四方嗅覚計アッセイ:ショウジョウバエにおける臭気・カド反応を評価する方法

- 4方向のオルファクトメーターは、各コーナーに一方通行のポートを備えた閉じたチャンバーで、最大4つの臭気を引き起こし、異なる臭いプロファイルを持つ象限を作り出します。

ハエをきれいな空気にさらし、臭気が嗅覚計を汚染し、フライの挙動に影響を与えないように動きを観察してください。その後、テスト臭気剤を別々のバイアルで準備し、一方通行のポートを通してメインチャンバーに接続します。

ハエは、魅力的な臭気を伴う象限に向かって移動し、落ち着きながら、忌避臭を伴う象限を避ける傾向があります。

次のプロトコルでは、空気送達システムを備えた4象限嗅覚計を使用して、エチルプロピオン酸エチルプロピオン酸、忌避臭剤、リンゴサイダー酢に応答してフライ挙動を分析します。

- 少なくとも5分前に温度コントローラのスイッチを入れ、25°Cに設定し、プラスチックチューブを介してアリーナに臭気室を接続します。

- ハエは気流に非常に敏感であり、各実験の前に各象限の気流を検証することが重要です。

- さて、70%エタノールを使ってアリーナとガラス板をきれいにしてください。すべての部分を2〜3回拭いて完全に空気乾燥させてから進みます。次に、ガラス板をアリーナにクランプします。

さて、フライロードされたアリーナをライトタイトな部屋に置き、次に4つの制御空気の流れを各アリーナコーナーに接続します。

順応期間の後、ハエが4つの制御空気の流れにさらされる5〜10分の制御実験を実行します。今すぐデータを分析することが不可欠です。アリーナでハエが均等に分布していない場合は、アリーナをリセットする必要があります。

- コントロールハエの挙動をきれいな空気にテストすることが重要です。これはすべてのバックグラウンド条件が正常であることを迅速に確認します。光、温度の不均衡、傾斜したアリーナ、または臭い汚染がすべて問題を引き起こす可能性があります。

- 必要に応じて、ハエを捨て、再びアリーナをきれいにします。臭気汚染が疑われる場合は、すべてのチューブを交換してください。動物が4つの象限のいずれにも好みを示さないまで、コントロールテストを新しいコホートで繰り返し続けます。

テストの合間にハエを捨て、70%エタノールでアリーナとガラスプレートを清掃し、コネクタチューブを交換してください。

- 同じ日に複数の実験を行う場合は、以前の実行からシステムに臭いが残らないように細心の注意を払ってください。これは通常、低濃度の臭気やCO2の問題ではありません。