Cuticle Disruption: Eine Methode, um Hämolymphe von Drosophila Larven zu sammeln

- Zum Starten, Pipette einen Tropfen Puffer auf ein sauberes Sezieren Pad. Dann legen Sie eine getrocknete lebende Larve auf das Tröpfchen. Drosophila, wie andere Arthropoden, hat ein offenes Kreislaufsystem, in dem das Herz Pumphemolymphe um den Körper pumpt, die inneren Organe baden. Um die Hämolymphe, die das kombinierte Blut und interstitielle Flüssigkeit von Arthropoden ist, verwenden Zangen und öffnen Sie die Nagelhaut, die halbstarre äußere Abdeckung der Larven.

Dann entsorgen Sie den Kadaver und übertragen Sie die Hämolymphlösung von der Sezierenderplatte in eine gekühlte Pufferlösung in einem Mikrozentrifugenrohr. Schließlich verwenden Sie ein Hämozytometer, um die Anzahl der Hämozyten, die Zellen in der Hämolymphe, die gesammelt wurden, zu zählen. In diesem Protokoll werden wir Hämolymphe von Drosophila melanogaster Larven sammeln.

- Beginnen Sie die Hämolymphe-Sammlung, indem Sie 10 Mikroliter 1x PBS zu einem Mikrozentrifugenrohr hinzufügen und das Rohr auf Eis legen. Als nächstes legen Sie einen 10-Mikroliter-Tropfen von 1x PBS auf ein sauberes Sezierpad. Wählen Sie eine einzelne Larve aus, und trocknen Sie sie, indem Sie sie auf ein Gewebetuch legen.

Mit Zangen, reißen Sie die Nagelhaut sanft auf und invertieren Sie die Häminus, und entsorgen Sie dann den Kadaver. Mit einer Pipette, sammeln Sie die Hämolymphe aus dem Sezieren Pad. Fügen Sie die Hämolymphe in das vereisten PBS-Mikrozentrifugerohr, und mischen Sie durch Pipettieren nach oben und unten. Laden Sie 10 Mikroliter der Probe in eine Hämozytometerkammer und nehmen Sie eine Konzentrationsmessung.