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JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

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Ensaio de preferência de sabor

 
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Ensaio de preferência de sabor: um método para medir o comportamento alimentar em Drosophila

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- Para realizar o ensaio de preferência de sabor, use uma câmara, por exemplo, uma placa de Petri dividida em seções iguais. Se medir a escolha entre duas soluções de gostos diferentes, rotule uma em vermelho e outra em azul usando agentes insípidos de colorir alimentos. Em seguida, coloque gotas igualmente espaçadas de cada solução ao longo da borda do prato em seções alternadas.

Agora adicione moscas anestesiadas e antes famintas até o meio da câmara e cubra o prato. Realize o experimento no escuro para excluir o viés de cor potencial, e incubar a 25 graus Celsius durante um período de tempo definido. Quando dada a escolha entre duas soluções, mais sujeitos preferem consumir soluções cujo gosto é mais atraente, por exemplo, doce, ao mesmo tempo evitando opções aversivas como soluções amargas.

Para medir o comportamento alimentar e a preferência de paladar, compare o número de moscas com diferentes abdômens coloridos. No protocolo de exemplo, veremos uma demonstração do ensaio de preferência de sabor que mede a escolha entre várias soluções de sacarose.

- Para começar o experimento, saturar uma bola de algodão com água no fundo de um frasco de mosca padrão. Em seguida, coletar moscas em conjuntos de 100 animais em uma almofada de CO2, e, em seguida, adicione as moscas a um frasco preparado. Use uma bola de algodão para proteger os frascos fechados. Em seguida, coloque os frascos de lado em uma incubadora ambientalmente controlada. Prepare o tastante de controle de 1 milimã de sacarose combinando 10 microliters de 100 mililitros solução de sacarose, 13 microliters de corante de alimentos vermelhos e 977 microliters de água.

Em seguida, prepare o tastant experimental de 5 milialares de sacarose. Em seguida, crie as câmaras de ensaio obtendo uma placa de Petri de plástico de 100 milímetros por 15 milímetros e colocando três gotas de 10 microliter de controle tastant o mais próximo possível da borda da placa na posição das 12 horas. Na posição das 3 horas, coloque três gotas de 10 microliter de tastant experimental o mais próximo possível da borda da placa. Coloque mais três gotas do tastant de controle na posição das 6 horas. Em seguida, coloque outras três gotas do tastant experimental na posição das 9 horas.

Em seguida, um frasco vazio de 100 moscas famintas em uma almofada de CO2 apenas tempo suficiente para anestesiar todos os animais. Escove os animais no meio de uma câmara de ensaio preparada e cubra-os com a tampa do prato. Coloque a câmara de ensaio em uma caixa de papelão opaca. Em seguida, rotule o lado de fora da caixa com a condição e o genótipo sendo testado. Mova toda a configuração para uma incubadora. Após duas horas, coloque as câmaras de ensaio, ainda contidas em caixas de papelão, diretamente em um freezer negativo de 20 graus Celsius até que estejam prontos para a quantitação.

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