Indlejring voksendrosophila hoveder i paraffin: Forberedelse væv til histologi

- For at immobilisere fluer til paraffinintegrering skal du forsigtigt skubbe bedøvet Drosophila gennem hullet i en fluekrave, så deres hoveder er ensartet placeret oven på enheden, mens de stadig er fastgjort til resten af kroppen. Til vævsfiksering skal du placere kraverne i Carnoys opløsning.

For at forberede prøven til paraffininfiltration skal du dehydrere vævet ved at overføre kraven gennem graduerede koncentrationer af ethanol.

Dernæst skal du hurtigt placere kraven i en form og hælde smeltet paraffin for at dække det helt. Når paraffinen er hærdet, skal du fjerne blokken fra formen og bruge et barberblad til at trimme overskydende paraffin. Afbryd kraven og forlader rækken af indlejrede hoveder i paraffinblokken. I eksempelprotokollen vil vi se proceduren demonstreret til analyse af neurodegenerative fænotyper.

- Til at begynde med skal du først bruge pincet til at gevind motivet flyver i nakken ind i kraverne. Juster alle hoveder i samme retning og sørg for, at der ikke opstår skader på hoved eller øjne.

Registrer rækkefølgen af fluerne sammen med kravenummeret, hvis der bruges mere end én. Når en krave er færdig, skal du placere den i Carnoys opløsning i 3,5 til 4 timer. Udfør en række ethanol, methylbenzenat og paraffinvask for at forberede fluevævet til indlejring.

Hæld forsigtigt smeltet paraffin over kraverne og undgå luftbobler og lad det hærde natten over. Fjern paraffinblokkene, der indeholder kraverne, fra bakken. Adskil paraffinblokken fra kraven ved hjælp af et barberblad, og afbryd forsigtigt kraven.