Incorporando cabeças de drosophila adultas em parafina: preparando tecido para histologia

- Para imobilizar moscas para a incorporação de parafinas, empurre cuidadosamente drosophila anestesiada através da abertura de uma coleira de mosca para que suas cabeças estejam uniformemente posicionadas em cima do dispositivo enquanto ainda estão presas ao resto do corpo. Para fixação tecidual, coloque as coleiras na solução de Carnoy. Carnoy é um agente de fixação de desnaturação composto por etanol, clorofórmio e acético.

Para preparar a amostra para infiltração de parafina, desidratar o tecido transferindo a coleira através de concentrações classificadas de etanol. Em seguida, transfira a coleira para metil benzoato, um solvente orgânico. Em seguida, coloque-o em uma solução de metil benozoato e parafina derretida enquanto aquecido para garantir que a parafina permaneça derretida.

Em seguida, coloque rapidamente a coleira em um molde e despeje a parafina derretida para cobri-la completamente. Uma vez que a parafina tenha endurecido, remova o bloco do molde e use uma lâmina de barbear para aparar o excesso de parafina. Quebrar a coleira deixando a linha de cabeças embutidas no bloco de parafina. No protocolo de exemplo, veremos o procedimento demonstrado para a análise de fenótipos neurodegenerativos.

- Para começar, primeiro, use fórceps para enfiar o sujeito voa pelo pescoço para os colares. Alinhe todas as cabeças na mesma orientação e garanta que não ocorra nenhum dano à cabeça ou aos olhos. Inclua moscas sem olhos para as moscas conhecidas aleatoriamente para que a ordem das moscas possa ser facilmente identificada nas seções. Além disso, se a tensão de mosca de interesse tiver olhos claros ou brancos, rosqueia moscas de olhos vermelhos em intervalos ao longo da tira para garantir que o pigmento suficiente seja facilmente identificado nas seções. Além disso, se a tensão de mosca de interesse tiver olhos claros ou brancos, rosque as moscas de olhos vermelhos em intervalos ao longo da tira para garantir que o pigmento suficiente seja facilmente identificado nas seções.

Registo a ordem das moscas junto com o número da coleira se mais de uma for usada. Uma vez que uma coleira esteja terminada, coloque-a na solução de Carnoy por 3,5 a 4 horas. Realize uma série de lavagens de etanol, metil benzoato e parafina para preparar o tecido de mosca para incorporar. Em seguida, coloque as coleiras em uma bandeja de gelo de borracha uma por seção.

Despeje suavemente a parafina derretida sobre as coleiras evitando bolhas de ar e deixe endurecer durante a noite. Remova os blocos de parafina contendo os colares da bandeja.