Enlèvement du puparium d’insectes : une méthode d’investigation pupal

-Pour accéder à la pupe en développement, retirez le puparium après que l’épithélium pupal se soit séparé de la cuticule ou après le stade pupal P5. Pour commencer, placez la pupe intacte avec son côté ventral orienté vers vous. Utilisez des forceps pour tenir le puparium à l’espace vide entre l’extrémité antérieure du boîtier et la tête de la pupe. Puis, casser doucement et enlever la pièce antérieure du puparium pour exposer la tête.

Tout en gardant l’orientation ventrale, utilisez les forceps pour créer de petites ruptures le long de l’axe antérieur-postérieur du puparium et assurer un écart continu est formé dans le processus. Veillez à ne pas endommager le tissu pupe directement en dessous. Puis continuez à briser le puparium de l’espace vers l’extérieur, une partie à la fois, et étalez le boîtier déchiré dans le processus. À l’aide d’un pinceau fin humide, ramasser la pupe exposée pour une étude plus approfondie. Dans le protocole exemple, nous verrons comment enlever le puparium de Drosophila guttifera et préparer la pupe pour l’imagerie.

-Pour commencer l’enlèvement du puparium, apposez un morceau de ruban adhésif à double face sur un morceau de papier absorbant. Placez la pupe sur le ruban à double face, côté ventral vers le haut. Placez l’espace entre le côté antérieur du puparium et la pupe interne. Saisissez et retirez le puparium autour de cet espace à l’aide de forceps, et exposez le côté antérieur de la tête de la pupe.

Insérez la pointe d’un forceps en le déplaçant parallèlement à l’axe antérieur-postérieur. Soulevez la pointe des forceps pour briser localement le puparium. Répétez cette action jusqu’à ce que la rupture atteigne la partie postérieure du puparium. Assurez-vous qu’un espace se forme entre le puparium et les pattes pupales, et brisez le côté ventral du puparium tout en minimisant les dommages à la pupe interne. Après avoir cassé le puparium autant que possible, sortez la pupe à l’aide d’un pinceau fin. Placez la pupe sur un morceau de papier de soie humidifié avec du ddH2O et placé dans une boîte en plastique de Petri. Prenez immédiatement des photos car la pupe exposée est vulnérable et sèche facilement.