Taste Preference Assay: Eine Methode zur Messung des Fütterungsverhaltens bei Drosophila

- Um den Geschmackspräferenz-Assay durchzuführen, verwenden Sie eine Kammer, zum Beispiel eine Petrischale in gleiche Abschnitte unterteilt. Wenn Sie die Wahl zwischen zwei Lösungen mit unterschiedlichen Geschmacksrichtungen messen, beschriften Sie eine in rot und die andere in blau mit geschmacklosen Lebensmittelfarbstoffen. Legen Sie dann gleichmäßig verteilte Tropfen jeder Lösung entlang des Rands der Schale über abwechselnde Abschnitte.

Nun fügen Sie anästhetisierte und zuvor verhungerte Fliegen in die Mitte der Kammer und decken Sie die Schale. Führen Sie das Experiment im Dunkeln, um mögliche Farbverzerrung auszuschließen, und inkubieren bei 25 Grad Celsius über einen bestimmten Zeitraum. Wenn Sie die Wahl zwischen zwei Lösungen, mehr Probanden bevorzugen, um Lösungen zu konsumieren, deren Geschmack attraktiver ist, zum Beispiel, süß, während aversive Optionen wie bittere Lösungen zu vermeiden.

Um das Fütterungsverhalten und die Geschmackspräferenz zu messen, vergleichen Sie die Anzahl der Fliegen mit verschiedenen farbigen Bauchmuskeln. Im Beispielprotokoll werden wir eine Demonstration des Geschmackspräferenz-Assays sehen, der die Wahl zwischen verschiedenen Saccharoselösungen misst.

- Um das Experiment zu beginnen, sättigen Sie eine Baumwollkugel mit Wasser am Boden einer Standard-Fliegenfläschchen. Als nächstes sammeln Fliegen in Sätzen von 100 Tieren auf einem CO2-Pad, Und fügen Sie dann die Fliegen zu einer vorbereiteten Durchstechflasche. Verwenden Sie eine Wattekugel, um die Fläschchen geschlossen zu sichern. Dann legen Sie die Fläschchen auf ihre Seite in einem umweltkontrollierten Inkubator. Bereiten Sie die Kontrolle Tastant von 1 Millimolar Saccharose durch die Kombination von 10 Mikroliter 100 Millimolar Saccharose Lösung, 13 Mikroliter rote Lebensmittel färbung, und 977 Mikroliter Wasser.

Als nächstes bereiten Sie das experimentelle Tastant von 5 Millimolar Saccharose vor. Erstellen Sie dann die Assaykammern, indem Sie eine 100 Millimeter mal 15 Millimeter Kunststoff Petrischale erhalten und drei 10 Mikroliter-Tropfen Kontrolltastant so nah wie möglich an den Rand der Platte bei 12 Uhr Position platzieren. Legen Sie bei 3 Uhr drei 10-Mikroliter-Tropfen experimentellen Tastants so nah wie möglich an den Rand der Platte. Legen Sie weitere drei Tropfen des Steuertastants an der 6-Uhr-Position. Legen Sie dann weitere drei Tropfen des experimentellen Tastants an der 9-Uhr-Position.

Als nächstes leer eine Durchstechflasche mit 100 verhungerten Fliegen auf ein CO2-Pad gerade lang genug, um alle Tiere zu beästhesieren. Bürsten Sie die Tiere in die Mitte einer vorbereiteten Assaykammer und bedecken Sie sie mit dem Tellerdeckel. Legen Sie die Essayskammer in einen undurchsichtigen Karton. Dann beschriften Sie die Außenseite des Kartons mit dem zustand und dem genotyp, der getestet wird. Bewegen Sie das gesamte Setup in einen Brutkasten. Nach zwei Stunden legen Sie die assay-Kammern, die noch in Kartons enthalten sind, direkt in einen negativen 20 Grad Celsius Gefrierschrank, bis sie quantitiert werden.