Encyclopedia of Experiments: Biology
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- एक बफर समाधान के साथ और वर्दी रोशनी के तहत एक डिश में विच्छेदन प्रदर्शन करते हैं। एक मक्खी, वेंट्रल साइड को डिश में स्थानांतरित करें और तैयारी को पूरी प्रक्रिया में जलमग्न रखें। सूंड के आधार को पकड़ते समय, दोनों को अलग करने के लिए उड़ने वाले सिर को धीरे से शरीर से दूर खींचें। मस्तिष्क मक्खी के सिर की पीठ पर स्थित है, या कौदल की ओर है। इसलिए, अंग को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए विच्छेदन के दौरान कटे के कुछ हिस्सों को पकड़ें।
मस्तिष्क को अलग करने के लिए, एक आंख के मध्यीय किनारे को पकड़ें और पकड़ें और सिर कैप्सूल में एक खोलने के लिए विपरीत दिशा में सूंड खींचें। उस आंख में क्यूटिकल को पकड़े हुए, दूसरी आंख से छल्ली के मध्यीय किनारे को समझें और मस्तिष्क को प्रकट करने के लिए धीरे-धीरे सिर कैप्सूल को सीधे खींच लें। यदि आवश्यक हो, तो अवशिष्ट क्यूटिकल, संलग्न वायु थैली या श्वासनली को साफ करना जारी रखें। उच्च गुणवत्ता की तैयारी ऑप्टिक लोब्स, केंद्रीय मस्तिष्क और एसओजी जैसी संरचनाओं को संरक्षित करेगी। उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम एक ड्रोसोफिला वयस्क मस्तिष्क विच्छेदन का एक विस्तृत प्रदर्शन देखेंगे मशरूम निकायों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया।
- विच्छेदन के लिए सेटअप करने के लिए, एक ठंडे धातु पैड पर या बर्फ पर बैठे पेट्री डिश में ब्याज की एनेस्थेटाइज्ड मक्खियों को रखें। वैकल्पिक रूप से, एक फ्लाई पैड का उपयोग करें जो कार्बन डाइऑक्साइड का उत्सर्जन करता है। इसके बाद, पीटीएन का बुलबुला बनाने के लिए विच्छेदन पकवान के केंद्र में पीटीएन की थोड़ी मात्रा रखें। फिर, एक स्टीरियोमाइक्रोस्कोप के तहत, समान रोशनी के तहत पीटीएन बुलबुले के साथ देखने के क्षेत्र को भरें। अब, मक्खियों में हेरफेर करें ताकि वे पेट से पेट में आ जाएं। संदंश की एक दूसरी जोड़ी, सूंड को समझें और सिर को शरीर से बाहर खींचें।
- Occassionally, सूंड हटा दिया जाएगा, लेकिन सिर शरीर से जुड़ा रहेगा। यदि ऐसा होता है, तो एक रेटिना के मध्यीय किनारे को पकड़ें और सिर को हटाने के लिए पार्श्व बल लागू करें।
- पेट और छाती को त्यागें। इस चरण के दौरान पीटीएन में सिर रखना महत्वपूर्ण है। केंद्रीय मस्तिष्क से वीएनसी तक के कनेक्शनों का विश्लेषण स्पष्ट रूप से इस विधि का उपयोग करके नहीं किया जा सकता है। इसके बाद, क्यूटिकल में केंद्रीय छेद के किनारे पर बाएं रेटिना के मध्यीय किनारे को समझें, और धीरे-धीरे ऑप्टिक लोब के फाड़ को रोकने के लिए एक दूसरे से सीधे संदंश खींचें, जो सफेद, स्ट्रीथ ट्रेकिया द्वारा कवर की गई अपारदर्शी संरचना है।
- मस्तिष्क को फाड़ने से रोकने के लिए, प्रत्येक आंख के मध्यीय किनारे को समझना गंभीर रूप से महत्वपूर्ण है और बहुत धीरे-धीरे संदंश को अलग करता है। बहुत जल्दी चलने से मस्तिष्क आकृति विज्ञान या मस्तिष्क के ऊतकों को नुकसान हो सकता है।
- जैसा कि यहां दिखाया गया है, प्रत्येक जोड़ी संदंश के साथ क्यूटिकल को समझें और बहुत धीरे-धीरे उन्हें विपरीत दिशाओं में खींचें। यदि सही ढंग से किया जाता है, तो क्यूटिकल मस्तिष्क के ऊतकों से अलग होना चाहिए, मस्तिष्क को बरकरार छोड़ना. इस कदम के लिए बहुत तेज संदंश की आवश्यकता होती है. इसके बाद, आस-पास के छल्ली के टुकड़े को ध्यान से हटा दें. हठ पूर्वक संलग्न क्यूटिकल को हटाते समय, मस्तिष्क को कुचलने से बचने के लिए शेष वीएनसी को मनोरंजक बनाकर मस्तिष्क को सुरक्षित करने में मदद मिल सकती है। अंत में, विच्छेदन दिमाग को स्थिरीकरण और इम्यूनोसटेनिंग के लिए पीटीएन से भरे एक कुएं में स्थानांतरित करने के लिए एक P200 पिपेट का उपयोग करें।
