbbında uygulamaları olan bir mikroakışkan cihaz kullanılarak modellenebilir.

Trombosit Fonksiyonunun Değerlendirilmesinde Mikroakışkanlar

Biz heterojen tümör mikroçevrelerde yeniden bir mikroakışkan cihazın imalat ve operasyon için prosedür...

Bir Tümör Mikroçevre yeniden oluşturmak için mikroakışkan Cihazı<em&gt; In vitro</em

Dielectrophoresis (DEP) hücreleri manipüle etmek için etkili bir yöntemdir. Baskılı devre kartları (PCB) mikroakışkan cihazlar içinde ücretsiz cep manipülasyon için yeniden kullanılabilir, ucuz ve etkili elektrotlar sağlayabilir. PCB üzerinde lamelleri ile PDMS tabanlı mikroakışkan kanalların bir araya getirerek, çok kanallı mikroakışkan cihazlar içinde boncuk ve hücre manipülasyon ve ayrılık göstermektedir.

Çok kanallı mikroakışkan Cihazlar ayırmak Boncuk ve Hücreler Dielectrophoresis ve Laminar Flow

Bu çalışma, önemli fizyolojik olarak ilgili kesme akımı altında, hücre haddeleme çalışmalar artırıp, çok oyuklu bir plaka mikroakışkan sistemi kullanılır. Silsilesini ve hastalarda hücre ekzojen popülasyonlarının sistemik olarak uygulanmasını takiben hücre hedeflemesi önemini homing çok adımlı, hücre haddeleme önemi göz önüne alındığında, bu sistem, hücre bazlı tedaviyi geliştirmek için bir tarama platform olarak potansiyel sunmaktadır.

Sistematik Analizi In Vitro Hücre Rolling

Öğrenin mikroakışkan akış odaları kullanarak trombosit transfüzyonunu in vitro taklit etme ve hemostaz fonksiyonunu değerlendirme yöntemini. Bu teknik, depolanmış trombosit konsantrelerinin kalitesini ve işlevselliğini analiz eder.

Mikroakışkan Akış Chambers Hemostaz ve Trombosit Transfüzyon Model Sulandırılarak Kan kullanma

Daha fazla video keşfet