Lezyon Tanımlaması için Meme Bandı Bütün Dağılımları

Bu prosedürün genel amacı, mikroskobik düzeyde lezyon tanımlaması için tüm monte edilmiş fare meme dokusundan yüksek kaliteli lekeli kesitler oluşturmaktır. Bu yöntem, meme bezi değerlendirmesini içeren, meme bütün höyüklerinde kaba olarak tanımlanan lezyon tiplerinin histopatolojik olarak tanımlanması gibi önemli soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, tüm monte edilmiş dokular kullanıldığında meme bezleri içinde bulunabilecek lezyonları belirleme şansını arttırmasıdır.

Bu yöntem için ilk olarak, aynı hayvanlardan alınan formalin uyumları H ve E boyası kontralateral bezleri için tüm mount fenotiplerini histopatoloji raporlarıyla karşılaştırdığımızda aklımıza geldi. Tanılarda bir tutarsızlık gördük, tüm bağlarda daha fazla lezyon belirgindi. Bu yöntemin görsel gösterimi önemlidir, çünkü tüm montaj çıkarma ve gömme adımları bu prosedürün başarısı için kritik öneme sahiptir.

Bez, ince gevrek doğası nedeniyle hassastır. Tüm montaj belleği örneklerini hazırladıktan ve dokuyu metin protokolüne göre anormallikler açısından analiz ettikten sonra, slaytları ksilen ile doldurulmuş bir cam boyama kavanozuna daldırarak kapak fişlerini ve montaj ortamını çıkarın. Gece boyunca veya daha uzun süre kuluçkaya yatırın.

Slaytları taze ksilene aktarın ve numuneleri altı saat bekletin. Daha sonra numuneleri tekrar taze ksilene aktarın ve gece boyunca ıslatın. Ardından, eldivenli bir el ile slaytı tutun ve lamel tek parça halinde dikkatlice çıkarmak için bir çift forseps kullanın.

Montaj ortamının kalınlığına ve tüm montajın lamel işleminden bu yana geçen süreye bağlı olarak lamel çıkarma kolaylığında değişkenlik olabilir. Bu nedenle, lamel kolayca serbest bırakılana kadar sürgünün ksilen içinde kalması zorunludur. Lamel çıkarıldıktan sonra, bıçağı slayttan aşağı tek bir hareketle kaydırarak numuneyi çıkarmak için keskin bir tek kullanımlık tıraş bıçağı kullanın.

Ardından, dokunun kurumasını önlemek için bellek pedini hızlı bir şekilde ksilen dolgulu bir cam petri kabına daldırın. Daha büyük dokuları ikiye bölmek için bir tıraş bıçağı kullanın. Daha sonra doku hasarını en aza indirmek için, yağ yastıkçığının kenarını tutmak için künt burunlu tırtıklı uçlu forseps kullanın ve yarımları sağ tarafı yukarı bakacak şekilde doku boyutuna uyacak iki ayrı etiketli kasete yerleştirin.

Kaseti, doku işlemcisine yerleştirmeden önce iki saate kadar bir ksilen kabına yerleştirin. Daha sonra maksimum sayıda kaseti el ile doku işlemcisine yükleyin. Başlamadan önce, işlemciyi doku işleme için programlayın.

Prosedürü otomatikleştirmek için istasyonu, sıcaklığı seçin ve vakum açık konuma getirin. İşlemciyi, kasetleri 37 santigrat derecede 30 dakika ksilen içinde bekletmek ve ardından aynı koşullar altında taze ksilene ikinci kez batırmak için otomatikleştirin. Ardından, kasetleri ksilen çözeltisinden çıkarmak için işlemciyi otomatikleştirin ve dokuları, 30 dakika boyunca 60 santigrat dereceye ayarlanmış bire bir ksilen ila erimiş parafin karışımı içeren işlemci içindeki bir odaya aktarın.

Tüm adımlar tamamlandığında, devam etmek için Tamam'ı veya Başlat'ı seçin. Kasetleri kalıba yerleştirmeye hazır olana kadar 58 santigrat derece parafin banyosunun tutma tankına yerleştirin. Dokular için en iyi küf boyutunu belirlemek için kaset kapaklarını çıkarın.

Musluğun ağzından kalıba üç ila dört milimetre erimiş parafin ekleyin, ardından erimiş parafin içindeki dokuyu, cam sürgünün dibine ve kasetin altına bitişik olan meme tüm montaj yüzeyi kalıba bakacak şekilde yönlendirin. Kalıbı bir soğutma plakasına aktarın ve dokuyu kalıp tabanına paralel olacak şekilde gerektiği gibi hızlı bir şekilde ayarlayın. Forseps kullanarak, etiketli kaseti kalıbın üzerine sıkıca yerleştirin.

Tüm kaseti kaplayacak şekilde sürekli bir hareketle kalıba ilave erimiş parafin dağıtın. Kesitleme için seçilen tam konumda sabitlemeyi teşvik etmek için kalıbı sıcak plakadan soğuk bir plakaya hareket ettirin. Parafin bloğu tamamen katılaştığında, bloğu kalıptan ayırın.

Ve bölümlere ayırmaya hazır olana kadar oda sıcaklığında saklayın. Bölümlere ayırmadan önce, parafin bloklarını eksi 20 santigrat derecede bir saat boyunca inkübe edin. Daha sonra taze damıtılmış su içeren su banyosunu açarak mikrotomu hazırlayın ve sıcaklığı 42 ila 45 santigrat dereceye ayarlayın.

Ardından, mikrotomun üzerine yeni bir düşük profilli bıçak yerleştirin ve dört mikrometreye ayarlayın. Bloğu, balmumu bıçağa bakacak ve dikey düzlemle hizalanacak şekilde mikrotomun içine yerleştirin. Daha sonra gazlı bezin bir bölümünü soğuk suyla nemlendirin ve birkaç dakika boyunca bloğun üzerine yerleştirin.

Bloğun tam bir yüzü veya temsili bir bölümü elde edilene kadar, büyük tekerleği rota ilerlemiş tekerlekle birlikte saat yönünde çevirerek bloğu bölümlere ayırın. Ardından, almak için temiz bir slayt kullanmadan önce doku bölümünü elle ılık su banyosuna aktarın. Fazla suyu çıkarmak için slaytları bir kurutma braketine yerleştirin.

Daha sonra doku bölümlerini gece boyunca 37 santigrat derecede saklayın. Slaytları 37 santigrat derece inkübatörden çıkardıktan sonra, lekelenmeye hazır olana kadar oda sıcaklığında saklayın. Otomatik boyama için, slaytları lekelemek için ana menüdeki boyama seçeneklerinden H ve E'yi seçin.

Deparafinizasyon, boyama ve dehidrasyonun tümü otomatik boyayıcıda tamamlanır. Bölümleri monte etmek için montaj ortamı ve bir lamel kullanın. Meme dokusunun ideal kalınlığını belirlemek için dört mikrometre ve altı mikrometre kesiti hazırlandı.

Dört mikrometre kesiti, epitel ve stromal alanların ve karşılık gelen hücre tiplerinin kolayca ayırt edilebildiği optimal sonuçlar verdi. Bu rakamlar normal bezlerin histolojik bölümlerini temsil eder. Her iki bez de sağlam ve homojen adipositten zengin bir popülasyon ile çevrili duktal yapılar gösterir.

Her kanal, tek bir basit küboidal epitel hücresi tabakası ile kaplıdır ve ikinci bir bazal hücre tabakası tarafından korunur. Kontralateral bütün bağlar, hafıza bezleri kanallarını içeren artan opaklık alanı içeriyordu. Bununla birlikte, opaklığın hiperplastik, enflamatuar veya neoplastik bir değişiklikten kaynaklanıp kaynaklanmadığı belirsizdi.

Kontralateral bütün bağlar burada gösterilmiştir. Bu kesitler, meme bezleri bölümünde büyük bir kan damarı etrafındaki lenfosit sayısının artmasına bağlı olarak perivasküler inflamasyon olarak teşhis edildi. Bu örneklerde, meme bezi lobüler mimarisi korundu, ancak lobüler alveolar hiperplazi için normal alveol ve kanalların sayısının ve boyutunun artmasıyla genişledi.

Genişlemiş lobüller, proteinli sıvı içeren lümenleri oluşturan iyi farklılaşmış, sıklıkla vakuollü epitel hücreleri tarafından kaplanmış artan sayıda alveol ve kanal içeriyordu. Bu prosedürü denerken, dokunun ksilenden kırılgan olduğunu ve kolayca kırılarak numunenizi tahrip edebileceğini hatırlamak önemlidir. Bu yöntemi denemeden önce düz yataklı bir tarayıcı kullanarak tüm montajların yüksek kaliteli fotoğrafları teşvik edilir.

Bu, toksikolojik patoloji alanının kimyasal tarama için tüm montaj değerlendirmesi yönünde hareket etmesi için bir fırsattır. Dolayısıyla lezyonlar bu seviyede tanımlandığında artık histopatolojik tanı için yüksek kaliteli kesitler üretilebilmektedir. Bu videoyu izledikten sonra, lezyon tanımlaması için meme bütün montajlarının nasıl çıkarılacağını, gömüleceğini ve kesit alınacağını iyi anlamış olmalısınız.

Ksilen ile çalışırken laboratuvar önlüğü ve eldiven gibi önlemlerin alınması ve çalışmanın bir başlık altında yapılması gerektiğini unutmayın.