Name: Farelerden Birincil Adaçik Ve Birincil Pankreas Asinar Hücrelerinin Eşzamanlı İzolasyonu İçin Basit ve Hızlı Bir Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: Öğrenin, farelerden birincil adaçik ve pankreas asinar hücrelerini eşzamanlı izole etmek için basit ve hızlı bir yöntemi. Bu teknik, diyabet patogenezi ve hücreler arası iletişim çalışmaları için değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Manrai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+as+a+consequence+of+acute+severe+pancreatitis%3A+unraveling+the+mystery%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus as a consequence of acute severe pancreatitis: unraveling the mystery.</a> World J Diabetes. 14 (8), 1212-1225 (2023).</li>
<li>García-Compeán, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-acute+pancreatitis+diabetes%3A+a+complication+waiting+for+more+recognition+and+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Post-acute pancreatitis diabetes: a complication waiting for more recognition and understanding.</a> World J Gastroenterol. 29 (28), 4405-4415 (2023).</li>
<li>Shen, H. N., Yang, C. C., Chang, Y. H., Lu, C. L., Li, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+diabetes+mellitus+after+first-attack+acute+pancreatitis%3A+a+national+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Risk of diabetes mellitus after first-attack acute pancreatitis: a national population-based study.</a> Am J Gastroenterol. 110 (12), 1698-1706 (2015).</li>
<li>Hohmeier, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+INS-1-derived+cell+lines+with+robust+ATP-sensitive+K%E2%81%BA+channel-dependent+and+-independent+glucose-stimulated+insulin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Isolation of INS-1-derived cell lines with robust ATP-sensitive K⁺ channel-dependent and -independent glucose-stimulated insulin secretion.</a> Diabetes. 49 (3), 424-430 (2000).</li>
<li>Hohmeier, H. E., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from pancreatic islets.</a> Mol Cell Endocrinol. 228 (1-2), 121-128 (2004).</li>
<li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> J Vis Exp. (88), e50374(2014).</li>
<li>Villarreal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-efficiency+protocol+for+pancreatic+islet+isolation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple high-efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice.</a> J Vis Exp. (150), e57048(2019).</li>
<li>Huang, C., Gu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+isolation+of+functional+islets+from+neonatal+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Effective isolation of functional islets from neonatal mouse pancreas.</a> J Vis Exp. (119), e55160(2017).</li>
<li>Petrov, M. S., Yadav, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+and+holistic+prevention+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology and holistic prevention of pancreatitis.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (3), 175-184 (2019).</li>
<li>Xiao, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+and+mortality+of+pancreatic+diseases%3A+a+systematic+review%2C+meta-analysis%2C+and+meta-regression+of+population-based+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global incidence and mortality of pancreatic diseases: a systematic review, meta-analysis, and meta-regression of population-based cohort studies.</a> Lancet Gastroenterol Hepatol. 1 (1), 45-55 (2016).</li>
<li>Sendler, M., Weiss, F. U., Golchert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+B-mediated+activation+of+trypsinogen+in+endocytosing+macrophages+increases+severity+of+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Cathepsin B-mediated activation of trypsinogen in endocytosing macrophages increases severity of pancreatitis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (3), 704-718.e10 (2018).</li>
<li>Modenbach, J. M., Möller, C., Asgarbeik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+analyses+of+cystatin-C+dimers+and+cathepsin-B+reveals+a+trypsin-driven+feedback+mechanism+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Biochemical analyses of cystatin-C dimers and cathepsin-B reveals a trypsin-driven feedback mechanism in acute pancreatitis.</a> Nat Commun. 16 (1), 1702(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.22 &mu; m filtresi</td><td>Millex</td><td>SLGPR33RB</td><td>Hazırlanan kollagenaz P çözeltisini filtreleyin</td></tr><tr><td>0,25 M Kalsiyum klorür (steril)</td><td>Beyotime</td><td>ST365</td><td>İnsülin salgılanmasını aktive etmek için kalsiyuma bağımlı sinyal yolu</td></tr><tr><td>1 ml şırınga</td><td>Jierui</td><td>10084692516405</td><td>Pankreas dokusuna kollagenaz P perfüzyonu için kullanılır.</td></tr><tr><td>%1,25 tribromoetanol çözeltisi</td><td>Pekin Yosida Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.</td><td>JT0781</td><td>Anestezi</td></tr><tr><td>1.5 mL Santrifüj Tüpü</td><td>Eppendorf</td><td>30121589</td><td>Santrifüj ve depolama için hücre süpernatantını toplayın.</td></tr><tr><td>1x Hank' s dengeli tuz çözeltisi</td><td>Biosharp</td><td>BL561A</td><td>Kollagenaz P çözeltisini hazırlayın ve pankreas dokusunu durulayın</td></tr><tr><td>12 kuyruklu hücre kültür plakası</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3921</td><td>Pankreas dokusunu ve kültürden çıkarılan asinar alın</td></tr><tr><td>15 mL santrifüj tüpü</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-15A</td><td>Deney sırasında tutma çözümleri</td></tr><tr><td>24-kuyu hücre kültür plakası</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3922</td><td>Çıkarılan adacıqları kültürle yetiştirin</td></tr><tr><td>40-mesh&nbsp; Elekten</td><td>Weidan Enstrümanları</td><td>Yok</td><td>Pankreas dokusunu filtrele</td></tr><tr><td>5 mL Pasteur pipeti</td><td>Biosharp</td><td>BS-XG-03L</td><td>Sıvıların pipetlenmesi ve pankreas dokusunun fiziksel olarak bozulması</td></tr><tr><td>50 mL santrifüj tüpü</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-50A</td><td>Deney sırasında çözeltileri tutmak, dokuları tutmak ve santrifüjlemek</td></tr><tr><td>60 mm hücre kültürü çanakları</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>12211</td><td>Kolay toplama için adacikleri içeren kültür ortamı için bir konteyner</td></tr><tr><td>%75 etanol çözeltisi</td><td>HYNAUT</td><td>Yok</td><td>Fareleri dezenfeksiyon için ıslatın.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 2023</td><td>Adobe Inc.</td><td>Yok</td><td>Görüntüler oluşturun.</td></tr><tr><td>Beckman Allegra X-12/X-12R Santrifüj</td><td>BECKMAN</td><td>Allegra X-12/X-12R</td><td>Santrifüj</td></tr><tr><td>Sığır serum albümini (BSA)-V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td>Adacığın normal fizyolojik işlevini koruyun ve (bunu) farklı konsantrasyonlarda glikoz çözeltileri hazırlamak için kullanın.</td></tr><tr><td>C57BL/6J fareleri, SPF sınıfı, 6&ntir; 8 haftalık, 18 kilo ve dash; 25 g</td><td>Deniz Tıp Üniversitesi Laboratuvar Hayvan Merkezi&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kalsein/PI Hücre Yaşamlılığı ve Sitotoksisite Testi Kiti</td><td>Beyotime</td><td>C2015L</td><td>Canlı ve ölü hücrelerin aynı anda Kalsein-(Kalsein) ve Propidium iyodid (PI) çift floresans boyama yöntemiyle hayvan hücrelerinin canlılığını ve sitotoksisitesini tespit etmek.</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür (susuz olan)</td><td>Sangon Biyoteknoloji</td><td>10043-52-4</td><td>Kollagenaz P çözeltisini hazırlayın</td></tr><tr><td>Hücre süzgeci (100 &mu; m)</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-XBS</td><td>Asinar hücrelerin filtrelenmesi</td></tr><tr><td>Kollagenaz P</td><td>Sigma</td><td>11213857001</td><td>Pankreas dokusunu sindir</td></tr><tr><td>D-(+)-Glikoz çözeltisi (%20, steril)</td><td>Beyotime</td><td>ST491</td><td>Adacıklardan insülin salgılanmasını uyar.</td></tr><tr><td>DMEM temel (1 kat) (Dulbecco' s modifiye kartal orta)</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Kültür asinar hücreleri</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>Biowest</td><td>S140B-500</td><td>Kültür ortamını hazırlayın</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque PREMIUM steril çözelti</td><td>Cytiva</td><td>17544203</td><td>yoğunluk gradyan tabakası için yoğunluk gradyan ortamı</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0.1</td><td>GraphPad Yazılımı, LLC</td><td>Yok</td><td>Görüntüler oluşturun ve istatistiksel analiz yapın.</td></tr><tr><td>HEPES çözeltisi (1 M)</td><td>Biosharp</td><td>BL1061A</td><td>Kollagenaz P çözeltisini hazırlayın</td></tr><tr><td>Yüksek hızlı/soğutmalı santrifüj</td><td>Sigma</td><td>3K15</td><td>Santrifüj</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Ulusal Sağlık Enstitüleri Optik ve Hesaplamalı Enstrümantasyon Laboratuvarı (LOCI)</td><td>Yok</td><td>Hücre floresans görüntülerini analiz edin ve hücre canlılığını hesaplayın.</td></tr><tr><td>Ters Biyolojik Mikroskop</td><td>Leica</td><td>Yok</td><td>Hücre morfolojisini gözlemleyin ve adacıqları seçin.</td></tr><tr><td>Ters floresans mikroskobu</td><td>OLYMPUS</td><td>IX73</td><td>Hücresel floresan sinyalleri gözlemleyin ve floresan görüntüler yakalayın.</td></tr><tr><td>Krebs-Ringer bikarbonat HEPES tamponu</td><td>LEAGENE</td><td>CZ0103</td><td>Adacığın normal fizyolojik işlevini koruyun ve (bunu) farklı konsantrasyonlarda glikoz çözeltileri hazırlamak için kullanın.</td></tr><tr><td>Fare INS (İnsülin) ELISA Kiti</td><td>Wuhan İnce Biyoteknoloji A.Ş., Ltd.</td><td>EM0260</td><td>Adacıkların insülin salgılanma seviyesini tespit edin.</td></tr><tr><td>Oftalmik forseps (10 cm, kanca ile kavisli)</td><td>Qingyi Tıbbi Cihazları</td><td>Yok</td><td>Diseksiyona yardım edin</td></tr><tr><td>Oftalmik penseps (10 cm, dişli ile düz)</td><td>Qingyi Tıbbi Cihazları</td><td>Yok</td><td>Pankreas dokusunun diseksiyonu ve ani ayrılması ile pankreas dokusunun çıkarılmasında yardımcı olmak</td></tr><tr><td>Penisilin streptomisin çözeltisi</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Kontaminasyonu önlemek için kültür ortamını hazırlayın</td></tr><tr><td>RPMI-1640 orta,</td><td>KeyGEN BioTECH</td><td>KGL1501-500</td><td>Kollajenaz P sindirim çözeltisini sonlandırın ve adacıqları kültürleyin</td></tr><tr><td>Glycine max'ten (soya fasulyesi) tripsin inhibitörü</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>Kollagenaz P çözeltisini hazırlayın</td></tr><tr><td>Cerrahi makas (10 cm, düz sivri)</td><td>Qingyi Tıbbi Cihazları</td><td>Yok</td><td>Anatomide yardım ve pankreas dokusunu küçük parçalara ayırmak</td></tr><tr><td>Su Banyosu</td><td>OAICLAB</td><td>AH-HF</td><td>Sindirim sıcaklığını koruyun.</td></tr><tr><td>&alpha;-amilaza ve &beta;-amilaza aktivite test kiti</td><td>Elabscience</td><td>E-BC-K006-M</td><td>Farklı koşullarda asinar hücrelerin salgıladığı amilazın seviyelerini tespit edin</td></tr></tbody></table>

farelerden birincil adaçik ve birincil pankreas asinar hücrelerinin eşzamanlı İzolasyonu İçin basit ve hızlı bir yöntem

A Simple and Rapid Method for Simultaneous Isolation of Primary Islets and Primary Pancreatic Acinar Cells from Mice

Farelerden Birincil Adaçik Ve Birincil Pankreas Asinar Hücrelerinin Eşzamanlı İzolasyonu İçin Basit ve Hızlı Bir Yöntem

In the research on the pathogenesis of post-acute pancreatitis diabetes mellitus (PPDM-A), abnormal bidirectional communication between pancreatic acinar ...

a-simple-rapid-method-for-simultaneous-isolation-primary-islets

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Fare adacık izolasyon ayrıntılı bir açıklaması kolajenaz nötr proteaz ve saflaştırılmış bir bileşimi in situ pankreatik kanal kanülasyon ve perfüzyon tekniği kullanılarak tarif edilir.

Langerhans İzolasyonu Fare Islet Saflaştırılmış Collagenase ve Nötr Proteaz bir kombinasyonu kullanılarak

Bu videoda, çeşitli sindirim enzimleri içeren pankreas asiner hücrelerini (ekzokrin hücreler) izole etmek için kullanılan teknik açıklanmaktadır. Primer asiner hücreler, pankreas kanseri gelişiminde erken bir olay olan asinar-duktal metaplazinin (ADM) ex vivo çalışmasında faydalıdır.

Primer Acinar Hücre İzolasyonu: Acinar Hücreleri Fare Pankreasından İzole Etmek İçin Bir Yöntem

Langerhans Adacıkları olarak da adlandırılan pankreas adacıkları, glikoz regülasyonu ve diğer önemli biyolojik işlevler için hormonlar üreten bir endokrin hücre kümesidir. Bu protokol, ekzokrin pankreas dokusunu sindirmek için önce Ampulla of Vater yoluyla kollajenaz perfüze ederek pankreas adacıklarını izole etmek için bir yöntemi ve adacıkları farelerden saflaştırmak için basitleştirilmiş bir yoğunluk gradyan santrifüjünü açıklar.

Kollajenaz Perfüzyonu ile Pankreas Adacıkları İzolasyonu: Pankreas Adacığı Hücrelerini İzole Etmek İçin Enzimatik Bir Yöntem

Langerhans adacıkları izole edilmiş fare kullanılarak in vitro β-hücre fonksiyonu denenmesi diyabet patofizyolojisi ve terapötik çalışmada önemli bir bileşenidir. Çok sayıda alt-uygulama mevcut olmakla birlikte, bu protokol, spesifik olarak β-hücresi fonksiyonunu belirleyen önemli bir parametre olarak hücre içi siklik adenozin monofosfat (cAMP) ölçümünü açıklamaktadır.

Fare Pankreas Adacık İzolasyonu ve hücre içi cAMP Belirlenmesi için Bir Yöntem

Bu yayında, böylece yalıtma ve sıçangil pankreas kültür birincil pankreatik acinar hücreleri için bir hızlı ve uygun bir prosedürü açıklar. Bu yöntem taze birincil dönüştürülmemiş / Normal ekzokrin pankreas hücrelerinin fizyolojisi incelemek için değerli bir yaklaşım oluşturmaktadır.

Fare Primer Pankreas Asiner Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Burada, tip 2 diyabetin fare modelinden adacıkların izolasyonu için bir protokol, Leprdb ve 2 foton mikroskobu kullanan sağlam adacıklardan insülin sekresyonunun ölçümü için bir canlı hücre testinin ayrıntılarını sunuyoruz.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Tip 2 Diyabet Fare Modeli: Bozulmamış Islets Of Pankreas Adacık İzolasyonu ve Canlı hücre 2-Foton Görüntüleme

Neonatal farelerden sağlam adacıklar izole edilmesi için bu tarifnamede, bir protokol açıklar. Pancreata kısmen yıkama ve elle toplama ile, ardından kollajenaz ile sindirilir. 20-80 adacık kümeleri birkaç adacık çalışmalar için uygun yeni doğan farelerin, gelen pankreas başına elde edilebilir.

Yenidoğan Fare Pankreas gelen Fonksiyonel Adacık etkili İzolasyonu

Bu adacık izolasyon protokolü ekroz dokuyu sindirmek için kollajenaz enjeksiyonunun yeni bir rotasını ve adacıkları farelerden arındırmak için basitleştirilmiş bir degrade prosedürünü tanımlamıştır. Enzimatik sindirim, degrade ayırma/arıtma ve adacık el toplama içerir. Başarılı yalıtım fare başına 250-350 yüksek kaliteli ve tam işlevsel adacıklar verebilir.

Farelerden Pankreas Adacık İzolasyon için Basit Bir Yüksek Verimlilik Protokolü

Burada potansiyel diyabetojenik xenobiotic kimyasallar tanımlamak için xenobiotics tarafından ROS indüksiyon süzmek için fare pankreas adacık hücreleri izole etmek için bir iletişim kuralı mevcut.

Bir fare pankreas adacık hücre tabanlı tarama diyabetojenik çevresel kimyasallar için

Burada, pankreas adacık hücreleri gibi heterojen hücre popülasyonlarında kalsiyum dinamiğinin görüntülenmesi ve ölçülmesi için bir protokol saklıyız. Floresan muhabirler adacık içindeki hücrelerin periferik tabakasına teslim edilir, daha sonra hareketsiz hale getirilir ve görüntülenir ve floresan yoğunluğunun dinamiğinin hücre başına analizi yapılır.

Fare Pankreas Adacık Hücrelerinin Alt Popülasyonlarında Görüntüleme Kalsiyum Dinamiği

Bu protokol, Lewis sıçan pankreas adacıqlarının cerrahi hasamı, enzimatik sindirim ve yoğunluk gradyanlı arındırması için standartlaştırılmış bir yöntemi tanımlar; böylece doğrudan nakil veya in vitro çalışmalarda kullanılmak üzere yüksek verimli, yüksek saflıkta preparatlar sağlanır.

Lewis Farelerinden Pankreas Adacığı İzolyasyonu ve Arındırma, Enzimatik Sindirim ve Yoğunluk-Gradient Ayrımı Kullanılarak

Öğrenin, farelerden birincil adaçik ve pankreas asinar hücrelerini eşzamanlı izole etmek için basit ve hızlı bir yöntemi. Bu teknik, diyabet patogenezi ve hücreler arası iletişim çalışmaları için değerli bir araç sunar.

Farelerden Birincil Adaçik Ve Birincil Pankreas Asinar Hücrelerinin Eşzamanlı İzolasyonu İçin Basit ve Hızlı Bir Yöntem

Daha fazla video keşfet