Name: Laminer Akış Kesme Stres altında endotel progenitör hücrelerin değerlendirin Paralel plakalı Akış Odası ve Sürekli Akış Devre (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 43 s
Description: Öğrenin endotel progenitör hücrelerini laminer akış kesme stresi altında değerlendirmek için paralel plakalı akış odası ve sürekli akış devresi kullanımını. Bu yöntem hücre yapışması ve morfolojisini in vivo koşullarda çalışmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, işleme ve akış odaları aracılığıyla görüntü hücrelere teknikleri konusunda yardımcı olmak için Leica Microsystems akışını odası parçaları ve Matt Maudsley montaj onun yorulmak bilmeyen çabaları için Biyomedikal Alet ve Makine Dükkanı Joe Owen teşekkür etmek istiyorum. Biz Duke Perfüzyon Hizmetler Kevin Collins ve akış devre tasarımı yararlı önerileri için Biyomedikal Mühendisliği Bölümü Dr. Steve Wallace borçluyuz. Ayrıca, RC1HL099863-01 &quot;Otolog EPC astar dolaşım, biyouyumluluk yardımcı cihazlar geliştirmek için&quot; Hibe yoluyla verdikleri destek için Alexandra Jantzen ve NIH Ulusal Bilim Vakfı Lisansüstü Araştırma Burs Programı teşekkür etmek istiyorum.

<ol><li>Bhat, V. D., Truskey, G. A., Reichert, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibronectin+and+avidin-biotin+as+a+heterogeneous+ligand+system+for+enhanced+endothelial+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res%22%5BJournal%5D)">Fibronectin and avidin-biotin as a heterogeneous ligand system for enhanced endothelial cell adhesion.</a> J. Biomed. Mater. Res. 41, 377-385 (1998).</li>
<li>Broxmeyer, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cord+blood+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Cord blood stem and progenitor cells.</a> Methods Enzymol. 419, 439-473 (2006).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAchneck%2C+HE+%22American+Heart+Association+Scientific+Sessions%2C+Abstract+Oral+Sessions%2C+Medical+Aspects+End+Stage+Heart+Failure%3A+Transplantation+and+Device+Therapies%22">American Heart Association Scientific Sessions, Abstract Oral Sessions, Medical Aspects End Stage Heart Failure: Transplantation and Device Therapies</a>. , (2010).</li>
<li>Brown, M. A., Wallace, C. S., Angelos, M., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+umbilical+cord+blood-derived+late+outgrowth+endothelial+progenitor+cells+exposed+to+laminar+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue.+Eng.+Part.+A%22%5BJournal%5D)">Characterization of umbilical cord blood-derived late outgrowth endothelial progenitor cells exposed to laminar shear stress.</a> Tissue. Eng. Part. A. 15, 3575-3587 (2009).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+titanium+ventricular+assist+device+surfaces+after+gold%2Fpalladium+coating+for+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">Regenerating titanium ventricular assist device surfaces after gold/palladium coating for scanning electron microscopy.</a> Microsc. Res. Tech. 73, 71-76 (2010).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biocompatibility+of+titanium+cardiovascular+devices+seeded+with+autologous+blood-derived+endothelial+progenitor+cells%3A+EPC-seeded+antithrombotic+Ti+Implants%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The biocompatibility of titanium cardiovascular devices seeded with autologous blood-derived endothelial progenitor cells: EPC-seeded antithrombotic Ti Implants.</a> Biomaterials. 32, 10-18 (2011).</li>
<li>Rinker, K. D., Prabhakar, V., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+contact+time+and+force+on+monocyte+adhesion+to+vascular+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Effect of contact time and force on monocyte adhesion to vascular endothelium.</a> Biophys. J. 80, 1722-1732 (2001).</li>
<li>Truskey, G. A., Yuan, F., Katz, D. F. Ch. 2. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTruskey%2C+GA+%22Transport+Phenomena+in+Biological+Systems%22">Transport Phenomena in Biological Systems</a>. Horton, M. J. , Pearson Education. (2004).</li>
<li>Truskey, G. A., Yuan, F., Katz, D. F. Ch. 2. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTruskey%2C+GA+%22Transport+Phenomena+in+Biological+Systems%22">Transport Phenomena in Biological Systems</a>. Horton, M. J. , Pearson Education. (2009).</li>
<li>Allen, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+nitrite+response+and+arterial+reactivity+differentiate+vascular+health+and+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Plasma nitrite response and arterial reactivity differentiate vascular health and performance.</a> Nitric Oxide. 20, 231-237 (2009).</li>
<li>Xiao, Y., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+receptor-ligand+affinity+on+the+strength+of+endothelial+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Effect of receptor-ligand affinity on the strength of endothelial cell adhesion.</a> Biophys. J. 71, 2869-2884 (1996).</li>
<li>Conant, C. G., Schwartz, M. A., Nevill, T., Ionescu-Zanetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+Adhesion+and+Aggregation+Under+Flow+using+Microfluidic+Flow+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells.</a> J. Vis. Exp. (32), e1644-e1644 (2009).</li>
<li>Conant, C. G., Schwartz, M. A., Ionescu-Zanetti, C. W. ell <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((plate-coupled+microfluidic+devices+designed+for+facile+image-based+cell+adhesion+and+transmigration+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol.+Screen%22%5BJournal%5D)">plate-coupled microfluidic devices designed for facile image-based cell adhesion and transmigration assays.</a> J. Biomol. Screen. 15, 102-106 (2010).</li>
<li>Conant, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+well-plate+microfluidic+devices+to+conduct+shear-based+thrombosis+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lab.+Autom%22%5BJournal%5D)">Using well-plate microfluidic devices to conduct shear-based thrombosis assays.</a> J. Lab. Autom. 16, 148-152 (2011).</li>
<li>Metaxa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide-dependent+stimulation+of+endothelial+cell+proliferation+by+sustained+high+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide-dependent stimulation of endothelial cell proliferation by sustained high flow.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 295, H736-H742 (2008).</li>
<li>Radel, C., Carlile-Klusacek, M., Rizzo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Participation+of+caveolae+in+beta1+integrin-mediated+mechanotransduction%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Participation of caveolae in beta1 integrin-mediated mechanotransduction.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 358, 626-631 (2007).</li>
<li>Wang, X. L., Fu, A., Spiro, C., Lee, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+Analysis+of+Vascular+Endothelial+Cells-Effects+of+Laminar+Shear+Stress+and+High+Glucose%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteomics.+Bioinform%22%5BJournal%5D)">Proteomic Analysis of Vascular Endothelial Cells-Effects of Laminar Shear Stress and High Glucose.</a> J. Proteomics. Bioinform. 2, 445-445 (2009).</li>
<li>Elfervig, M. K., Minchew, J. T., Francke, E., Tsuzaki, M., Banes, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1beta+sensitizes+intervertebral+disc+annulus+cells+to+fluid-induced+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biochem%22%5BJournal%5D)">IL-1beta sensitizes intervertebral disc annulus cells to fluid-induced shear stress.</a> J. Cell. Biochem. 82, 290-298 (2001).</li>
<li>Archambault, J. M., Elfervig-Wall, M. K., Tsuzaki, M., Herzog, W., Banes, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+tendon+cells+produce+MMP-3+in+response+to+fluid+flow+without+significant+calcium+transients%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomech%22%5BJournal%5D)">Rabbit tendon cells produce MMP-3 in response to fluid flow without significant calcium transients.</a> J. Biomech. 35, 303-309 (2002).</li>
<li>Patton, J. T., Menter, D. G., Benson, D. M., Nicolson, G. L., McIntire, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computerized+analysis+of+tumor+cells+flowing+in+a+parallel+plate+chamber+to+determine+their+adhesion+stabilization+lag+time%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Motil.+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Computerized analysis of tumor cells flowing in a parallel plate chamber to determine their adhesion stabilization lag time.</a> Cell. Motil. Cytoskeleton. 26, 88-98 (1993).</li>
<li>Wiese, G., Barthel, S. R., Dimitroff, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Physiologic+E-Selectin-Mediated+Leukocyte+Rolling+on+Microvascular+Endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium.</a> J. Vis. Exp. (24), e1009-e1009 (2009).</li>
<li>Kaper, H. J., Busscher, H. J., Norde, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+poly%28ethylene+oxide%29+brushes+on+glass+surfaces+and+adhesion+of+Staphylococcus+epidermidis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Characterization of poly(ethylene oxide) brushes on glass surfaces and adhesion of Staphylococcus epidermidis.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 14, 313-324 (2003).</li>
<li>Bakker, D. P., Plaats, A. vander, Verkerke, G. J., Busscher, H. J., van der Mei, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+velocity+profiles+for+different+flow+chamber+designs+used+in+studies+of+microbial+adhesion+to+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of velocity profiles for different flow chamber designs used in studies of microbial adhesion to surfaces.</a> Appl. Environ. Microbiol. 69, 6280-6287 (2003).</li>
<li>Angelos, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+adhesion+of+umbilical+cord+blood+endothelial+progenitor+cells+under+laminar+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Dynamic adhesion of umbilical cord blood endothelial progenitor cells under laminar shear stress.</a> Biophys. J. 99, 3545-3554 (2010).</li>
<li>Baker, G. R., Sullam, P. M., Levin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+fluorescent+method+to+internally+label+platelets+suitable+for+physiological+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hematol%22%5BJournal%5D)">A simple, fluorescent method to internally label platelets suitable for physiological measurements.</a> Am. J. Hematol. 56, 17-25 (1997).</li>
</ol>

Üretim ve bu video makale Ücretsiz Erişim Cole-Parmer Instrument Co tarafından desteklenen

Akım devresi ve akış odası tanımlanan sıvı kayma gerilmeleri yapışık hücreleri, örneğin EPC, bize konu ile izin verir. Odanın alt ve üst şeffaf, hücre yapışması ve morfolojisi, odanın kendisi aracılığıyla ya da gerçek zamanlı olarak değerlendirilir ya da demontaj akış odasının bir akış deney ve sonra olabilir. Bu noktada, hücreler steril koşullar altında hasat edilebilir ve yeniden kaplama ya, ya da daha fazla analiz için DNA veya RNA, vb. Toplamak için kullanılıyor. Laminar akım elde etmek için, odasının tasarımı, çeşitli koşulların yerine getirildiğinden emin olmalıdır. İlk olarak, akış, laminer, atalet kuvvetlerini viskoz kuvvetlere oranı Reynolds sayısı (Re), hesaplanmak suretiyle kontrol edilebilir olmalıdır. (Viskoz kuvvetler baskın olursa, Yeniden küçük ve akış laminer ya da 'tam gelişmiş' - genellikle Re &lt;2300 için.Biz, atalet kuvvetlerini egemen çalkantılı kadar, akış daha fazla rastgele olur, Re&gt; 4000 için geçerlidir.) Denklemi 3 8 göre Ynt hesaplamak <img alt="Denklem 3" src="/files/ftp_upload/3349/3349eq3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Denklem 3"> Ρ akışkan yoğunluğu, Q debisi, μ viskozite, w ve h sırasıyla odanın genişliği ve yüksekliği, ve D h denklemi 4 8 göre tanımlanan hidrolik çapı <img alt="Denklem 4" src="/files/ftp_upload/3349/3349eq4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Denklem 4"> Reynolds sayısı 166 arasında değişen yükseklikleri ile üç akış odaları, - 267 mm aralığı 13,9 - 34,6 c akış hızlarında15 dynes / cm 2 kayma gerilmesi elde etmek alculated. 234 - 100 dynes / cm 2 bir kayma gerilmesi için hesaplanan akış hızlarında, odaları Reynolds sayısı 90.4 arasında değişmektedir. Bütün bu Reynolds sayıları 2300 den çok daha düşük olduğu ve laminer akış için kriterleri karşılamadığı. İkincisi, hız alanı ve kayma gerilmesi için, (yani tam gelişmiş), akış kanalı girişinde uzunluğu, L e daha uzun olmalıdır slayt akışkan giriş uzaklık boyunca mesafe bağımsız olması . Bu denklem 5 9 göre, girişinde uzunluğu hesaplanırken memnun olabilirler. <img alt="Denklem 5" src="/files/ftp_upload/3349/3349eq5.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Denklem 5"> Yukarıda sıralanan değerleri için, giriş uzunluğu 0.01 'den 0.25 cm arasında değişmektedir. Üçüncü olarak, lateral yönde hız ve kayma gerilmesi farklılık olmadığını sağlamak amacıylatek boyutlu kanal akışı için önemli değeri (Δ Ph / 2L), h / w oranı 1 den daha az olmalıdır. H / w, tek boyutlu akış altında duvar kayma gerilmesi% 95 için iki boyutlu akış koşulları altında ortalama duvar kayma gerilmesi için, 0,10 eşit olması gerekir, ve iki boyutlu akış koşulları altında duvar kayma gerilmesi için % 97,5 'tek boyutlu akış altında duvar kayma gerilmesi, h / w 0.05 eşit olması gerekir. Tasarlanmış akış haznesi 1,7 cm genişliğinde ve 166 boyutları ile yüksekliği 267 mm, bu kriterleri yerine. Girişinde herhangi bir yanal basınç farkları varsa, basınç, akış yönü değişecektir. Bu akış yolu boyalar veya parçacıklar kullanılarak değerlendirilebilir. Ayrıca, sürekli akış deneyleri için, bir darbe dampener akım devresi eklenir. Darbe dampener darbe alıratility devrede roller pompa ile neden ve bize sürekli akış yaklaşık varsayımı sağlar. Notu, etkin roller pompa belirli frekanslar için çıkış akım titreşimlerle ortadan kaldırmak, böylece kullanılan darbe tav devresinde kullanılan pompa ve boru ile uyumlu olmalıdır. I / P 26 tüp herhangi bir Masterflex L / S serisi pompası (600 RPM'ler 0) ile deşarj hattı üzerinde kullanılan gösteriye Masterflex L / S darbe dampener laminar akım elde. Pulsatil akış için, programlanabilir bir pompa çeşitli dalga şekilleri oluşturmak için kullanılabilir. Pulsatil akış için, programlanabilir bir pompa çeşitli dalga şekilleri oluşturmak için kullanılabilir. Ayrıca, devre perfüzat gibi bu örnekleri tasarlanmıştır kolayca hücreleri veya akış ortamı bulaşma riski olmadan farklı zaman noktalarında toplanabilir. Bizim örneğimizde, NO 2 konsantrasyonu ile chemiluminescence ile ölçüldüiyonlar / Sievers Nitrik Oksit Analyzer (NOA 280, Sievers Aletleri, Boulder, CO), daha önce açıklanan 10. Nitrit analizi için kullanılan indirgeyici NO nitrit dönüştürmek için azaltma potansiyeline sahiptir, ancak herhangi bir yüksek nitrat gibi azot oksitler azaltmak için yeterli asetik asit (14.5 M asetik asit ve 0.05 M KI) potasyum iyodür ve böylece nispeten nitrit için özel. Örnekleri 6 alırken kayıp hacmi için düzeltme sırasında üretilen toplam miktarın nitrit konsantrasyon ve devrenin toplam hacmi üretilen ürün olarak hesaplandı. Aşağıdaki adımları akış deneylerin başarılı bir şekilde yürütülmesi için kritik öneme sahiptir: <ol class="lroman"><li> Kabarcıkları, yüzey hücreleri yırtma potansiyele sahip çünkü akış set-up sırasında kabarcık oluşumunu önlemek için arzu edilen bir durumdur. Bu akış odasının üst kısmında en iyi alt kısmı, üstüne yerleştirirken dikkatli alarak önlenebilirher ikisi de birbirine paralel tutulması ve yeniden düzenlemeler olmadan bir hareket üzerine en alt düşürücü tarafından gerçekleştirilir. Bunu yaparken, akış kanalı mevcut ve / veya kayan küçük hava kabarcıkları, alüminyum gövdesi iki ucundaki balonu tuzaklar içine yönlendirilir olacak. </li><li> Rezervuar rezervuar alt çıkış hortumu aşağı ulaştığı sağlamak için önemlidir. Aksi takdirde, hava perfüzat seviyesi hortumun ucuna hafifçe altına düşerse rezervuar odasına açar tüp içine çekilir. </li><li> Araştırmacı, yanlışlıkla devre ve odasına emilir hava akış başlaması, pompa üzerine ters yönde çalışmaz böylece pompa akış yönü ile bilgi sahibi olması gerekir. </li><li> (Denatüre serum içerdiği proteinler nedeniyle) köpük oluşumunu önlemek için, biz perfusa üzerinde yaklaşık bir inç odasından rezervuar yol açan boru düşürücü tavsiye ederizrezervuar içinde te seviyesi. Ancak, akış orta seviyesinin üzerinde tutarak deney sırasında rezervuar içine akışını kontrol etmek için izin verir. </li><li> Odası parçaları bir araya vidalama, elektrikli tornavida çalışırken diğer elinizle sıkıca bir yandan konut kavramak önemlidir. Hareket elektrikli tornavida, vida sıkılır sonra 'etrafında odasına fırlatmak' potansiyeline sahiptir tork çevrilen unutmayın. </li><li> Devre şekillendirme ve kendi yüzeyinden hücrelerin kaldırma herhangi bir basınç dalgaları önlemek için, tüm stopcocks akışı başlamadan önce açık olduğundan emin olun. </li><li> Özellikle, uzun vadeli akış çalışmalar için (&gt; 48 saat) hortumun kırılmasını önlemek için pompa kafası eklenecek daha sert ve daha esnek bir boru kullanmanızı öneririz. </li><li> Tüp kötü ayarlanmış pompa kafası dişleri nedeniyle pompa kafası içinde 'göç' mümkündür. Bu nedenle, nasıl küvet yakından ilgilenerek öneririzing pompa kafası güvenli ve boru, boru 'çekti' veya deney sırasında yerinden ise kolayca fark edebilirsiniz böyle bir işaretleme kalemi ile her iki ucunda işaretleme. </li><li> Hatalı bir bağlantı nedeniyle bir deney sırasında perfüzat kaçağı önlemek için her zaman dikkatli bir şekilde perfüzyon başlamadan önce, devre ve odasının her tek bağlayıcı kontrol edin. Bu darbe dampeners giriş ve çıkış konnektörleri için özellikle önemlidir! </li><li> Floresan etiketleri kullanmayın ışık maruz kalma sınırı unutmayın. </li></ol> Akış odasının olası bir sınırlama alüminyum içine işlenmiş kanal yükseklik yükseklik sabit olmasıdır. Ancak, bu her bir deney için önce kanal yüksekliği doğrulamak ve ayarlamak için bir avantaja sahiptir ve bu nedenle pompa akış istenen değere ayarlayarak sadece kayma gerilmesi hesaplamaları kolaylaştırır. Araştırma hedeflerine bağlı olarak istenebilirartan pompa hızını olmadan kayma gerilmesi artar. Bu durumda biz perfüzat viskozite arttırıcı öneririz, örneğin orta 11 dekstran ekleyerek. Akım devresi, çok küçük konsantrasyonlarda hücre metabolitleri ölçmek için çalışırken sorunlu olabilir kullanılan orta büyük hacimli, olası bir sınırlama. Burada gösterilen olmasa da, büyük ölçüde, küçük bir rezervuar ve nabız tav kullanarak devre hacmi azaltmak ve boru uzunluğu ve çapı azaltmak mümkündür. Ayrıca, kültür hücrelere sıvı kayma gerilmesi uygulamak için kullanılabilecek birkaç piyasada mevcut diğer sistemler vardır. Mikroakışkan tabanlı sistemler, hücre eş zamanlı analizler 12,13,14 bu kanallar için giriş ve çıkış rezervuarlar gibi davranan iyi tabak içine çözüm yüklü farklı mikroakışkan akış kanalları etkinleştirmek Fluxion BioFlux sistemi örneğin. Bununla birlikte, bu ve diğer mikroakışkan sistemlerinin standart mikroskop lamı ile uyumlu değildir ve RT-PCR ve Western Blot gibi başka deneyler, hücrelerin yeterli sayıda kurtarma için izin vermez. Ayrıca, daha az kullanıcı dostu 40.000 $ minimum maliyet ve aksesuar ekipmanları bağlı olarak, toplam 100.000 $ 'dan fazla ulaşabilirsiniz. Tıkla FlexCell International Corporation, Tıkla FlexCell Çıtası ve FlexFlow sistemleri İki macrofluidic sistemleri, başarıyla, endotel hücreleri 15,16,17, sıvı akışını koşullar altında insan annulus hücreleri 18 ve fibroblastlarının 19 çalışma kullanılmaktadır . GlycoTech yoluyla üçüncü bir sistem, tümör hücre adezyon 20 ve endotel mono tabakaları lökosit adezyonu 21 çalışma kullanılmıştır. Çıtası sistemi birkaç slayt tek seferde aynı kayma stres koşulları altında çalışmasına olanak sağlar, fakat bizim farklı bir görüntüleme penceresi ve yoksuntasarım - akış altında hücrelerin gerçek zamanlı görselleştirme için izin vermiyor. FlexFlow sistem bir görüntüleme penceresi var, ama dik bir mikroskop, çoğu laboratuvarlarda kullanılan standart bir mikroskop olmayabilir gerektirir. Ayrıca, FlexFlow sistemi akış odasına yerleştirildiği zaman ters bir hücre kaplı bir kapak kayma gerektirir. Bu bizim çalışma göstermektedir titanyum kaplı cam gibi, donuk bir yüzey üzerinde floresan hücreleri, görselleştirme engellemektedir. Son olarak, özel kapak fişleri Tıkla FlexCell Çıtası sistemine benzer çok bin dolar fiyat aralığında FlexFlow sistemi, özellikle satın alınması gerekir. GlycoTech önemli ölçüde daha az pahalı, ama rahatlıkla Odamızın gibi otoklava kök olamaz akrilik döküm imal dairesel ve dikdörtgen plaka paralel akış odaları sunmaktadır. Not tarif edilmiştir diğer akış odaları otoklav içinmikroskobik özel lensler 22,23 gerektirdiğinden pratik görünür. GlycoTech sistemi tekrar kullanımı ile kalınlık değiştirmek ve bu nedenle zaman (üretici her on kullanımdan sonra yenilerini satın önerir) üzerinde oda yüksekliğini değiştirmek alt ve üst plakalar arasında yer silikon kauçuk contalar, kullanır. Dahili O-ring ile alüminyum odası, alt ve üst plakalar tam muhalefet sağlar ve deneyler arasında sürekli odası yüksekliği sağlar. Son olarak, vakum pompaları, tasarım gerekli değildir GlycoTech odaları da dahil olmak üzere birçok akış oda tasarımları sızdırmaz mühür, başarmak için gerekli. Oysa burada gösterilmemiştir, akış odası, hücre yapışması ve / veya davranış gerçek zamanlı görüntüleme için tüm akış deney sırasında mikroskop altında tutulmalıdır. Bu istenirse, biz 37 perfüzat ısısını korumak için odanın altında ısı lambaları veya ısıtılmış bir yastık kullanmanızı öneririz ° C Kürkhücreleri veya metabolitleri veya araştırılan ilaçlar veya ajanlar, ya hiç 'devridaim' 24 isteniyorsa, orada roller pompa, bir şırınga pompası ile değiştirilir olabilir. Konfluent EPC bir katman üzerinde yapışık hücreler, örneğin flüoresan trombositler (trombosit tahlil kullanarak Achneck ve arkadaşları tarafından açıklanan 6,25) üzerinde sıvı kayma stres altında hücre-hücre etkileşimi değerlendirmek için farklı etiketli hücreleri akışı da mümkündür. Bizim akış odası gibi, bir perfüzat örnekleme liman ve bir görüntüleme penceresi gibi diğer akış odaları, değerli özelliklerini birleştiriyor ve ya ters ya da dik bir mikroskop ile uyumluluk önemli bir avantaja sahiptir. Otoklavlanabilir ve sızdırmaz bir sızdırmazlık elde etmek için sabit odası yüksekliği ve vakum pompaları gerek kalmadan tekrarlanan deneyler için izin verir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Ürünler / Reaktifler </td><td> Şirket </td><td> Ürün # </td></tr><tr><td> 10 ml Şırınga </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 07940-12 </td></tr><tr><td> 1-Way Stopcoks </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 30600-00 </td></tr><tr><td> 30 ml Şırınga </td><td> BD Tıp </td><td> 309650 </td></tr><tr><td> 4-Way Stopcocks </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 30600-04 </td></tr><tr><td> Alüminyum Alaşımlı </td><td> N / A </td><td> 6061 </td></tr><tr><td> Hücre Kültür Yemekleri (4-iyi, dikdörtgen) </td><td> Thermo Scientific; Nunc </td><td> 267061 </td></tr><tr><td> Hücre Tracker Orange </td><td> Invitrogen </td><td> C34551 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Araştırma Organics </td><td> 2162D </td></tr><tr><td> DPBS (-/-)</td><td> Invitrogen </td><td> 14190-144 </td></tr><tr><td> EGM-2 Singlequots </td><td> Lonza </td><td> CC-4176 </td></tr><tr><td> Kadın Luer Adaptör </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> SI-45500-04 </td></tr><tr><td> Fibronektin </td><td> Sigma </td><td> F0895-2MG </td></tr><tr><td> Kapaklı Cam Şişe (250ml) </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 34594-24 </td></tr><tr><td> Sabit Boru </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 06508-16 </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Sigma </td><td> H8264-500ML </td></tr><tr><td> Histopaque </td><td> Sigma </td><td> H8889-500ML </td></tr><tr><td> Hoechst Leke solüsyonu </td><td> Sigma </td><td> H6024 </td></tr><tr><td> Hyclone FBS </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30071.01 </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Lonza </td><td> 17-605E </td></tr><tr><td> Erkek Luer Adaptör </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> EW-45.505-04 </td></tr><tr><td> MCDB-131, 1X Orta </td><td> Cellgro </td><td> 15-100-CV </td></tr><tr><td> Dikenli Polipropilen Rekorları </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 06365-90 </td></tr><tr><td> O-Ringler </td><td> N / A </td><td> AS568A </td></tr><tr><td> Darbe-Tav </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 07596-20 </td></tr><tr><td> Pompa-Drive (Masterflex L / S değişken hızlı ekonomisi sürücü) </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 7524-40 </td></tr><tr><td> Pompa-Head (Masterflex Kolay Yükleme Pompa Kafası) </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 07518-60 </td></tr><tr><td> Slayt </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 48500-00 </td></tr><tr><td> Yumuşak Boru </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 96400-16 </td> &lt;/ Tr&gt; <tr><td> Şırınga filtre </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 02915-12 </td></tr><tr><td> Sytox Turuncu Nükleik Acid Stain </td><td> Invitrogen </td><td> S-11.368 </td></tr><tr><td> Tripsin EDTA </td><td> Lonza </td><td> CC-5012 </td></tr><tr><td> Tripsin Nötralleştirme solüsyonu </td><td> Lonza </td><td> CC-5002 </td></tr></tbody></table>

laminer akış kesme stres altında endotel progenitör hücrelerin değerlendirin paralel plakalı akış odası ve sürekli akış devre

Parallel-plate Flow Chamber and Continuous Flow Circuit to Evaluate Endothelial Progenitor Cells under Laminar Flow Shear Stress

Bu yöntemin genel amacı, yapışık hücrelere laminer akış koşullarına tabi ve iyi ölçülebilir sıvı kesme 1 vurguluyor tepki değerlendirmek için bir tekniği tanımlamaktır . Bizim akış odası tasarımı ve akış devresi (Şekil 1) (Şekil 11C) akış sırasında çeşitli zaman noktalarında (Şekil 11A, B) akış önce hemen hücre morfolojisi hücre yapışması ve görüntüleme testleri sağlayan şeffaf bir görüş bölgeyi içeren ve sonra akışı (Şekil 11D). Bu deneyler, insan göbek kordonu ile gösterilmiştir kan elde edilen endotelyal progenitör hücreleri (EPC) ve domuz EPC 2,3. Bu yöntem aynı zamanda diğer yapışık hücre tipleri, örneğin düz kas hücreleri (SMC&#39;lere) veya fibroblastlar için geçerli. Odası ve devrenin tüm parçaları kolayca buhar otoklav ile sterilize edilir. Buna karşılık diğerodaları, örneğin mikroakışkan odaları, hücreleri (hücre büyüklüğüne göre 1 milyon), çok sayıda, hücre kültürü veya diğer deneyler, örneğin, DNA veya RNA ekstraksiyonu, ya da immünhistokimya (Şekil 11E) steril koşullar altında akış deney sonucunda kurtarıldı. ya da tarama elektron mikroskobu 5 . Kayma gerilmesi perfüzat, akışkanın viskozite, veya kanal yükseklik ve genişlik debisi değişen ayarlanabilir. Tek boyutlu akış muhafaza edilmesini sağlarken ikincisi sıvı hacmi ya da hücrenin ihtiyacı azaltabilir. Odanın yüksekliği büyük ölçüde birden fazla deneyler kolaylığını artırır conta kullanımı, bağlı değildir, çünkü deneyler arasındaki oda yüksekliğini ölçmek için gerekli değildir. Ayrıca, devre tasarımı, kolayca analiz ve / veya sıvı kayma gerilmesi pozlama altında hücreleri tarafından salgılanan metabolitlerin ölçümü, örneğin nitrik oksit (Şekil 12) 6 perfüzat örneklerin toplanmasını sağlar </sup&gt;

Steril bir sürekli akış devresi, laminer akış kayma gerilmesi tabi yapışık hücrelere için bir yöntem tarif. Hücrelerin yapışma, morfoloji, şeffaf oda ile devre metaboliti analizi ve gelecek deneyler ya da kültür için kayma maruz kaldıktan sonra hasat hücreleri için alınan numuneler incelenmiştir olabilir.

Laminer Akış Kesme Stres altında endotel progenitör hücrelerin değerlendirin Paralel plakalı Akış Odası ve Sürekli Akış Devre

Bu yöntemin genel amacı, adherent hücreleri laminar akış koşullarına maruz bırakacak bir tekniği tanımlamak ve bu hücrelerin söz konusu koşullara verdikleri yanıtı değerlendirmektir...

Bu video makalesinin genel amacı,leukosit benzeri adherent hücreleri laminar akış koşullarına maruz bırakma tekniğini tanımlamak ve iyi şekilde quantify edilebilen akışkan kayma gerilmelerine verilen yanıtı değerlendirmektir. Bu işlem, öncelikle akış hücresi olmadan akış devresinin monte edilmesiyle gerçekleştirilir. Devre; rezervuar darbe sönümleyiciyi, sert tüpleri, yumuşak tüpleri, dört yollu muslukları ve bağlantılı luer adaptörleri ile bir hava filtresini içerir.Bir sonraki adım, devreyi steril koşullar altında hücre besiyeri gibi istenen bol sekizle doldurmak ve ardından darbe sönümleyiciyi doldurup borulardaki havayı tahliye etmek için pompayı çalıştırmaktır. Bunu, hücrelerin yerleştirildiği lamın akış odasının alt plakasına yerleştirilmesi izler. Prosedürün son adımı, akış odasının hat üzerinde olduğu akış devresinin tamamen monte edilmesidir.Sonuç olarak, hücrelerin fonksiyonel davranışlarını incelemek amacıyla, floresan mikroskobu kullanılarak şeffaf bölme üzerinden sıvı kayma stresine maruz bırakılmış floresan işaretli endotelyal progenitör hücrelerin hizalandığını gösteren veriler elde edilebilir. Hücrelerin in vivo fizyolojisini taklit etmek için onları sıvı kayma stresine maruz bırakmak sıklıkla gereklidir. Hücreleri akış koşulları altında incelememize ve onları şeffaf bölme aracılığıyla gözlemlememize olanak tanıyan paralel plaka akış bölmesi ve sürekli akış devresi tasarladık.Bu teknik, tıp ve mühendislik alanları için değerli bir araştırma aracı olarak hizmet edebilir. Akış hücremiz, dik veya ters mikroskop kullanılarak hücrelerin akış altındaki görüntülerinin kesikli veya gerçek zamanlı olarak görselleştirilmesine olanak tanır. Ayrıca, Dr. Ach Nick'in tasarımı, araştırmacıların standart mikroskop lenslerini kullanarak şeffaf veya radyoopak yüzeylerdeki hücreleri görüntülemesine imkan verir.Ayrıca, ilaçların akış koşulları altındaki hücreler üzerindeki etkisini incelemek için farmakoloji araştırmalarında önemli bir araç olarak kullanılabilir. Kurulumun görselleştirilmesi kritiktir, çünkü adımların birçoğuna yalnızca bir protokol okuyarak hakim olmak zordur. Dr. Ock Next'in laboratuvarında yaygın olarak kullanılan akış odasının ve akış devresinin nasıl kurulacağına dair adım adım talimatlar vereceğim. Akış devresini monte etmek için.Bir darbe sönümleyicinin bir ucuna 36 inçlik sert bir boru parçası takarak başlayın. Diğer uca 18 inçlik yumuşak bir boru parçası takın. 18 inçlik yumuşak boru bölümünün ucuna bir sekizden bir inçlik erkek luer adaptör yerleştirin.Erkek bağlantı aparatını, bir sekizlik inçlik dişi bağlantı adaptörüne bağlayın. Dişi bağlantı aparatını, 18 inçlik yeni bir yumuşak tüp segmentine takın. 250 mililitrelik bir cam beher kapağına üç delik açın.Hortumları yerleştirmek için, yumuşak hortumun 1,5 inçlik bir segmentini hava tahliye deliği olarak kullanılacak olan deliğe yerleştirin. Sert ve yumuşak hortumların boşta kalan uçlarını, kapaktaki diğer iki delikten geçirerek rezervuar görevi görecek olan 250 milliliter cam şişenin içine yerleştirin.Sert borunun rezervuarın tabanına ulaştığından emin olun. Devrenin kurulumu boyunca steriliteye dikkat edilmesi, bu prosedürün başarısı için kritik öneme sahiptir. Bu nedenle, tüm parçalar sterilize edilmeli ve işlem boyunca steril eldivenler kullanılmalıdır.Montajı tamamlanan parçaların yanı sıra, şu parçalar da sterilize edilmelidir: Bir adet eksiksiz akış odası, üçle iki inçlik yumuşak boru segmentleri, bir adet erkek ve bir adet dişi bir sekiz inç luer adaptör, dört adet yarım inç düz başlı vida, 6 5 16 inç boyutunda, inç başına 30 dişli sekiz adet düz başlı vida, bir çift cımbız, bir lam ve buharla sterilize edilmiş iki havlu.121 °C'de 60 dakika boyunca otoklavlama yapın. Akış devresi akış odasını, dörtlü stop kokları, tekli stop kokunu ve tüm sterilize edilmiş parçaları bu steril alana yerleştirin. Steril eldivenler giyilmiş haldeyken, iki adet dörtlü stop kokunu birbirine bağlayın.Açık örnekleme portlarının üzerine kapakları yerleştirin. Akış devresinin iki yumuşak tüp segmentini birbirine bağlayan erkek ve dişi lure adaptörleri ayırın ve bağlı stopcock'ları yerleştirin. Rezervuara yerleştirilen yumuşak tüpü 30 mililitrelik bir şırıngaya takın ve şırınga pistonunu çıkarın.Şişeyi 125 mililitre EPC ortamı ile doldurun. Yumuşak tüpü stopcock'a tekrar bağlayın. Hava tahliye deliğine steril bir şırınga filtresi yerleştirin.Şimdi akış devresini 37 °C ve %5 karbon dioksit içeren nemlendirilmiş bir inkübatöre aktarın. Sert boruyu, bu tip coal Palmer borularıyla kullanım için belirtilen master flex rotorlu pompa kafasına sabitleyin. Borunun rotorlu pompa montaj raylarıyla üst üste gelmediğinden emin olun.Pompa başlığının her iki yanından çıkan boruları bir markör kalemle işaretleyin. Tüm muslukların numune portlarına doğru kapalı ve akış devresi boyunca açık olduğundan emin olduktan sonra pompayı çalıştırın. Akış yönünü doğrulayın.PERFUSE 8, cam rezervuardan sert boru aracılığıyla darbe sönümleyiciye doğru hareket etmelidir. Akış hücresi düzeneği için, iki inçlik bir yumuşak boru segmentini bir sekizde bir inçlik dişi luer adaptöre bağlamak için steril eldiven kullanın. Başka bir iki inçlik yumuşak boru segmentini bir sekizde bir inçlik erkek luer adaptöre bağlayın.Dişi luer adaptörlü iki inçlik yumuşak tüpü giriş portuna, erkek luer adaptörlü iki inçlik yumuşak tüpü ise çıkış portuna takın. Bu luer adaptörlerin her ikisine dört yollu stop koklar takın. Kalan iki inçlik yumuşak tüp parçasını kabarcık tuzağından çıkan yan port konnektörüne bağlayın ve steril pens kullanarak bir tek yönlü stop kok takın.Hücre ekilmiş lamı hücre kültür kabından çıkarın ve akış odasının alt plakasındaki oyuğa yerleştirin. Lamın hücre ekili tarafının yukarı baktığından emin olun; bir şırınga veya pipet kullanarak hücre ekili lamın üzerine 10 mililitre sıcak EPC medyumu ekleyin. Medyumun akış odasındaki lamı kaplamasına izin verin, ancak medyumun alt plaka üzerindeki O-ringasının dışına taşmamasına dikkat edin.Vida deliklerini hizalayarak, akış odasının üst plakasını alt plakanın üzerine yerleştirin. Vida plakalarının içine hava kabarcığı girmemesi için iki plakayı birbirine paralel tutun. Otomatik pilli bir tornavida kullanarak, giriş tarafındaki kabarcık tuzağı portuna bağlı tek yönlü stop musluğu açarak giriş kabarcık tuzağındaki havayı tahliye edin.Giriş borusunu EPC ortamı ile nazikçe durulamak için 10 mililitrelik bir şırınga kullanın ve ardından bu stop kokunu kapatıp kapağını örtün. Şimdi, çıkış portu dört yollu stop kokunu açıp akış kanalı boyunca nazikçe EPC ortamı geçirerek kanal kanalındaki havayı tahliye edin. Tekrar 10 mililitrelik bir şırınga kullanarak tüm dört yollu stop kokunu bağlantılarının kapaklarını kapatın ve bunları kilitleyin.Akış hücresini, monte edilmiş akış devresiyle birlikte nemlendirilmiş inkübatöre aktarın. Akış devresi pompasını durdurun ve sızıntıyı önlemek için akış yönündeki akış devresi musluklarını kapatın.Akış odasını akış devresine bağlayın. Akış odası akış devresine bağlandıktan sonra, durdurma musluklarını akış yönünde açın. Akış pompasını yeniden çalıştırın ve PERFUSE sekizinin doğru yönde aktığından emin olun. Akış hızını istenen kayma gerilimine göre ayarlayın.Akış deneyi sırasında, hücreleri ışık veya floresan mikroskobu ile görüntülemek için akış odası devreden çıkarılabilir. Bunun için, akış odasını musluktan musluğa bağlantı noktalarıyla akış devresinden ayırın. Analiz için perfüzyon örnekleri toplamak amacıyla.İlk olarak pompayı durdurun, darbe sönümleyiciye en yakın konumdaki stop musluğunu kapatın. Koruyucu kapağı çıkarın ve kontamine olmamasını sağlamak için ters şekilde yerleştirin. Örnekleme portuna küçük bir şırınga yerleştirin.Örnekleme portu ve puls sönümleyici yönündeki devreyi açık tutarak, akış hücresi yönündeki musluğu kapatın. Devreden istenen miktarda örnek çekin ve şırıngayı çıkarmadan önce örnekleme portu yönündeki musluğu kapatın. Alınan sekiz örneği etiketli bir tüpe koyun ve -80 °C'de dondurun.Akışı başlatmadan önce örnekleme portunun kapağını kapatın ve tüm muslukların açık olduğundan emin olun. Bu yöntem kullanılarak, insan kanından türetilmiş endotelyal öncül hücreler 15 dakika içinde titanyum lamlar üzerine ekilebilir ve fizyolojik kayma kuvvetleri altında tutunabilirler. Bu şekilde gösterildiği üzere, EPC'ler 15 dines per square centimeter sıvı kayma gerilimi etkisiyle, ekimden hemen sonra yaklaşık 210 square microns olan yayılım alanlarını üç saat sonra yaklaşık 657 square microns'a ve 48 saat sonra yaklaşık 1, 152 square microns'a çıkarmaktadırlar.Bu ışık mikroskobu görüntüsü, insan EPC'lerinin rastgele yönelimini göstermektedir. Santimetrekare başına 100 dines akışın üç saat sürmesinin ardından altı saatlik statik oturma süresinden sonra, hücreler yayılmış ancak rastgele yönelimlerini korumuşlardır. Santimetrekare başına 100 dines akışkan kayma stresinin 48 saat uygulanmasının ardından, EPC'ler akış yönünde hizalanmış ve yönlenmişlerdir.Burada EPC'ler, akış sonrası ölüm için CTO ile işaretlenmiş ve hücre çekirdekleri herx ile boyanmıştır. Karşılaştırma amacıyla, bu görüntü, akış yönüyle hizalanmış titanyum lamlar üzerindeki porsin EPC'lerini göstermektedir. 48 saatlik akış ve santimetrekare başına 15 dines kayma gerilimi maruziyetinden sonra, hücre sınırları anti pcam boyasıyla ve çekirdekler cytoxin nükleik asit boyasıyla boyanmıştır.Bu yöntem ayrıca, salgılanan hücre metabolitlerinin analizi ve/veya nicelendirilmesi için PERFUSE eight'ten önceden belirlenmiş zaman noktalarında örnekler alınmasına olanak tanır. Burada, porcine EPC'ler ile yapılan 48 saatlik bir akış deneyi sırasında nitrit üretiminden bir örnek gösterilmiştir. Bu prosedür uygulanırken, süreç boyunca sterilitenin korunması önemlidir.Ayrıca, hücreleri koparabilecekleri için sürekli akış başlamadan önce akış odasındaki hava kabarcığı sayısını azaltmak adına gerekli önlemlerin alınması önemlidir. Deney sırasında PERFUSE eight sızıntısını önlemek için perfüzyon öncesinde akış odasındaki ve devredeki tüm bağlantıların tek tek kontrol edilmesini öneririz. Bu oda, üst ve alt plakaların tamamen karşı karşıya gelmesini sağlayan ve vakum pompalarına ihtiyaç duymadan sızdırmaz bir mühür sağlayan yerleşik O-ringlerle tasarlanmıştır.Bu özellik, deneyler arasında sabit bir hazne yüksekliği sağlar ve kauçuk contalara veya ayarlamalara olan ihtiyacı ortadan kaldırır. Akış haznemiz standart mikroskop lamları kullanır. Bu sayede, sonraki deneyler için çok sayıda hücreye erişim sağlanmış olur.Örneğin, akış sonrası hücrelerden elde edilen RNA ve DNA, protein sentezi veya gen ekspresyonu açısından değerlendirilebilir. Devre tasarımımız, analiz için sekiz perfüzyon örneğinin toplanmasına ve sıvı kayma stresine maruz kalan hücreler tarafından salgılanan nitrik oksidin temel oksidatif metaboliti olan nitrit gibi hücre metabolitlerinin miktarının belirlenmesine olanak tanır. Bu videoyu izledikten sonra, yapışkan hücreleri sıvı kayma stresine maruz bırakmak için akış odamızı ve steril akış devremizi nasıl monte edeceğiniz konusunda kapsamlı bir bilgiye sahip olmanız gerekir.

parallel-plate-flow-chamber-continuous-flow-circuit-to-evaluate

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Fotolitografi tarafından kazınmış ve PDMS imal Mikroakışkan akışı odaları EC disfonksiyonu ve inflamasyon ile ilişkili fonksiyonel sonuçlarını araştırmak için uygulanır. Temsili bir deneyde, diferansiyel kayma gerilmesi yeteneği sitokin aktive AK monolayers için monositik hücre adezyon modüle gösterilmiştir.

On-Chip Endotel İnflamatuar fenotipleme

Bu video, lökositlerin ve endotel hücreleri gibi hücresel ortakların etkileşimini karakterize etmek için laminer akış tabanlı bir testi göstermektedir. Bu yöntem, sağlam ve birleşik bir vasküler hücre tabakası üzerine perfüze edildiğinde lökositlerin yapışması, adezyonu ve transmigrasyonu hakkında dinamik bilgiler sağlar.

Lökositler ve endotel hücreleri arasındaki etkileşimleri incelemek için laminer akış tabanlı bir test

Bu çalışma, önemli fizyolojik olarak ilgili kesme akımı altında, hücre haddeleme çalışmalar artırıp, çok oyuklu bir plaka mikroakışkan sistemi kullanılır. Silsilesini ve hastalarda hücre ekzojen popülasyonlarının sistemik olarak uygulanmasını takiben hücre hedeflemesi önemini homing çok adımlı, hücre haddeleme önemi göz önüne alındığında, bu sistem, hücre bazlı tedaviyi geliştirmek için bir tarama platform olarak potansiyel sunmaktadır.

Sistematik Analizi In Vitro Hücre Rolling

Fizyolojik Akış Koşullarında Sirkülasyon Hücre Kemokin-yönettiği Ekstravazasyon Eğitim Bir Roman Üç boyutlu Akış Odası Cihazı

Trombosit transfüzyonu ve hemostazı, kan bankacılığı trombositlerinin işlevini araştırmak için kan sulandırma ve mikroakışkan akış odaları kullanılarak modellendi. Veriler, trombosit depolama lezyonunun in vitro olarak hemostaz üzerindeki sonuçlarını göstermektedir.

Mikroakışkan Akış Chambers Hemostaz ve Trombosit Transfüzyon Model Sulandırılarak Kan kullanma<em&gt; İn Vitro</em

Farklı seviyelerde ve sıvı kesme paternlerinin endotelyal gen ekspresyonu, fenotipi ve hastalığa yatkınlığı modüle ettiği bilinmektedir. 'Kesme halkalarının' montajını ve kullanımını tartışıyoruz: tek yönlü, periyodik kesme gerilimi modelleri üreten bir model. Kesme halkalarının montajı kolaydır, ekonomiktir ve yüksek hücre verimi sağlayabilir.

Montaj ve &#39;Kayma Rings&#39; Uygulama: Orbital tek yönlü ve Periyodik Akışkan Akışının ve Kayma Stres için Yeni Bir Endotel Modeli

Bu makale aynı zamanda trombosit fonksiyonu ve pıhtılaşmayı ölçen hemostaz deneysel model tanımlamaktadır. Trombosit ve fibrin floresans gerçek zamanlı olarak ölçülür ve platelet yapışma oranı, bir pıhtılaşma hızının, pıhtılaşma başlangıcı belirlenir. Model transfüzyonu için konsantreleri akışı altında trombosit prokoagülan özelliklerini belirlemek için kullanılır.

Trombosit Transfüzyon ve Hemostaz için bir mikroakışkan Akış Odası Modeli Gerçek zamanlı Trombosit Birikimi ve Fibrin oluşumu Tedbirleri

Bu çalışma, trombosit yapışması, yayılması ve akış altında salgı çalışması için bir floresan mikroskopi tabanlı yöntem açıklanmaktadır. Bu çok yönlü platform tromboz ve hemostaz üzerine mekanik araştırma için trombosit fonksiyonunun araştırılmasını sağlar.

Akım altında Trombosit Degranülasyonu ve Salgılamanın Canlı Hücreli Görüntüleme

Lökosit heyecanla damar hücreleri ve trombositlerin damar duvar yaralanma sonra veya enflamasyon sırasında etkileşim. Burada, lökosit ve hücresel eşleri arasındaki etkileşimler altında yatan moleküler mekanizmaları karakterize etmek için basit bir laminar akış tabanlı tahlil açıklayın.

Lökosit işe kültürlü damar hücreleri ve yapışık trombositler üzerinde araştırmak için Laminar akış tabanlı deneyleri

Burada, sıvı kesme stres altında endotel hücre kültür ve gen ifade analizi için iş akışı gösterilmektedir. Dahil aynı anda konut ve kontrollü bir ortamda ve eksojen başvuru RNA kullanım kantitatif PCR için birden çok akış odalarında takibi için fiziksel bir düzenlemedir.

Stres birden çok paralel-plaka akışı Chambers kullanarak yamultmak için maruz endotel hücrelerinin gen ifade Analizi

İlgili vasküler akış koşulları altında vasküler endotel hücrelerinin (EC'ler) kültürlenmesi için ayarlanabilir jelatin bazlı bir substrat sentezledik ve karakterize ettik. Bu biyomimetik yüzey, hem fizyolojik hem de patolojik koşulları taklit ederek, EC davranışı üzerindeki mekanik kuvvetlerin incelenmesini sağlar ve vasküler sağlık ve hastalık mekanizmaları hakkındaki anlayışımızı geliştirir.

Endotel Hücre Tepkilerini İncelemek için Substrat Sertliğini ve Akışını Entegre Eden İn Vitro Model

Öğrenin endotel progenitör hücrelerini laminer akış kesme stresi altında değerlendirmek için paralel plakalı akış odası ve sürekli akış devresi kullanımını. Bu yöntem hücre yapışması ve morfolojisini in vivo koşullarda çalışmaya olanak tanır.

Laminer Akış Kesme Stres altında endotel progenitör hücrelerin değerlendirin Paralel plakalı Akış Odası ve Sürekli Akış Devre

Daha fazla video keşfet