Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Per immobilizzare le mosche per l'incorporamento della paraffina, spingere con attenzione la Drosophila anestetizzata attraverso lo spazio di un collare di mosca in modo che le loro teste siano posizionate uniformemente sopra il dispositivo mentre sono ancora attaccate al resto del corpo. Per la fissazione dei tessuti, posizionare i collari nella soluzione di Carnoy. Carnoy's è un agente di fissazione denaturante composto da etanolo, cloroformio e acido acetico.
Per preparare il campione per l'infiltrazione di paraffina, disidratare il tessuto trasferendo il collare attraverso concentrazioni graduate di etanolo. Quindi, trasferire il collare in benzoato di metile, un solvente organico. Successivamente, posizionarlo in una soluzione di benozoato metilico e paraffina fusa mentre viene riscaldato per garantire che la paraffina rimanga sciolta. Procedere a un'elaborata serie di passaggi di lavaggio con paraffina preriscaldata da sola per rimuovere il benzoato di metile.
- Per iniziare, in primo luogo, utilizzare le forcelle per infilare il soggetto vola per il collo nei collari. Allineare tutte le teste nello stesso orientamento e assicurarsi che non si verifichino danni alla testa o agli occhi. Includere mosche sine oculis senza occhi in posizioni note casuali in modo che l'ordine delle mosche possa essere facilmente identificato nelle sezioni. Inoltre, se il ceppo di volo di interesse ha occhi chiari o bianchi, infilare mosche dagli occhi rossi a intervalli lungo la striscia per garantire che sia presente un pigmento sufficiente per macchiare lo scivolo.
Registrare l'ordine delle mosche insieme al numero del collare se ne vengono utilizzate più di una. Una volta terminato un collare, posizionarlo nella soluzione di Carnoy per 3,5-4 ore. Eseguire una serie di lavaggi di etanolo, benzoato di metile e paraffina per preparare il tessuto di mosca per l'incorporamento. Successivamente, posizionare i collari in un vassoio del cubo di ghiaccio di gomma uno per sezione.
