Name: 4T1 Meme Kanseri Modelinde Akciğer Metastazının Nicelleştirilmesini Geliştirmek Için Bilgisayar Tabanlı Görüntü Analizinin Kullanılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Keşfedin meme kanserinde akciğer metastazının nicelleştirilmesi için bilgisayar tabanlı görüntü analizi yöntemini. Bu protokol Fiji-ImageJ kullanarak daha hızlı ve tutarlı sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Virginia-Maryland Veterinerlik Koleji (IA), Virginia Tech Institute for Critical Technology ve Uygulamalı Bilim Mühendislik Sağlık Merkezi (IA) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri R21EB028429 (IA) tarafından desteklenmiştir.

Burada açıklanan tüm yöntemler Virginia Tech Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanları Bakımı ve Kullanımı Rehberi uyarınca. Bu protokolün gerçekleştirilmesi için ilgili kurumlardan izin ve tüm uygun kurallara uyulması gerekir.
1. Hücre Kültürü
<ol><li>Tam kültür ortamı (RPMI + 10% Fetal Sığır Serumu +% 1 Pen Strep) olun. ATCC Protokol10'a göre 4T1 hücrelerini canlandırın vet-25 şişesinde 37 °C ve %5 CO 2'de konfluent olana kadar kuluçkaya yatırın. Ölü hücreleri kaldırmak için yeniden canlandıktan sonraki gün ortamı değiştirin ve hücreler geçebilecek kadar yoğun olmadan önce ortam harcanıyorsa tekrar.</li>
	<li>T-25 şişesi konfluent olduktan sonra, hücreleri t-75 şişesine aktarak, 5 mL 1x Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salini (DPBS) ile yıkayarak ve 500 μL Trypsin-EDTA ekleyerek bir T-75 şişesine geçiş. Hücreler ayrışana kadar 37 °C'de 5-10 dakika kuluçkaya yatırın.<ol>
<li>Ayrıldıktan sonra hücrelere 5 mL ısıtılmış tam kültür ortamı ekleyin. 5 mL'yi 15 mL'lik ısıtmalı tam kültür ortamı içeren bir T-75 şişesine aspire edin ve aktarın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>T-75 şişelerinde en az dört kez geçiş hücreleri. Şişe 8 mL 1x DPBS ile yıkandıktan sonra, hücreleri ayırmak için 1 mL Trypsin-EDTA ekleyerek, hücrelere 10 mL ısıtılmış ortam ekleyerek ve 1:6-1:8'i 20 mL ısıtılmış tam kültür ortamı içeren yeni bir T-75 şişesine seyrelterek yapın.</li>
	<li>Enjekte edilecek fare sayısı için 40 mL ısıtılmış tam kültür ortamı içeren uygun sayıda T-150 şişesine kadar geçiş hücreleri. Çoğu çalışma enjeksiyon için yeterli hücreleri sağlamak için birden fazla T-150 şişeleri gerektirir.</li>
	<li>Fareler enjekte edilmeye hazır olduğunda (IACUC veya kurumsal protokollere bağlı olarak 8 haftalık veya 20 g'ın üzerinde ağırlık), ortam atarak, her şişeyi 1x DPBS'nin 10 mL'si ile yıkayarak ve 2 mL tripsin-EDTA ekleyerek hücreleri hasat edin. Hücreler ayrışana kadar 37 °C'de 5-10 dakika kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>10 mL tam ortam ile şişeyi yıkayın ve tüm içeriği (10 mL ortam + 2 mL tripsin-EDTA hücre karışımı) bir sonraki şişeye aktarın. Aşırı miktarda ortam kullanmaktan kaçınmak için aynı 10 mL'lik ortam kullanarak her şişeden hücreleri yıkamaya ve toplamaya devam edin.<ol>
<li>Tüm şişeler toplandıktan sonra, içindekileri 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın. Mikrosantrifüj tüpünde saymak için 10 μL numune alın ve 50 mL konik tüpü 125 x g'de 5 dakika santrifüj edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hücreler santrifüj edilirken, 10 μL'lik hücre örneğine 10 μL Trypan mavisi ekleyin. Hemositometre kullanarak hücreleri say. Toplam hücre sayısı belirlendikten sonra fare başına 1,2 x 106 hücre (100°L başına) için fare enjekte etmek için gereken hücrelerin konsantrasyonu hesaplayın.</li>
	<li>Santrifüjden sonra, 100 μL'de 1,2 x 106 hücre için steril 1x DPBS'nin doğru miktarda decant media ve resuspend hücre peleti. Hücre/DPBS karışımını, enjeksiyon için hücreleri azarlarken şırınga ile kolay erişim için mikrosantrifüj tüplere bölün. Hücreleri buzüzerinde tutun ve kısa bir süre sonra enjekte gibi hücreler uzun süre buz üzerinde olduktan sonra ölmeye başlayacaktır.</li>
</ol>2. Enjeksiyonlar
<ol><li>Hücreleri tekrar askıya almak için mikrosantrifüj tüpüne dokunarak veya hafifçe karıştırarak hücreleri enjeksiyoniçin hazırlayın ve 600 μL'yi 1 mL şırıngaya aspire edin. Şırıngayı yukarı doğru çevirin ve hücreleri şırınga açılışından uzaklaştırmak için pistonu aşağı çekin. Hava kabarcıkları kurtulmak için şırınga dokunun.</li>
	<li>İğneyi yukarı takın ve hücreleri şırıngada sadece 500°L kalana kadar mikrosantrifüj tüpüne geri dağıtın. Şırıngayı buza düz koy. NOT: 4T1 hücreleri süspansiyondan hızla düşer. Bu nedenle, sık sık dokunarak hücreleri süspansiyon geri karıştırmak önemlidir.</li>
	<li>Anestezi 8 haftalık/>20 g dişi BALB/c fare isofluran veya diğer onaylı anestezik ajan kullanarak. Anestezinin derinliğini değerlendirmek için farenin nefesini izleyin.</li>
	<li>Fare kornea reflekseksikliği ile belirtildiği gibi düzgün anestezi sonra, sırtına fare yerleştirin. Başparmağı, işaretçiyi ve orta parmağı nızı kullanarak fareyi hafifçe basılı tutun. Farenin üst gövdesini ve başparmağını arka sol bacağı için tutmak için işaretçiyi ve orta parmakları kullanın. Nazik ama sert ol.</li>
	<li>İğnenin dik meçlesiyle, farenin sol karın meme yağ yastığına deri altı olarak 100°L hücre enjekte edin. İyi bir kanama ve herhangi bir sızıntı için monitör ve fare uyanır ve enjeksiyondan sonra kolayca hareket emin olun.<ol>
<li>İğneleri her fare arasında değiştirin. NOT: İğnenin periton boşluğuna girmesine izin vermeyin. Bu kanser hızlı bir şekilde yayılmasına neden olur ve modeli temsil değil. Deri altı enjeksiyonu sağlamak için, sol karın meme yağ yastığına yerleştirildiğinde iğneyi hafifçe yukarı doğru çekin. İğne kolayca yukarı kaldırılırsa, deri altına doğru şekilde konumlandırılır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. İzleme
<ol><li>Monitör fareler en az 3 kez haftada kilo, vücut durum skoru, tümör boyutu, tümör durumu, solunum, aktivite düzeyi, görünüm ve hareket için. Tümör çapı 0.7-0.8 cm ulaştığında, günlük izlemeye başlar.<ol>
<li>Tümör boyutu 1.5 cm'ye ulaştığında veya kilo kaybı %20'ye ulaştığında veya vücut durumu skorunda, tümör durumunda, solunumda, aktivite düzeyine, görünüme veya harekette ciddi klinik düşüşler kurumsal kılavuza göre gözlendiğinde ötanaziyi göz önünde bulundurun. NOT: Tümör boyut arttıkça vücut ağırlığı arttıkça vücut durumu skorunun izlenmesi için çok önemlidir, hastalık yüküne bağlı vücut durumu kaybı olumsuzdur. Tam izleme protokolleri onaylanmış IACUC veya kurumsal protokollere bağlıdır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Nekropsi
<ol><li>Kurumsal yönergeleri izleyerek CO2 kullanarak fare ötenazi.</li>
	<li>Dezenfekte etmek için% 70 etanol ile sprey fare. Vücut boşluğu ortaya çıkarmak için farenin ventral orta hattı kadar bir kesi yapın.</li>
	<li>Böbreği çıkar. Diyafram görünür olana kadar orta hattı kesmeye devam edin. Akciğerleri söndürmek için diyafram ı delmek için makas kullanın. Kaviteye daha iyi erişim sağlamak için diyaframı kırpın.</li>
	<li>Göğüs kafesinin merkezini kesmek için künt makas kullanın. Akciğerve kalbi ortaya çıkarmak için göğüs kafesini geri sıkıştır.</li>
	<li>Brördün alındığı karın boşluğunda biraraya gelene kadar kalbin apex içine bir iğne takarak steril olmayan 1x DPBS 2 mL ile kalp perfuse.</li>
	<li>Kalp ve akciğerleri çıkarmak için, yemek borusu ve doğrudan kalp üzerinde trakea kesmek için künt makas kullanın. Forceps kullanarak, vücuttan uzak kalp çekmeye başlar ve bağlı tutmak herhangi bir bağ dokusu kesip. Akciğerler kalple birlikte çıkacak.</li>
	<li>Çok loblu (sağ) ve tek lokul (sol) akciğerleri tanımlayın. Referans için kalbi bağlı tutun, ama akciğerler tespit edildikten sonra, kalbi kes.</li>
	<li>Her kuyuda 1x Hank'in Dengeli Tuzlu Solüsyonu (HBSS) içeren 12 kuyuluk plakayı etiketlayın. Her farenin 2 kuyuya ihtiyacı vardır. Metastaz değerlendirmesi için çok loblu (sağ) akciğeri 12 kuyu plakası içinde yerleştirin ve buzüzerinde tutun. Şimdilik komşuyu boş tut. NOT: Her numunenin boyutuna yakın olduğundan emin olmak için her fareden aynı akciğeri (çok loblu) kullanmak önemlidir. Tek loblu akciğer daha sonra histopatoloji gibi diğer analizler için kullanılabilir. NOT: Numuneler buzda veya 4 °C'de birkaç saat stabildir.</li>
</ol>5. İşleme Dokuları
NOT: Bu bölümdeki tüm adımlar steril teknik kullanılarak yapılmalıdır.
<ol><li>Fare başına etiket 1 15 mL konik tüp ve her tüpe tip IV kollajenaz karışımıve 30 birim elastaz ekleyin. Tip IV kollajenaz karışımı yapmak için, mL 1x HBSS ve steril filtre başına tip IV kollajenaz 2 mg çözünür. Bu da -20 °C'de 12 aya kadar saklanabilir ve gerektiğinde çözülebilir.</li>
	<li>Akciğeri ikinciye aktarın, bu örnek için 1x HBSS'yi temizleyin. Kalan kanı çıkarmak için forceps kullanarak girdap. Temiz akciğeri boş 3,5 cm doku kültür plakasına aktarın. Makasla kıyma ciğeri. 2,5 mL 1x HBSS ile durulayın, 1x HBSS ve akciğer parçalarını kollajenaz/elastaz kokteyli (toplam 5 mL) içeren 15 mL konik tüpe aktarın.</li>
	<li>4 °C'de 75 dakika kuluçkaya yatırın. Bu süre içinde örnekleri karıştırmaya devam edin, bu nedenle tüpleri bir rocker veya dönen tekerüzerine yerleştirin. Bu kuluçka adımı nda, her fare için 50 mL santrifüj tüpü ve 10 cm doku kültür plakası etiketlendi. Bir seyreltme yapıyorsanız, seyreltmeler için yeterli 10 cm doku kültür plakaları etiket. NOT: Doku kültür plakalarının kapağını etiketlayın. Plakanın kendisini etiketlemevarsa, yazı Fiji-ImageJ analizini bozar.</li>
	<li>1x HBSS ile her tüpün hacmini toplam 10 mL'ye kadar getirin. Her numune için 50 mL konik tüpiçine 70 m hücreli süzgeç üzerine içindekileri dökün. Daha fazla hücrenin filtrelemesine izin vermek için numuneyi süzgeçten hafifçe öğütmek için 1 mL'lik şırınganın pistonu kullanın.</li>
	<li>Oda sıcaklığında 350 x g'de (RT) 5 dakika santrifüj. 1x HBSS 10 mL ile supernatant atın ve yıkama pelet. Bu adımı iki kez tekrarlayın.</li>
	<li>RPMI veya IMDM olmak üzere 60 μM 6TG tam kültür medyasının 10 mL'lik kısmını yeniden askıya alın. Plaka örnekleri istenirse seyreltme şeması kullanılarak 10 cm hücre kültür plakaları. 37 °C'de, %5 CO2'de 5 gün kuluçkaya yatırın. NOT: 1:2, 1:10 ve 1:100, çalışma parametrelerine göre ampirik olarak belirlenmesi gereken yaygın seyreltmelerdir. DİkKAT: 6TG zehirlidir. Kullanım yaparken dikkatli olun ve bertaraf için tüm Çevre Sağlığı ve Güvenliği yönergelerine uyun.</li>
</ol>6. Boyama plakaları
<ol><li>Uygun atık konteyner içine plakalar kapalı kültür medya dökün. Plaka başına 5 mL seyreltilmemiş metanol ekleyerek hücreleri düzeltin ve RT'de 5 dakika kuluçkaya yatırın, metanolün tamamını kapsaymasını sağlayacak şekilde döndürün. DİkKAT: Metanol yutulduğunda, solunduğunda veya ciltüzerindeyse tehlikelidir. Bu adım için bir duman başlık kullanın.</li>
	<li>Uygun atık konteyner içine plakalar kapalı metanol dökün. Plaka başına 5 mL distile su ile durulayın ve uygun atık kabına su dökün. Plaka başına %0,03 metilen mavisi 5 mL ekleyin ve RT'de 5 dakika kuluçkaya yatırın, metilen mavisi çözeltisini tüm plakayı kapsamasını sağlayacak şekilde döndürün.</li>
	<li>Uygun atık kabına metilen mavisi dökün. Plaka başına 5 mL distile su ile tekrar durulayın. Plakaları ters çevirin ve fazla sıvıyı çıkarmak için kağıt havluya karşı lekeleyin. Plakayı kapağına yerleştirin ve havanın bir gecede RT'de kurumasına izin verin. NOT: Metastatik koloniler mavi olacaktır. Tabaklar kurutulduktan sonra RT'de süresiz olarak saklanabilir.</li>
</ol>7. Görüntü analizi
<ol><li>Plakalardan etiketlenmiş kapakları çıkarın ve numunelerin net bir şekilde tanımlanmasını sağlamaya özen inin. Tüm lekeli akciğer plakalarını temiz ve açık bir yüzeye dizin ve tüm plakaların fotoğrafını tek bir görüntüde alın.</li>
	<li>Plakalar çok yansıtıcı olduğu için yansımaları en aza indirmek için emin olun, iyi aydınlatılmış bir alanda plakakoleksiyonu bir resim çekmek. Plakalardaki yansımalar görüntü analizini etkileyecektir ve bu nedenle kaçınılması gerekir. NOT: Fiji-ImageJ 2 gigapixels bir üst sınırı vardır. En modern akıllı telefonlar yeterli kameralar olacak. 8 megapikselden daha az bir kamera kullanmayın. Bu deneyde kullanılan kamera, Google Pixel 2'de 12.2 megapiksel olarak kullanıldı.</li>
	<li>Görüntüyü plakaları içerecek şekilde kırpın, ancak kapakları veya görüntünün arka planındaki herhangi bir şeyi hariç tonuyla kapatın. Kırpılan görüntüyü Fiji-ImageJ'e yükleyin.</li>
	<li>Aşağıdaki komutları kullanarak görüntüyü siyah beyazolarak değiştirin: Resim, Ayarla, Renk Eşiği, Eşik yöntemi: Varsayılan, Eşik rengi: B&W, Eşik alanı: Lab. Koyu arka plan kutusunu seçil. Görüntü şimdi siyah ve beyaz olmalıdır. Siyah ışık arka planı temsil eder ve beyaz mavi metastatik kolonileri temsil eder.</li>
	<li>Fiji-ImageJ araç çubuğundaki Circle aracını kullanarak çözümlenecek alanı seçin. Her plakanın aynı büyüklükteki alan için analiz edildiğinden emin olmak için tüm plakalar için kullanılacak bir daire çizin. Plakaların kenarında görünen arka plan gürültüsünü en aza indirirken plakalar üzerinde analiz edilen alanı en üst düzeye çıkaran bir boyut seçin. Çizildikçe boyut araç çubuğunda görünür, bu nedenle daire çizilirken yüksekliği ve genişliği izleyerek mükemmel bir daire yapmak mümkündür.</li>
	<li>Mavi metastatik kolonilere sahip plakanın alanını temsil eden alanın yüzde kaçının beyaz olduğunu belirlemek için seçili daireyi analiz edin. Aşağıdaki komutları kullanın: Analiz Et, Parçacıkları Analiz Et, Boyut (piksel2):0-Sonsuzluk, Dairesellik: 0.00-1.00, Göster: Hiçbir şey ve Özetle kutusunu işaretleyin. Tamam vur.</li>
	<li>% Alan sonucunu kaydedin. Bu, beyaz olan seçili alanın yüzdesidir ve bu nedenle metastatik yükü temsil eder. NOT: Sonuçları Fiji-ImageJ'de kaydetmeli veya tüm sonuçlar sayfasını ayrı bir belgeye kopyalamak/yapıştırmak önerilir. % Alan sonuçları beklenmeyen veya şüpheliyse, diğer ölçümlerden herhangi birinin de şüpheli olup olmadığını veya % Alanının yanlış kaydedilip kaydedildiğini görmek mümkündür.</li>
	<li>Daireyi, ortasında yakalayarak boyutunu değiştirmeden resimdeki bir sonraki plakaya taşıyın. Resimdeki tüm plakalar için 7.6 ve 7 adımlarını tekrarlayın.</li>
	<li>En az iki görüntü de 7.1 – 7.8 adımlarını tekrarlayın. Tüm plakalar ve görüntüler analiz edildikten sonra, resimler arasındaki tutarsızlıkları azaltmak için her plaka için farklı görüntüler arasındaki % Alan sonuçlarının ortalaması.</li>
</ol>

<ol><li>American Cancer Society. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Facts+%26+Figures%5BTitle%5D)+AND+%22American+Cancer+Society%22%5BJournal%5D)">Cancer Facts & Figures.</a> American Cancer Society. , (2019).</li>
<li>Yousefi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-specific+metastasis+of+breast+cancer%3A+molecular+and+cellular+mechanisms+underlying+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Organ-specific metastasis of breast cancer: molecular and cellular mechanisms underlying lung metastasis.</a> Cellular Oncology. 41 (2), 123-140 (2018).</li>
<li>Pulaski, B. A., Ostrand-Rosenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+4T1+breast+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mouse 4T1 breast tumor model.</a> Current Protocols in Immunology. , Chapter 20, Unit 20.22 (2001).</li>
<li>Pulaski, B. A., Ostrand-Rosenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+established+spontaneous+mammary+carcinoma+metastases+following+immunotherapy+with+major+histocompatibility+complex+class+II+and+B7.1+cell-based+tumor+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Reduction of established spontaneous mammary carcinoma metastases following immunotherapy with major histocompatibility complex class II and B7.1 cell-based tumor vaccines.</a> Cancer Research. 58 (7), 1486-1493 (1998).</li>
<li>Aslakson, C. J., Miller, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+events+in+the+metastatic+process+defined+by+analysis+of+the+sequential+dissemination+of+subpopulations+of+a+mouse+mammary+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Selective events in the metastatic process defined by analysis of the sequential dissemination of subpopulations of a mouse mammary tumor.</a> Cancer Research. 52 (6), 1399-1405 (1992).</li>
<li>Sikpa, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+detection+and+quantification+of+breast+cancer+brain+metastases+in+an+animal+model+using+democratized+machine+learning+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Automated detection and quantification of breast cancer brain metastases in an animal model using democratized machine learning tools.</a> Scientific Reports. 9 (1), 17333(2019).</li>
<li>Valkonen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastasis+detection+from+whole+slide+images+using+local+features+and+random+forests%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Metastasis detection from whole slide images using local features and random forests.</a> Cytometry A. 91 (6), 555-565 (2017).</li>
<li>Coutermarsh-Ott, S. L., Broadway, K. M., Scharf, B. E., Allen, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+VNP20009+and+VNP20009+with+restored+chemotaxis+on+4T1+mouse+mammary+carcinoma+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Effect of Salmonella enterica serovar Typhimurium VNP20009 and VNP20009 with restored chemotaxis on 4T1 mouse mammary carcinoma progression.</a> Oncotarget. 8 (20), 33601-33613 (2017).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>ATCC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A.T.C.C.+4T1+%28ATCC+CRL2539%29+Product+Sheet%5BTitle%5D)+AND+%22ATCC%22%5BJournal%5D)">A.T.C.C. 4T1 (ATCC CRL2539) Product Sheet.</a> ATCC. , (2020).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Gösterildiği gibi, her akciğer plakasındaki metastatik kolonilerin elle sayılması, akciğer metastazının ölçülmesi için yanlış ve kesin olmayan bir yöntem olabilir ve daha iyi bir nicelleştirme aracına ihtiyaç duyulduğunu gösterir(Şekil 2). Histopatolojik analiz, h&e slaytları tüm organın temsili bir örneği olmadığı için hem manuel sayma hem de Fiji-ImageJ analizinden(Şekil 2B ve 4D)biraz farklıydı. Protokol tüm bir akciğer hasat, ve bu nedenle t...

Sekiz kadından biri hayatı boyunca meme kanseri tanısı olacak, ve henüz birden fazla tedavi seçenekleri meme kanseri rağmen Amerikan kadınlarda kansere bağlı ölümlerin ikinci önde gelen nedenidir1. Bu kadınlar memelerindeki primer tümörden ölmüyorlar. Bunun yerine, metastatik yük yaygın akciğer, kemik, beyin, karaciğer ve lenf düğümleri2yayılır gibi bu hastalığın mortalite sorumludur. Bu nedenle, meme kanseri modelleri bu hastalığın mortalitesini azaltmaya katkıda bulunmak için metastazı değerlendirmek gerekir. 4T1 murine meme kanseri modeli bunu başarmak için mükemmel bir protokoldür. Burada açıklanan yöntem, akciğer metastazı ölçmek için Fiji-ImageJ kullanarak 4T1 modeline bir iyileştirme sunarak, tutarlı ve hızlı sonuçlar üretir.
4T1 modeli iyi kurulmuş, bu pulaski ve Ostrand-Rosenberg tarafından açıklanan gibi protokolleri kullanarak en laboratuvarları ile 20013. 4T1 hücre hattı 6-Tiyoguanin (6TG) dirençli ve evre IV temsilcisi, üçlü negatif meme kanseri3,4,5. Bir ortotopik model olduğu gibi klinik olarak ilgilidir ve insan meme kanseri ile aynı organlara kendiliğinden metastaz3,4. 4T1 hücreleri kendiliğinden enjekte edilen hücrelerin miktarına göre öngörülebilir bir oranda metastaz3,4. Daha da önemlisi, burada kullanılan fareler arasındaki genetik farklılıklar metastatik yükte beklenen kişiler arası değişkenliğe neden oldu. Metastazı değerlendirmek için, dokular 6TG seçimi ve metilen mavisi boyama kullanarak uzak bölgelerdeki kanser hücrelerini toplamak ve ölçmek için hasat edilir. Sonuç metastatik kolonileri temsil eden mavi noktalı doku kültürü plakaları topluluğudur. Ancak Pulaski ve Ostrand-Rosenberg protokolü metastatik kolonileri elle sayarak ölçer ve bu nedenle bu modelde metastazı değerlendirmenin standart yolu olmuştur. Bu düşük metastatik yüke sahip dokular için kolay olsa da, akciğerler gibi dokular genellikle metastaz ile yüklü. Akciğer plakaları son derece etkili olabileceğiiçin, metastatik kolonileri manuel sayma ile doğru ve hassas bir şekilde ölçmek zordur ve insan hatasına yatkındır. Metastatik yükü daha iyi ölçmek için, insan sayma hatasına bilgisayar tabanlı bir çözüm için Fiji-ImageJ'i kullanmayı tanımlıyoruz. Hematoksilin ve eozin ile histopatolojik analiz (H & E) boyama akciğer metastazları ölçmek için başka bir araçtır, ve ilginç de Fiji-ImageJ yazılımı ile geliştirilmiştir6,7. Ancak histopatolojik analizler akciğerin tek bir dilimini gözlemlediği için yanlış ve temsiledilemez olabilir. Bunun nedeni, 4T1 modelinin organ boyunca eşit olarak dağıtılmamış çeşitli metastatik lezyonlara neden olmasıdır. Histopatolojik analiz ile manuel sayma arasındaki genel eğilimlerbenzer8 olmakla birlikte, bireysel değerler farklılık gösterir ve bu nedenle histopatolojik analiz tek nicelik aracı olarak kullanılmamalıdır. Fiji-ImageJ kullanmanın tutarlılığını gösterirken, histopatolojik analizve farklı sayaçlar arasındaki manuel sayma tutarsızlıklarına göre faydayı gösteriyoruz. Ayrıca, bu yöntemin kuluçka süresini 10-14 günden 5 güne düşürebileceğini gösteriyoruz, bu da araştırmacıların el ile sayıma güvendiğinizde çalışmalarında elde ettikleri verileri analiz edebildiği anlamına geliyor.
Bu yöntem Pulaski ve Ostrand-Rosenberg protokolü3basit ayarlamalar bir koleksiyondur. 4T1 modeli yaygın olarak kullanıldığından ve akciğer metastazı klinik öncesi modellerde ölçülecek kritik bir parametre olduğu için, bu yöntemin yaygın olarak kullanılabileceğine ve meme kanseri araştırmacıları için son derece değerli olduğuna inanıyoruz. Gerekli sadece ek malzemeleri bir kamera ve Fiji-ImageJ, ücretsiz bir yazılım görüntü analizi9sık kullanılan bir bilgisayara erişim vardır. Bu yöntem özellikle akciğer metastazı üzerinde duruluyor, ancak önemli metastatik yükü olan diğer dokular için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Anestezi odası Yorumlara</td><td>bakın</td><td>Yorumları görün</td><td>Kurumunuzun politikalarında onaylanmış malzemeleri kullanın</td></tr><tr><td>Anestezik ajan</td><td>Yorumları gör</td><td>Yorumlara bakın</td><td>Kurumunuzun politikalarında onaylanmış malzemeleri kullanın</td></tr><tr><td>BALB/c Dişi Fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>000651</td><td></td></tr><tr><td>Kör makas</td><td>Roboz</td><td>RS-6700</td><td></td></tr><tr><td>Hesap Makinesi</td><td>Herhangi Bir</td><td>Kamera</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Herhangi Bir</td><td>En</td><td>az 8 megapiksel</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Herhangi Bir</td><td></td><td>125 x g ve 300 x g</td></tr><tr><td>CO2 ötenazi kurulumu</td> kapasitesine sahip olması gerekir <td>Yorumları gör Yorumları</td><td>gör Yorumları gör</td><td>Kurumunuzun politikalarında yer alan onaylı malzemeleri kullanın</td></tr><tr><td>Soğuk oda, buzdolabı, soğuk hava deposu</td><td>Herhangi Bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fiji-ImageJ Any'li Bilgisayar</td><td>Herhangi</td><td></td> Bir <td>Fiji-ImageJ Sayma Haznesini çalıştırabilmesi gerekiyor</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>02-671-10</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli makas</td><td>Roboz</td><td>RS-5859</td><td></td></tr><tr><td>Damıtılmış su</td><td>Herhangi</td><td>Bir</td><td></td></tr><tr><td>Elastase</td><td>MP Biyomedikal</td><td>100617</td><td></td></tr><tr><td>Elektronik terazi</td><td>Herhangi Bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>R& D Sistemleri</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Roboz</td><td>RS-8100</td><td></td></tr><tr><td>Buz N</td><td>/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kuluçka Makinesi</td><td>Yorumlara</td><td>bakın Yorumlara bakın</td><td>%5 CO2 ve 37 & derece kapasitesine sahip olması gerekir; C</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412SK-4</td><td></td></tr><tr><td>Metilen mavisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>03978-250ML</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin</td><td>ATCC</td><td>30-2300</td><td></td></tr><tr><td>Pimler veya iğneler</td><td>Herhangi Herhangi</td><td></td><td>Nekropsi sırasında fareleri sabitlemek için</td></tr><tr><td>Plastik kaliperler</td><td>VWR</td><td>25729-670</td><td></td></tr><tr><td>RMPI-1640 Orta</td><td>ATCC</td><td>30-2001</td><td></td></tr><tr><td>Külbütör veya döner tekerlek</td><td>Herhangi Bir</td><td>Keskin</td><td></td></tr><tr><td>makas</td><td>Roboz</td><td>RS-6702</td><td></td></tr><tr><td>PES membranlı steril tek kullanımlık filtre</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>568-0010</td><td></td></tr><tr><td>T-150 Şişeler</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-48</td><td></td></tr><tr><td>T-25 Şişeler</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-126-10</td><td></td></tr><tr><td>T-75 Şişeler</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-680-65</td><td></td></tr><tr><td>Üç köşeli plastik beher</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-111F</td><td>Fareleri tartmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Tripan mavisi</td><td>VWR</td><td>97063-702</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>ATCC</td><td>30-2101</td><td></td></tr><tr><td>Tip IV kollajenaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>3,5 cm doku kültürü plakaları</td><td>Nunclon</td><td>153066</td><td></td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>1.7 mL mikrosantrifüj tüpleri</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>10 cm doku kültürü plakaları</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-22</td><td></td></tr><tr><td>12 kuyulu plaka</td><td>Corning</td><td>3512</td><td></td></tr><tr><td>15 mL santrifüj tüpü</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-70C</td><td></td></tr><tr><td>1X Dulbecco'nun Phostphate Tamponlu Tuzlu Suyu (DPBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH30028FS</td><td></td></tr><tr><td>1X Hank' s Dengeli Tuzlu Su Çözeltisi (HBSS)</td><td>Thermo Scientific</td><td>SH3026802</td><td></td></tr><tr><td>27 g 1/2 iğnelerde</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-48</td><td></td></tr><tr><td>4T1 (ATCC&reg; CRL&utangaç; 2539&ticaret;)</td><td>ATCC</td><td>CRL-2539</td><td></td></tr><tr><td>50 mL santrifüj tüpü</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>6-Tiyoguanin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4882</td><td></td></tr><tr><td>70 & mu; M hücre süzgeci</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>%70 etanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E7023</td><td>DI su ile %70'e seyreltin</td></tr></tbody></table>

4t1 meme kanseri modelinde akciğer metastazının nicelleştirilmesini geliştirmek için bilgisayar tabanlı görüntü analizinin kullanılması

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

Meme kanseri yıkıcı bir malignitedir, sadece 2019 yılında ABD'de 40.000 kadın ölümü ve yeni kadın kanseri teşhislerinin %30'u için hesap. Meme kanserine bağlı ölümlerin önde gelen nedeni metastatik yüktür. Bu nedenle meme kanseri için preklinik modellerin klinik olarak ilgili olması için metastatik yükü analiz etmesi gerekir. 4T1 meme kanseri modeli evre IV insan meme kanseri için kendiliğinden metastaz, ölçülebilir fare modeli sağlar. Ancak, çoğu 4T1 protokolleri doku kültür plakaları üzerinde el ile lekeli koloniler sayarak metastatik yükü ölçmek. Bu düşük metastatik yüke sahip dokular için yeterli olmakla birlikte, manuel sayma insan hatası plakalar confluent ve saymak zor olduğunda tutarsız ve değişken sonuçlara neden olur. Bu yöntem, insan sayma hatasına bilgisayar tabanlı bir çözüm sunar. Burada protokolü 4T1 modelinde yüksek metastatik bir doku olan akciğer kullanılarak değerlendiriyoruz. Metilen mavisi lekeli plakaların görüntüleri elde edilir ve Fiji-ImageJ analiz için yüklenir. Fiji-ImageJ daha sonra mavi olan görüntünün seçili alanının yüzdesini belirler ve plakanın metastatik yüke sahip yüzdesini temsil eder. Bu bilgisayar tabanlı yaklaşım, yüksek metastatik dokular için manuel sayma veya histopatolojik değerlendirmeden daha tutarlı ve hızlı sonuçlar sunar. Fiji-ImageJ sonuçlarının tutarlılığı görüntünün kalitesine bağlıdır. Görüntüler arasında sonuçlarda küçük farklılıklar oluşabilir, bu nedenle birden çok görüntü alınması ve sonuçların ortalaması önerilir. En az sınırlamalara rağmen, bu yöntem tutarlı ve hızlı sonuçlar sunarak akciğerdeki metastatik yükü ölçmek için bir gelişmedir.

Bu yöntem Pulaski ve Ostrand-Rosenberg 4T1 protokol3'ten basit ayarlamalar içerir ve Şekil 1'degörselleştirilebilir. 3 ayrı araştırmacı 12 akciğer plakası (1:10 seyreltme) için metastatik kolonileri elle saydıklarında, sonuçlar farklı sayaçlar arasında çok tutarsızdı(Şekil 2A). Tüm araştırmacılar "mavi nokta olarak görünen metastatik kolonileri saymak" için yönlendirildi, ancak tutarsızlıklar el ile yüksek metastatik plakalar sayma ile so...

Biz Fiji-ImageJ kullanarak 4T1 meme kanseri modelinde akciğer metastazı ölçmek için daha tutarlı ve hızlı bir yöntem açıklar.

4T1 Meme Kanseri Modelinde Akciğer Metastazının Nicelleştirilmesini Geliştirmek Için Bilgisayar Tabanlı Görüntü Analizinin Kullanılması

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Bu protokol, meme kanserine bağlı ölümün agresif ve yaygın bir nedeni olan akciğer metastazını klinik öncesi meme kanseri modelinde artan hassasiyet ve verimlilikle ölçer. Orijinal teknikle karşılaştırıldığında, bu protokol araştırmacılara daha hızlı ve tutarlı sonuçlar verir. Kullanımı kolay bilgisayar teknolojisi ile insan sayma hatasını hafifletir.Bu teknik, meme kanseri tedavilerinin akciğer metastazı üzerindeki etkilerini araştıran klinik öncesi araştırmalara, araştırmacıların başarılı tedavi sonrasında azalmış metastatik yük göstermelerine izin vererek kesinlikle genişletilebilir. Doku örneği için 15 mililitrelik konik tüp etiketleyerek başlayın. Sonra tüp tip dört kollajenaz karışımı ve 30 adet elastaz 2.5 mililitre ekleyin.Temiz bir 1X HBSS iyi akciğer taşıyın ve kalan kan kaldırmak için forceps ile girdap, sonra boş bir 3.5 santimetre doku kültür plakasına aktarın. Makasla akciğeri doğraın, sonra 2,5 mililitre HBSS ile durulayın ve hbss'yi akciğer parçalarıyla kollajenaz ve elastaz kokteyli ile hazırlanmış 15 mililitrelik konik tüpe aktarın. Tüpü bir rocker veya dönen tekerlek üzerinde 4 santigrat derecede 75 dakika kuluçkaya yatırın.Bu arada, etiket bir 50 mililitre santrifüj tüp ve her fare için bir 10 santimetre doku kültür plakası. Bir seyreltme yapıyorsanız, seyreltmeler için yeterli doku kültürü plakaları etiket. 1X HBSS ile 10 mililitreye kadar tüpün hacmini getirin, ardından içindekileri 50 mililitrelik konik tüpe 70 mikrometrelik bir süzgeç üzerine dökün.Numuneyi süzgeçten hafifçe öğütmek için bir mililitrelik şırınganın pistonunu kullanın. Tüpü 350 kez G'de beş dakika santrifüj edin ve süpernatantı atın, sonra peleti 1X HBSS'nin 10 mililitresi ile iki kez yıkayın. 60 mikromolar 6-thioguanin tam kültür medya 10 mililitre pelet resuspend ve istenirse bir seyreltme düzeni kullanarak 10 santimetre hücre kültür plakaları örnekleri plaka.Plakaları 37 santigrat derecede ve %5 karbondioksitle beş gün boyunca kuluçkaya yatırın. Uygun atık kabına plakalardan kültür ortamı dökün. Hücreleri düzeltmek için, her plaka ya seyreltilmemiş metanol beş mililitre ekleyin ve oda sıcaklığında beş dakika kuluçka, tüm plaka yıkaplar böylece metanol girdap emin olun.Uygun atık kabına plakalar kapalı metanol dökün, sonra distile su beş mililitre ile her plaka durulayın. Plaka başına% 0.03 metilen mavisi beş mililitre ekleyin ve oda sıcaklığında beş dakika kuluçka, metilen mavisi çözeltisi girdap emin böylece tüm plaka kapsar. Uygun atık kabına metilen mavisi dökün ve her plakayı beş mililitre distile suyla tekrar durulayın.Tabağı ters çevirin ve fazla sıvıyı çıkarmak için kağıt havluya doğru temizleyin. Tabağı kapağına yerleştirin ve bir gecede havanın kurumasına izin verin. Metastatik koloniler mavi olacak.Tabaklar kuruduktan sonra oda sıcaklığında süresiz olarak saklanabilir. Etiketli kapakları plakalardan çıkarın ve numunelerin net bir şekilde tanımlanmasını sağlamaya özen tinleyin. Tüm lekeli akciğer plakalarını temiz ve aydınlık bir yüzeye yerleştirin.Yansımaları en aza indirmek için emin olmak, iyi aydınlatılmış bir alanda plaka koleksiyonu bir resim çekmek. Plakalardaki yansımalar görüntü analizini etkileyecek ve kaçınılmalıdır. Çekilen fotoğraflara çok dikkat edin ve çeşitli açılardan birkaç fotoğraf çekin.Plakaları fotoğrafladıktan sonra, kapakları veya arka plandaki herhangi bir şeyi dışlamak için görüntüyü kırpın. Fiji ImageJ'deki resmi açın ve görüntüyü tıklatarak, ayarlayarak ve renk eşiğine tıklayarak siyah beyaz olarak değiştirin. Ardından eşik yöntemi için varsayılan, eşik rengi için siyah ve beyaz ve renk alanı için laboratuar'ı seçin.Koyu arka plan kutusunun seçilmediğinden emin olun. Görüntü şimdi siyah ve beyaz olmalıdır. Siyah ışık arka planı temsil eder ve beyaz mavi metastatik kolonileri temsil eder.Çözümlenecek alanı seçmek için daire aracını kullanın. Her plakanın aynı büyüklükteki alan için analiz edildiğinden emin olmak için tüm plakalar için kullanılacak bir daire çizin. Plakaların kenarında görünen arka plan gürültüsünü en aza indirirken plakalar üzerinde analiz edilen alanı en üst düzeye çıkaran bir boyut seçin.Boyut çizilirken araç çubuğunda görünür. Beyaz alan yüzdesini belirlemek için seçili daireyi çözümle. Parçacıkları analiz etmek ve analiz etmek için tıklayın, sonra boyut için sıfırdan sonsuza, dairesellik için sıfırdan bire ve gösterilecek hiçbir şey seçmeyin.Özetlenmiş kutuyu işaretleyin ve tamam tuşuna basın. Daireyi merkeze alarak resimdeki bir sonraki plakaya taşıyın ve analizi tekrarlayın. Sonucu kopyalayıp elektronik tabloya yapıştırın.Seçilen alanın beyaz yüzdesi olan yüzde alanı, metastatik yükü temsil eder. Tüm plakalar ve görüntüler analiz edildikten sonra, resimler arasındaki tutarsızlıkları azaltmak için her plaka için farklı görüntüler arasındaki yüzde alan sonuçlarının ortalamasını alın. Fiji ImageJ analizi manuel sayma ve histopatolojik analiz ile karşılaştırıldı.Üç ayrı araştırmacı metastatik kolonileri elle saydıklarında, sonuçlar sayaçlar arasında tutarsızdı. Fiji ImageJ sonuçları, üç görüntünün her biri için sayaçlar arasında tutarlıydı. Üç görüntü ve üç sayaç sonuçları her akciğer plakası için birleştirildi.Sonuçlar, sayaçlar arasında tutarlı sonuçlar sağlayan görüntüler arasındaki varyasyonları hesaba katmak için her plaka için ortalama olarak hesaplanmıştır. Plakaları en fazla metastatikten en az metastatik olarak sıralarken, manuel sayma en uyumlu plaka üzerinde anlaştı ama aşağıdaki tüm sıralamalar tutarsızdı. Ortalama Fiji ImageJ sonuçlarından safları sayaçları arasında çok daha tutarlı idi.Görüntülerde yansımaları kaçınarak önemini göstermek için, bir el yansıması ve sonraki Fiji ImageJ analizi ile bir görüntü yansıması olmadan aynı plaka bir görüntü ile birlikte gösterilir. Kirli bir arka plan yüzeyinden gelen koyu lekeler veya plakalar üzerindeki kan örneği kalıntısı da Fiji ImageJ analizini olumsuz etkileyebilir. Bu kan tabakasında sadece iki metastatik koloni vardır ancak karanlık kalıntı Fiji ImageJ'in bunu %31.6 metastatik olarak düşünmesine neden olmuştur.Bu protokolü denerken, yansıma için resimleri dikkatle incelemeyi unutmayın, görüntüdeki her plaka için aynı boyut çemberini kullanın ve her plakanın sonuçlarını en az üç ayrı görüntü arasında ortalama olarak kullanın.

using-computer-based-image-analysis-to-improve-quantification-lung

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu protokol fare akciğer dokusu içindeki metastazı temsil tümör hücre spesifik mRNA tespit etmek için kantitatif gerçek zamanlı PCR (QRT-PCR) nasıl kullanılacağı açıklanır.

Kantitatif gerçek zamanlı PCR ile fare meme tümör modellerinde akciğer metastazı Değerlendirilmesi

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Burada, kanser metastazında pulmoner alveoler makrofajların fonksiyonlarını incelemek için model ve yaklaşımı açıklıyoruz. Bu hücrelerin metastazdaki rolünü göstermek için, alveolar makrofajın klodronat lipozomlarla tükenmesi ile birlikte meme kanserinin sinjenik (4T1) modeli kullanıldı.

Meme Kanseri Metastaz alveoler makrofajlar Rolü incelenmesi

Bu makalede, pulmoner metastaz tahlil (PuMA) Protokolü'nün ayrıntılı bir açıklama sağlamak için hedeftir. Bu model araştırmacılar metastatik osteosarkom (OS) hücre büyümesini widefield floresan veya confocal mikroskop lazer tarama kullanarak akciğer dokusunda çalışmaya izin verir.

Metastatik akciğer kolonizasyon pulmoner metastaz tahlil kullanarak osteosarkom içinde eğitim pratik düşünceler

Biz kanseri metastaz preklinik vivo içinde takibi için bir iletişim kuralı tanımlamak. Non-invaziv [18F] tetrafluoroborate-evde beslenen hayvan ve aerodinamik ex vivo onay floresan bir protein tarafından algılanan sodyum iyodür simporter birleştiren bir radyonüklid Floresans muhabir dayanmaktadır. Preklinik in vivo hücre tümör biyolojisi izleme için uygun bir yöntemdir.

Kemirgen tümör modelleri ilerlemesinde tümör izlemek için Imaging radyonüklid Floresans muhabir gen

Bu protokol için biz [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose pozitron emisyon tomografisi ve bilgisayarlı tomografi (18F-FDG PET/BT) tümör metabolik yanıt hedefe yönelik tedavi MLN0128 bir olarak ölçmek için görüntüleme nasıl tarif KRAS/Lkb1 mutant fare model akciğer kanseri ve düşsel yüksek çözünürlüklü ex vivo autoradiography ve nicel Histoloji ile birleştiğinde.

18F-FDG PET/BT görüntüleme ve nicel Histoloji glikoz metabolizması akciğer kanserinin fare modellerinde dinamik değişiklikleri ölçmek için kullanmak

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Açıklanan yaklaşım, akciğerlerdeki metastaz sayısı ve boyutunun ölçülmesine ek olarak meme kanseri metastazı oluşumunun ve büyümesinin gerçek zamanlı olarak izlenmesine olanak sağlamak için deneysel kuyruk ven metastazı tahlillerini in vivo canlı hayvan görüntülemeile birleştirir.

Kuyruk Ven Metastaz Tahlilleri ve Gerçek Zamanlı Vivo Görüntüleme Kombine Kullanımı Meme Kanseri Metastatik Kolonizasyon ve Yük Akciğerlerde Quantify için

Kanser hücrelerinin intravenöz enjeksiyonu genellikle metastaz araştırmalarında kullanılır, ancak metastatik tümör yükünü analiz etmek zor olabilir. Burada, metastazın kuyruk damarı enjeksiyon modelini gösteriyoruz ve ortaya çıkan metastatik akciğer tümörü yükünü analiz etmek için yeni bir yaklaşım içeriyoruz.

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş inflamatuar meme kanseri hücre hattının kuyruk damarı enjeksiyonu yoluyla üretilen meme kanseri beyin metastazının bir ksenogreft fare modelini tanımladık.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

El yazması, ortotopik olarak enjekte edilen meme tümörlerinden spontan akciğer metastazının kurulması ve uzunlamasına büyüme izlemesi için metastatik kaskadının tüm aşamalarında müdahaleye uygun bir metodolojiyi açıklamaktadır.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Keşfedin meme kanserinde akciğer metastazının nicelleştirilmesi için bilgisayar tabanlı görüntü analizi yöntemini. Bu protokol Fiji-ImageJ kullanarak daha hızlı ve tutarlı sonuçlar sağlar.

4T1 Meme Kanseri Modelinde Akciğer Metastazının Nicelleştirilmesini Geliştirmek Için Bilgisayar Tabanlı Görüntü Analizinin Kullanılması (Video) | JoVE Journal

4T1 Meme Kanseri Modelinde Akciğer Metastazının Nicelleştirilmesini Geliştirmek Için Bilgisayar Tabanlı Görüntü Analizinin Kullanılması

Daha fazla video keşfet