Drosophila ( Drosophila ) Dissection du cerveau adulte : une méthode en neurobiologie volante

- Effectuer la dissection dans un plat avec une solution tampon et sous un éclairage uniforme. Transférer une mouche, côté ventral vers le haut, dans le plat et garder la préparation immergée tout au long de l’intervention. Tout en tenant la base de la trompe, tirez doucement la tête de mouche loin du corps pour séparer les deux. Le cerveau est situé à l’arrière, ou côté caudal, de la tête de la mouche. Par conséquent, accrochez-vous à l’avant, ou rostral, parties de la cuticule pendant la dissection pour éviter d’endommager l’organe.

Pour isoler le cerveau, maintenez le bord médial d’un œil et saisissez et tirez la trompe dans la direction opposée pour créer une ouverture dans la capsule de tête. Tout en tenant la cuticule à cet œil, saisissez le bord médial de la cuticule de l’autre œil et tirez lentement la capsule de la tête directement pour révéler le cerveau. Si nécessaire, continuer à dégager la cuticule résiduelle, sacs d’air attachés, ou trachée. Préparations de haute qualité permettra de préserver des structures comme les lobes optiques, le cerveau central, et SOG. Dans le protocole exemple, nous allons voir une démonstration détaillée d’une dissection du cerveau adulte Drosophila utilisé pour étudier les corps de champignons.

- Pour configurer la dissection, placez les mouches anesthésiées d’intérêt sur un tampon en métal froid ou dans une boîte de Pétri assise sur la glace. Alternativement, utilisez un coussin volant qui émet du dioxyde de carbone. Ensuite, placez une petite quantité de PTN au centre du plat de dissection pour créer une bulle de PTN. Puis, sous un stéréomicroscope, remplissez le champ de vision avec la bulle PTN sous un éclairage uniforme. Maintenant, manipulez les mouches de sorte qu’elles soient en ventre vers le haut, et transférez-en une par l’abdomen dans le PTN. Submergez complètement l’animal dans le PTN et exécutez la dissection entière submergée dans PTN. Avec une deuxième paire de forceps, saisir la trompe et retirer la tête du corps.

- Occasionnellement, la trompe sera enlevée, mais la tête restera attachée au corps. Si cela se produit, saisir le bord médial d’une rétine et appliquer la force latérale pour enlever la tête.

- Jeter l’abdomen et le thorax. Il est essentiel de garder la tête dans le PTN pendant cette étape. Les connexions du cerveau central au VNC ne peuvent clairement pas être analysées à l’aide de cette méthode. Ensuite, saisissez le bord médial de la rétine gauche au bord du trou central dans la cuticule, et tirez lentement les forceps directement les uns des autres pour empêcher le déchirement du lobe optique, qui est la structure opaque couverte par la trachée blanche et filandreuse. Comme la rétine se dissocie, il y aura une légère diminution de la tension.

- Afin d’empêcher le cerveau de se déchirer, il est d’une importance cruciale de saisir le bord médial de chaque œil et de tirer très lentement les forceps à part. Se déplacer trop rapidement peut entraîner une modification de la morphologie du cerveau ou des dommages aux tissus cérébraux.

- Comme indiqué ici, saisissez la cuticule avec chaque paire de forceps et tirez-les très lentement dans des directions opposées. Si elle est faite correctement, la cuticule doit se séparer du tissu cérébral, laissant le cerveau intact. Des forceps très tranchants sont nécessaires pour cette étape. Ensuite, retirez soigneusement la cuticule environnante pièce par pièce. Tout en enlevant la cuticule obstinément attachée, elle peut aider à fixer le cerveau en saisissant le VNC restant pour éviter d’écraser le cerveau. Enfin, utilisez une pipette P200 pour transférer les cerveaux disséqués dans un puits d’une plaque remplie de PTN pour la fixation et l’immunostaining.