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Environmental Microbiology

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革兰氏染色的细菌环境来源

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革兰氏染色允许快速可视化的细菌形态和种类繁多的环境样品的广泛细胞区别。染色细菌,均匀的涂抹是适用于玻璃的一面并使其干燥。热固涂片后, 结晶紫被应用。

脱色漂洗结晶紫从革兰氏阴性菌细胞,但不是革兰阳性细胞。第二次的染料,通常蕃,作为背景染色用于可视化革兰氏阴性菌细胞。一旦沾上,细胞可以评估为细胞形态、 大小和安排,如链或集群。

这个视频将演示如何编写环境样品,分离细菌物种发现其中,和对孤立的殖民地执行一种革兰氏染色

革兰氏染色允许广泛的结构分成两大部分细菌的分类: 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。虽然这两个类有潜在的磷脂质膜,细胞的壁的结构差别很大。革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖,是一种聚合物由糖和氨基酸组成的厚厚一层组成。革兰氏阴性菌细胞壁有肽聚糖,夹在第二次的脂质膜薄层。这外膜通常包含脂多糖。

带正电的结晶紫弱将绑定到-带负电的细菌细胞壁。克的碘形成不溶性的复合物与结晶紫染料,从而将其固定在细胞壁。

在脱色的步骤中,肽聚糖在革兰氏阳性细胞脱水,使其合同和陷阱结晶紫-碘复合物。在革兰氏阴性菌细胞中,脱色剂妥协的外膜,其气孔率的增加。这允许结晶紫-碘复合物被冲走。

现在你明白背后革兰氏染色的土壤细菌的原则,让我们看看在土壤细菌在实验室中执行的过程。

收集工作中的土壤样品之后, 把它带到实验室进行分析。用筛子,细化样品和权衡使用分析天平被筛土 10g。

样本的稀释到 95 毫升的磷酸盐缓冲液中,涡旋混合。执行另外 1 到 10 的稀释液,旋涡之间每个稀释。转让的至少 3 连续稀释,复制低营养琼脂糖盘子整除的数。

后乙醇火焰灭菌和冷却一根弯曲的玻璃棒攻到媒体,样品表面蔓延的板块。孵化在室温板。酝酿 3 至 5 天之后, 选择 30 到 300 离散殖民地最高稀释。无菌的接种环,选择隔离感兴趣的殖民地。

上一条新鲜的板殖民地的条纹。消毒条纹之间的回路,使连续条纹在之字形格局到板,以便随后的离散的单个菌落分离的每个部分。1 到 2 天在室温下孵育板。

要开始细菌涂片的制备,将附加到预清洗的玻璃幻灯片,操作简单方便的剪辑。为每个细菌涂片,清洗和火焰灭菌接种的循环。2 loopfuls 的无菌蒸馏水将放置幻灯片的中心。

后灭菌循环,再次,从孤立的殖民地,取出少量的文化并在幻灯片上水融合在一起。它是重要冷却循环再利用琼脂细胞壁主要的部分多次接触文化。涂片应类似于稀释的牛奶。让幻灯片在室温下晾干。干燥后,热修复涂片快速穿过火焰。

一旦干,吸管上涂片、 结晶紫,让坐 2-3 分钟仔细冲洗幻灯片用蒸馏水,目标是在直接的交流,朝向顶端的幻灯片上,让水轻轻地流下来。目的不是直接在涂片水流。

盖克的碘的幻灯片。2 分钟后轻轻地洗净用蒸馏水。脱色用 95%乙醇幻灯片,直到污渍不再冲走。立即用蒸馏水冲洗。这将限制过度脱色涂片。

添加蕃作为反染色涂片在 30 s。这会弄脏任何革兰氏阴性菌细胞存在。轻轻地用蒸馏水冲洗,用吸水纸弄干。用显微镜观察结果的幻灯片。使用低功耗的目的首先进行粗调整,找到之前转到小领域--意见的更高的放大倍数涂理想部分。

经过进一步成像和调整涂片有中等功率的目的,添加浸油直接涂片。石油被需要高功率目标,将提供最佳显微照片。革兰氏阳性细菌,将出现蓝色或紫色,革兰氏阴性菌细胞会变成红色或粉红色。除了细胞壁结构,阐明了产生显微形状和安排。

革兰氏染色定性研究细菌的能力是重要的科学领域种类繁多。

土壤是细菌分离与分析环境的来源之一。对于饮用水,必须修改样品制备。样品的自来水可以来自一个水龙头,并镀上促进增长的多样化、 异养细菌菌落的生长介质。对电镀 R2A 等介质上,过程是土壤程序几乎相同。

对于某些细菌鉴定技术参数是依赖感兴趣的细菌的细胞壁类型。在此示例中,脓毒症患者的血液进行了测试,并被发现藏有革兰氏阳性细菌。

使用此信息,物种特异性的肽核酸探针被选中,将绑定到细胞的 rRNA。这些探测器被绑定到被用于识别物种存在的荧光染料。

由于革兰氏阳性和阴性的细胞结构的基本差异,细菌有其他化合物结晶紫除了独特的回应。本实验试图孤立艰难梭菌、 革兰氏阳性菌,从粪便样品。环丝氨酸,抑制革兰氏阴性菌细胞的生长,加入琼脂平板。长在板的革兰氏阳性细胞被进一步孤立通过其他方法。

你刚看了革兰氏染色环境研究中心朱庇特的简介。现在,您应该了解过程和如何执行的技术和利用结果的好处。谢谢观赏 !

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